wang植物細(xì)胞工程第1頁/共140頁細(xì)胞工程

指應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的原理和方法，通過某種工程學(xué)手段，在細(xì)胞水平或細(xì)胞器水平上，按照人們的意愿來改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞產(chǎn)品的一門綜合科學(xué)技術(shù)。

應(yīng)用的原理和方法研究的水平研究的目的細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)細(xì)胞水平或細(xì)胞器水平按照人們的意愿來改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞產(chǎn)品第2頁/共140頁

植物細(xì)胞工程

動(dòng)物細(xì)胞工程根據(jù)操作對(duì)象的不同,可分為:第3頁/共140頁2.1.1植物細(xì)胞工程的基本技術(shù)植物組織培養(yǎng)技術(shù)植物體細(xì)胞雜交技術(shù)2.1

植物細(xì)胞工程第4頁/共140頁為什么植物的一個(gè)花瓣就可以培育出完整的植株呢？第5頁/共140頁回憶、思考1、一個(gè)花瓣培養(yǎng)成完整植株的理論基礎(chǔ)是什么？植物細(xì)胞具有全能性2、什么叫做細(xì)胞全能性？具有某種生物全部遺傳信息的任何一個(gè)細(xì)胞,都具有發(fā)育成完整生物體的潛能,即每個(gè)細(xì)胞都具有全能性。3、植物細(xì)胞能表現(xiàn)出全能性的原因是什么？生物體的任何一個(gè)細(xì)胞都包含有該物種所特有的全套遺傳物質(zhì)，都有發(fā)育成為完整個(gè)體所必需的全部基因，從理論上講，生物體的每一個(gè)活細(xì)胞都應(yīng)該具有全能性。

第6頁/共140頁4、動(dòng)物細(xì)胞有全能性嗎？生物體所有細(xì)胞全能性都一致嗎？受精卵>生殖細(xì)胞>體細(xì)胞;植物細(xì)胞>動(dòng)物細(xì)胞胚胎干細(xì)胞＞其他干細(xì)胞＞體細(xì)胞5、為什么植物的花瓣在植物體內(nèi)沒有能發(fā)育成完整的植株，而是分化成不同的組織器官？Ａ．細(xì)胞失去了全能性Ｂ．細(xì)胞中的基因部分丟失Ｃ．細(xì)胞中的基因進(jìn)行選擇性表達(dá)Ｄ．細(xì)胞中的基因變異不同

在生物體內(nèi)，在特定的時(shí)間和空間條件下，細(xì)胞基因的選擇性表達(dá)，細(xì)胞不能表現(xiàn)出全能性，而是分化成為不同的組織器官。第7頁/共140頁植物的花瓣是怎樣長(zhǎng)成一株完整的植株呢？第8頁/共140頁植物組織培養(yǎng)的過程離體的植物器官、組織或細(xì)胞植物體愈傷組織脫分化根、芽再分化脫分化:讓已經(jīng)分化的細(xì)胞,經(jīng)過誘導(dǎo)后,失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細(xì)胞的過程.愈傷組織:由一團(tuán)排列疏松而無規(guī)則,高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞組成.再分化:脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng),又可以重新分化成根或芽等器官,這個(gè)過程叫做再分化.外植體植物激素：特別是細(xì)胞分裂素、生長(zhǎng)素第9頁/共140頁例題辨析：

下列有關(guān)細(xì)胞全能性的含義，正確的是：A、每個(gè)生物體內(nèi)的所有細(xì)胞都具有相同的功能B、生物體內(nèi)的任何一個(gè)細(xì)胞可以完成該個(gè)體的全部功能C、生物體的每一個(gè)活細(xì)胞都具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能D、生物體的每個(gè)細(xì)胞都經(jīng)過產(chǎn)生、分裂、分化、生長(zhǎng)、衰老、死亡的全過程C第10頁/共140頁一、植物組織培養(yǎng)技術(shù)第11頁/共140頁過程

