生物化學(xué)實驗課程教學(xué)大綱課程編號：10021680課程名稱：生物化學(xué)實驗/ExperimentofBiochemistry課程屬性：必修實驗屬性：獨立設(shè)課開課學(xué)期：3學(xué)時：36適用專業(yè)：制藥工程學(xué)分：1.5開課部門：化學(xué)與生物工程學(xué)院考核要求：考試成績70%+實驗報告20%+實驗操作10%課程簡介：生物化學(xué)實驗教學(xué)以學(xué)生在實驗室的實踐為主，發(fā)揮學(xué)生的主體作用，使學(xué)生掌握一般生物化學(xué)實驗中最常用的分離分析方法以及相應(yīng)儀器的使用，掌握實驗原理和操作方法，使學(xué)生得到生物化學(xué)實驗技能訓(xùn)練，通過實驗內(nèi)容的學(xué)習(xí)，要求學(xué)生掌握生化常用實驗方法的基本原理與基本技術(shù)，能正確使用生化儀器，學(xué)會生化實驗的基本操作技術(shù)，以嚴(yán)謹(jǐn)求實的科學(xué)態(tài)度完成各項生化實驗，并能用生化知識正確解釋實驗中出現(xiàn)的各種現(xiàn)象。1．遵守實驗室規(guī)則，愛護(hù)實驗儀器設(shè)備。認(rèn)真對待每一次實驗。2．為保證實驗教學(xué)效果，學(xué)生上課前必須認(rèn)真預(yù)習(xí)實驗，并寫出預(yù)習(xí)報告。3．實驗操作要細(xì)心謹(jǐn)慎，嚴(yán)格遵守操作規(guī)則，注意安全。要做好實驗記錄，認(rèn)真完成實驗報告。4．實驗完畢，注意關(guān)閉水、電、燈、窗。一、實驗項目設(shè)置及學(xué)時分配項目編號實驗項目名稱實驗類型開出要求學(xué)時分配紙層析法分離鑒定氨基酸驗證必做4酪蛋白的制備及緩沖液的配制驗證必做4蛋白質(zhì)的等電點測定和沉淀反應(yīng)驗證必做4考馬斯亮蘭法測定蛋白質(zhì)濃度驗證必做4血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳及定量測定驗證必做4酵母核酸的提取、鑒定和定量測定驗證必做4過氧化氫酶米氏常數(shù)的測定驗證必做4血糖的定量測定驗證必做4總糖的測定驗證必做4多酚氧化酶的提取、純化和活力測定驗證選做4SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質(zhì)綜合選做6凝膠過濾層析法測定蛋白質(zhì)分子量設(shè)計選做6高壓液相層析肽譜分析創(chuàng)新選做6學(xué)時總計36二、實驗內(nèi)容及教學(xué)要求實驗項目1：紙層析法分離鑒定氨基酸1、教學(xué)內(nèi)容紙層析法的基本原理及操作方法。2、教學(xué)目標(biāo)（1）了解：層析的原理和種類。（2）熟悉：紙層析法分離鑒定氨基酸的點樣、顯色等操作技能。（3）掌握：極性氨基酸、非極性氨基酸的Rf值大小與影響因素。實驗項目2：酪蛋白的制備及緩沖液的配制1、教學(xué)內(nèi)容酪蛋白的制備原理和方法。2、教學(xué)目標(biāo)（1）了解：牛乳中主要的蛋白質(zhì)種類。（2）熟悉：等電點沉淀法的原理及操作。（3）掌握：酪蛋白粗制品的制備。實驗項目3：蛋白質(zhì)的等電點測定和沉淀反應(yīng)1、教學(xué)內(nèi)容學(xué)習(xí)測定蛋白質(zhì)等電點和沉淀蛋白質(zhì)的方法。2、教學(xué)目標(biāo)（1）了解：沉淀蛋白質(zhì)的原理和方法種類。（2）熟悉：蛋白質(zhì)等電點測定和蛋白質(zhì)沉淀教學(xué)實驗的原理及操作。（3）掌握：蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系，加深對蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素的認(rèn)識。實驗項目4：考馬斯亮蘭法測定蛋白質(zhì)濃度1、教學(xué)內(nèi)容考馬斯亮蘭法測定蛋白質(zhì)濃度的原理和方法。