甲基化分析務(wù)報(bào)告書1樣信1.1.共2樣品，樣本名稱參照管上的原始編號公編

基編

樣類物

組

細(xì)

溶液Wnt4-1Wnt4-2Wnt4-3Wnt4-4Wnt4-5Wnt4-6

小鼠小鼠小鼠小鼠小鼠小鼠

√√√√√√2服內(nèi)檢測，BSP實(shí)驗(yàn)3驗(yàn)容3.1基因DNA的檢3.2BSP實(shí)驗(yàn)（1）亞硫酸鹽處理及純化（QIAGEN，cat：操作步驟：嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，取基因組行亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化并純化回收。（2）引物的設(shè)（加粗斜體下劃線部分為引物位置）Tcttttccttagttgagaataccactcactgtgaatttgcttacctgcgggatctccttatcagctgggggttggtggtggtagatgggcgggaaaggccccaccctggccgcctgatgtcagccctgttctcgggaactgagctgaaaacaagctaagaaacctgggaatggatgaagaaatgaggattctttctaacctttcgaagtcaccaggatgagaggggctccatccggtccccagtgggctaaacatgctagattcagctatggctactgtccacacagcacagcctggactatatgtcccaaacaaaactaacaaactaaaagaaaaaaatatacattagtagaaaaagtcctgcc：GTGAGTTAGTTTTGAAGGTTTTTTG：TTTTTCTTTTAATTTATTAATTTTATTTAAPCR產(chǎn)物大小：312bp（3）PCR擴(kuò)增：系PCR體（50μl）cat2×PCRMix上游引物（）下游引物（）模板水

25μl補(bǔ)至50μl1

反應(yīng)程序：℃℃℃

4min30s30s

40cycles℃℃

40s5min（4）克隆與測序PCR產(chǎn)物純化：按照試劑盒中的產(chǎn)品說明操作，將目標(biāo)片段割膠純化Generay，cat：GK2043連接T載體：采用的pTG19-T（：GV6021）作為載體，按照試劑盒中的產(chǎn)品說明操作。轉(zhuǎn)化采用XL10-Gold感受態(tài)，按照產(chǎn)品說明進(jìn)行轉(zhuǎn)化、復(fù)蘇和涂板。酶切法鑒定陽性菌落挑取質(zhì)粒送測序，具體如下：樣品編

克隆測號（個(gè)）Wnt4-150Wnt4-210Wnt4-3Wnt4-4Wnt4-5Wnt4-6

152020154

實(shí)結(jié)4.1DNA質(zhì)量檢a）測定樣品在和280nm的吸收值確定的質(zhì)量（儀超微量紫外可見分光光度儀內(nèi)容見下表公司編Abs260

260/280

樣品濃ng/ulWnt4-1Wnt4-2Wnt4-3Wnt4-4Wnt4-5Wnt4-6

0.3

1.9

15.000223.2287b）進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，確定抽提的完整性。2

4.2序果分展（Wnt4-111111111101111011111101111101111101