一制備固體培養(yǎng)基

五移栽

四培養(yǎng)三接種（4）二胡蘿卜處理與消毒（1，2，3）第12頁/共140頁一、植物組織培養(yǎng)技術(shù)1、植物組織培養(yǎng)技術(shù)的過程1.植物細(xì)胞表現(xiàn)出全能性的條件有哪些？2.在植物組培過程中，為什么要進(jìn)行一系列的消毒，滅菌，并且要求無菌操作？3、為什么切取胡蘿卜根的形成層，其他部分也能培養(yǎng)成小植株嗎？4、為什么誘導(dǎo)愈傷組織的過程中應(yīng)避光培養(yǎng)？5、請(qǐng)同學(xué)們根據(jù)上述過程概括出植物組織培養(yǎng)技術(shù)的流程圖，并與同學(xué)交流。第13頁/共140頁1.植物細(xì)胞表現(xiàn)出全能性的條件有哪些？2.在植物組培過程中，為什么要進(jìn)行一系列的消毒，滅菌，并且要求無菌操作？3、為什么切取胡蘿卜根的形成層，其他部分也能培養(yǎng)成小植株嗎？細(xì)胞離體、一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件(適宜的溫度、濕度、光照、PH值、無菌條件）避免雜菌在上面迅速生長(zhǎng)消耗營(yíng)養(yǎng)，且有些雜菌會(huì)危害培養(yǎng)物的生長(zhǎng)。想一想胡蘿卜根形成層容易誘導(dǎo)成愈傷組織，其他部分如葉、花也能培養(yǎng)成小植株，只是稍微困難些。第14頁/共140頁4、為什么誘導(dǎo)愈傷組織的過程中應(yīng)避光培養(yǎng)？5、請(qǐng)同學(xué)們根據(jù)上述過程概括出植物組織培養(yǎng)技術(shù)的流程圖，并與同學(xué)交流。在有光時(shí)，往往容易形成維管組織，而不易形成愈傷組織。第15頁/共140頁植物材料消毒接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)出愈傷組織直接誘導(dǎo)分化愈傷組織接種到分化培養(yǎng)基上分化出幼苗完整植株幼苗接種到生根培養(yǎng)基上移栽到大田愈傷組織轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基上得到大量的愈傷組織第16頁/共140頁植物組織培養(yǎng)在無菌和人工控制條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。原理：植物細(xì)胞的全能性第17頁/共140頁植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基定義：含有一定營(yíng)養(yǎng)成分，供組織培養(yǎng)植物生長(zhǎng)的基質(zhì)

無機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分：C，H，O大量元素及部分微量元素

有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分

①含N物質(zhì)：包括維生素和氨基酸②碳源：2%—5%的蔗糖③瓊脂：起支持作用④生長(zhǎng)激素：生長(zhǎng)素，細(xì)胞分裂素和赤霉素

PH值：5.0－6.0第18頁/共140頁切取形成層無菌接種誘導(dǎo)愈傷組織的形成試管苗的形成培養(yǎng)室移栽脫分化再分化第19頁/共140頁外植體植物體脫分化再分化（二）、植物組織培養(yǎng)（分化）（未分化）（分化）幼芽或幼根？條件？?jī)?yōu)點(diǎn)？特點(diǎn)？繁殖速度快不受季節(jié)限制幼苗無毒保持優(yōu)良性狀①適宜溫度和無菌環(huán)境。②無機(jī)、有機(jī)成分和植物激素（生長(zhǎng)素，細(xì)胞分裂素）排列疏松、無規(guī)則高度液泡化薄壁細(xì)胞分化程度低去分化較易離體的植物器官、組織或細(xì)胞愈傷組織根、芽小結(jié)第20頁/共140頁1972年卡爾森等通過兩個(gè)煙草品種之間原生質(zhì)體的融合，獲得了第一個(gè)體細(xì)胞雜種。背景資料1978年梅爾徹斯(Melchers)等首次獲得了番茄和馬鈴薯的屬間體細(xì)胞雜種——“Potamato”。

目前，已得到栽培煙草與野生煙草、栽培大豆與野生大豆、秈稻與野生稻、秈稻與粳稻、小麥與鵝冠草等細(xì)胞雜種及其后代，獲得了有價(jià)值的新品系或育種上有用的新材料。二、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)第21頁/共140頁第22頁/共140頁1、定義：

將不同的植物體細(xì)胞,在一定條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種細(xì)胞培育成新的植物體的技術(shù)。2、優(yōu)勢(shì)：（與有性雜交方法比較）

打破了不同種生物間的生殖隔離限制，大大擴(kuò)展了可用于雜交的親本組合范圍。植物體細(xì)胞雜交第23頁/共140頁植物A細(xì)胞植物B細(xì)胞去壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合融合體再生壁雜種細(xì)胞細(xì)胞分裂愈傷組織雜種植株去壁的常用方法：酶解法（纖維素酶、果膠酶等）

原生質(zhì)體融合方法：物理法：離心、振動(dòng)、電刺激等化學(xué)法：聚乙二醇（PEG）植物體細(xì)胞雜交過程示意圖第24頁/共140頁雜種細(xì)胞愈傷組織雜種植株植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B

原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B正在融合的原生質(zhì)體植物體細(xì)胞的雜交去壁去壁人工誘導(dǎo)再生壁脫分化再分化第25頁/共140頁過程：