2、教學(xué)目標(biāo)（1）了解：分光光度技術(shù)的原理和操作。（2）熟悉：考馬斯亮蘭法測定蛋白質(zhì)濃度的操作技能。（3）掌握：標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作及樣品測定。實驗項目5：血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳及定量測定1、教學(xué)內(nèi)容血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳及定量測定。2、教學(xué)目標(biāo)（1）了解：血清蛋白的電泳分類和血清蛋白構(gòu)成比的臨床意義。（2）熟悉：血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳的原理與操作。（3）掌握：血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳的操作技能。實驗項目6：酵母核酸的提取、鑒定和定量測定1、教學(xué)內(nèi)容學(xué)習(xí)酵母RNA提取和定量測定的原理和方法。2、教學(xué)目標(biāo)（1）了解：RNA和DNA提取鑒定的原理和操作。（2）熟悉：酵母RNA提取鑒定的操作技能。（3）掌握：RNA和DNA染色反應(yīng)的不同。實驗項目7：過氧化氫酶米氏常數(shù)的測定1、教學(xué)內(nèi)容學(xué)習(xí)Km測定的原理和操作。2、教學(xué)目標(biāo)（1）了解：實驗的基本原理。（2）熟悉：Km測定的原理和操作。（3）掌握：Km的雙倒數(shù)求解法。實驗項目8：血糖的測定1、教學(xué)內(nèi)容學(xué)習(xí)用葡萄糖氧化酶法測定血糖含量。2、教學(xué)目標(biāo)（1）了解：實驗的基本原理。（2）熟悉：分光光度法的操作。（3）掌握：葡萄糖參考值的臨床意義。實驗項目9：總糖的測定1、教學(xué)內(nèi)容學(xué)習(xí)用蒽酮比色法測定總糖含量。2、教學(xué)目標(biāo)（1）了解：實驗的基本原理。（2）熟悉：分光光度法的操作。（3）掌握：標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作三、考核方式及要求單獨考核，期末進(jìn)行筆試或操作考核（占總成績的70%。），實驗報告占總成績20%，平時課堂表現(xiàn)占10%四、主要儀器設(shè)備及實驗材料項目編號實驗項目名稱主要儀器設(shè)備及臺（套）數(shù)實驗材料備注紙層析法分離鑒定氨基酸層析缸、真空恒溫干燥箱、吹風(fēng)機(jī)、噴霧器點樣毛細(xì)管、新華一號濾紙、茚三酮、正丁醇、氨基酸等酪蛋白的制備及緩沖液的配制離心機(jī)、電磁爐或電熱板、恒溫水浴箱、循環(huán)水真空泵、抽濾瓶牛奶、溫度計、醋酸鈉、乙醇、乙醚、醋酸蛋白質(zhì)的等電點測定和沉淀反應(yīng)試管及試管架、溫度計、吸管、l錐型瓶、容量瓶、乳缽、恒溫水浴鍋酪蛋白醋酸鈉溶液、醋酸溶液、醋酸—醋酸鈉緩沖液、硝酸銀溶液、氯化鋇溶液等考馬斯亮蘭法測定蛋白質(zhì)濃度紫外可見光分光光度計、電子天平、微量移液器或微量取樣器考馬斯亮蘭G—250、酪蛋白、牛血清白蛋白血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳及定量測定雙穩(wěn)電泳儀、多用途電泳槽醋酸纖維薄膜、巴比妥、巴比妥鈉、血清、氨基黑、甲醇、冰醋酸、NaOH酵母核酸的提取、鑒定和定量測定恒溫水浴箱、循環(huán)水真空泵、抽濾瓶干酵母粉、NaOH、乙酸、乙醇、磷酸、濃氨水、地衣酚試劑、硝酸銀溶液、鉬酸銨試劑過氧化氫酶米氏常數(shù)的測定錐形瓶、滴定管、秒表、電冰箱新鮮血液、高錳酸鉀、H2O2溶液血糖的定量測定紫外可見光分光光度計、試管、試管架、恒溫水浴、微量吸血管血糖試劑盒總糖的測定紫外可見光分光光度計、移液器、沸水浴、冰浴蒽酮、濃硫酸、葡萄糖五、教材及參考書1、《生物化學(xué)