細(xì)胞融合（細(xì)胞膜的流動(dòng)性）

植物組織培養(yǎng)（植物細(xì)胞全能性）雜種細(xì)胞形成的標(biāo)志：新細(xì)胞壁的形成植物體細(xì)胞雜交技術(shù)完成的標(biāo)志：得到雜種植株屬于無性繁殖，變異類型為染色體變異。特點(diǎn)：克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。二、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)第26頁/共140頁植物體細(xì)胞雜交尚未解決的問題有：A、去掉細(xì)胞壁,分離出有活力的原生質(zhì)體B、將雜種細(xì)胞培育成植株C、讓雜種植物按照人們的需要表現(xiàn)出親代的優(yōu)良性D、尚未培育出屬間雜種植物不能人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法是：A、振動(dòng)B、電刺激、C、PEG試劑、D、重壓3.意義:克服不同生物的遠(yuǎn)源雜交CD第27頁/共140頁所采用技術(shù)的理論基礎(chǔ)

植物細(xì)胞工程通常采用的技術(shù)手段

植物組織培養(yǎng)植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞的全能性第28頁/共140頁1.為什么“番茄—馬鈴薯”超級(jí)雜種植株沒有如科學(xué)家所想像的那樣，地上長(zhǎng)番茄、地下結(jié)馬鈴薯？

主要原因是：生物基因的表達(dá)不是孤立的，它們之間是相互調(diào)控、相互影響的，所以馬鈴薯—番茄雜交植株的細(xì)胞中雖然具備兩個(gè)物種的遺傳物質(zhì)，但這些遺傳物質(zhì)的表達(dá)受到相互干擾，不能再像馬鈴薯或番茄植株中的遺傳物質(zhì)一樣有序表達(dá)，雜交植株不能地上長(zhǎng)番茄、地下結(jié)馬鈴薯就是很自然的了。第29頁/共140頁①體細(xì)胞融合成功后培養(yǎng)基中共有5種細(xì)胞類型(A、B、AA、BB、AB)，其中融合細(xì)胞類型有3種(AA、BB、AB)，而真正符合要求的是AB，因此要對(duì)融合細(xì)胞進(jìn)行篩選。

植物體細(xì)胞雜交過程中的注意問題②植物體細(xì)胞雜交無生殖細(xì)胞的結(jié)合，屬于無性繁殖，變異類型為染色體數(shù)目的變異，仍具有兩個(gè)親本的性狀。第30頁/共140頁③體細(xì)胞雜交不管染色體、基因組還是染色體組都采用直接相加的方法。若一植物細(xì)胞含2X條染色體，兩個(gè)染色體組，基因型為Aabb，另一植物細(xì)胞含2Y條染色體，2個(gè)染色體組，基因型為ccDd，新植物應(yīng)為異源四倍體，其體細(xì)胞染色體為2X+2Y條，4個(gè)染色體組，基因型為AabbccDd④體細(xì)胞雜交技術(shù)不遵循孟德爾遺傳定律，只有在有性生殖進(jìn)行減數(shù)分裂過程中才符合遺傳定律，而體細(xì)胞雜交沒有此過程。第31頁/共140頁歸納

植物組織培養(yǎng)和植物體細(xì)胞雜交的比較第32頁/共140頁第33頁/共140頁2．(2013·天津卷，9)花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定劑量的紫外線處理黑芥原生質(zhì)體可使其染色體片段化，并喪失再生能力。再利用此原生質(zhì)體作為部分遺傳物質(zhì)的供體與完整的花椰菜原生質(zhì)體融合，以獲得抗黑腐病雜種植株。流程如下圖。植物體細(xì)胞雜交技術(shù)第34頁/共140頁據(jù)圖回答下列問題：(1)過程①所需的酶是__________________________________________________。(2)過程②后，在顯微鏡下觀察融合的活細(xì)胞中有供體的________存在，這一特征可作為初步篩選雜種細(xì)胞的標(biāo)志。(3)原生質(zhì)體培養(yǎng)液中需要加入適宜濃度的甘露醇以保持一定的滲透壓，其作用是________________。原生質(zhì)體經(jīng)過________再生，進(jìn)而分裂和脫分化形成愈傷組織。(4)若分析再生植株的染色體變異類型，應(yīng)剪取再生植株和________植株的根尖，通過________、________、染色和制片等過程制成裝片，然后在顯微鏡下觀察比較染色體的形態(tài)和數(shù)目。纖維素酶和果膠酶葉綠體保持原生質(zhì)體完整性細(xì)胞壁雙親(或花椰菜和黑芥)解離漂洗第35頁/共140頁(5)采用特異性引物對(duì)花椰菜和黑芥基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到兩親本的差異性條帶，可用于雜種植株的鑒定。下圖是用該引物對(duì)雙親及再生植株1～4進(jìn)行PCR擴(kuò)增的結(jié)果。據(jù)圖判斷，再生植株1～4中一定是雜種植株的有________。(6)對(duì)雜種植株進(jìn)行________接種實(shí)驗(yàn)，可篩選出具有高抗性的雜種植株。1、2、4

黑腐病菌第36頁/共140頁植物細(xì)胞工程的實(shí)際應(yīng)用第37頁/共140頁一.植物繁殖新途徑

１微型繁殖技術(shù)概念:是快速高效實(shí)現(xiàn)種苗繁植,培育優(yōu)良植物品種的植物組織培養(yǎng)技術(shù).第38頁/共140頁特點(diǎn):①繁殖速度快；②保持親本的優(yōu)良性狀；③不受自然生長(zhǎng)季節(jié)的限制（因?yàn)樵诰哂幸欢ㄈ斯ぴO(shè)施的室內(nèi)生產(chǎn)）。第39頁/共140頁

生姜是藥食兩用的經(jīng)濟(jì)作物，具有栽培容易、產(chǎn)量高、價(jià)格高等特點(diǎn)，近年在各地發(fā)展很快。但是生姜在生產(chǎn)上長(zhǎng)期采用無性繁殖，容易感染多種病毒病，使生姜品質(zhì)變差，葉子皺縮，生長(zhǎng)緩慢，一般減產(chǎn)30%～50%。設(shè)計(jì)無病毒生姜幼苗的培育方案案例一第40頁/共140頁作物脫毒材料:分生區(qū)的細(xì)胞（病毒極少或者無病毒）作物脫毒方法:進(jìn)行組織培養(yǎng)結(jié)果:脫毒苗2.作物脫毒第41頁/共140頁

誘導(dǎo)植物愈傷組織↓體細(xì)胞胚的誘導(dǎo)↓體細(xì)胞胚的成熟↓體細(xì)胞胚的機(jī)械化包裹↓貯藏或種植3.神奇的人工種子

以組織培養(yǎng)得到的胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽等為材料，經(jīng)人工薄膜包裝得到的種子第42頁/共140頁作物新品種的培育

1.單倍體育種單倍體的概念:是指由配子發(fā)育成的個(gè)體

單倍體的例子:蜜蜂中的雄蜂是由未受精的卵發(fā)育來的單倍體。多數(shù)植物都可通過花藥或花粉來獲得單倍體。第43頁/共140頁(花藥離體培養(yǎng))

過程:第44頁/共140頁2.突變體的利用突變體產(chǎn)生:植物組織培養(yǎng)過程中的細(xì)胞，處于不斷分裂狀態(tài)，容易受到培養(yǎng)條件和外界壓力（如輻射和化學(xué)物質(zhì)）的影響而產(chǎn)生突變。突變體的利用:

篩選對(duì)人有利的突變體培育新品種第45頁/共140頁3.細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)種類:各種細(xì)胞產(chǎn)物，如蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、藥物、香料、生物堿等利用的枝術(shù):組織培養(yǎng)過程:第46頁/共140頁

紫草紫草素

愈傷組織紫草愈傷組織中提取紫草素的過程第47頁/共140頁薄壁組織細(xì)胞具有潛在的細(xì)胞分裂能力，在一定的外界因素刺激下，它們可再生，使植物的創(chuàng)傷愈合或形成不定根、不定芽等。第48頁/共140頁第49頁/共140頁思維激活 判斷正誤

(1)植物的每個(gè)細(xì)胞在植物體內(nèi)和體外都能表現(xiàn)出細(xì)胞的全能性(

)。 (2)愈傷組織是外植體脫分化和再分化后形成的(

)。 (3)幼嫩的組織脫分化較為容易，如莖尖、根尖、形成層細(xì)胞易脫分化，而植物的莖、葉和成熟的組織則較難(

)?！痢痢痰?0頁/共140頁(4)對(duì)外植體和接種用的每種器械都要滅菌(

)。(5)脫分化形成愈傷組織的過程不需要光，再分化過程需要光，因?yàn)橛鷤M織利用有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分，而試管苗需要進(jìn)行光合作用以自養(yǎng)(

)。(6)植物組織培養(yǎng)中不同培養(yǎng)階段培養(yǎng)基含有的激素不同，因?yàn)榕囵B(yǎng)的目的不同(生根或生芽)(

)?！獭獭痰?1頁/共140頁思考感悟

植物組織培養(yǎng)的整個(gè)操作過程中，如何實(shí)現(xiàn)無菌環(huán)境？ 提示通過培養(yǎng)基的滅菌(高壓蒸汽滅菌)、外植體的消毒(酒精、氯化汞)、接種的無菌操作(酒精、酒精燈灼燒)、無菌箱中的培養(yǎng)、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時(shí)間等操作實(shí)現(xiàn)無菌環(huán)境。第52頁/共140頁1．(2013·重慶理綜，5)某興趣小組擬用組織培養(yǎng)繁殖一種名貴花卉，其技術(shù)路線為“取材→消毒→愈傷組織培養(yǎng)→出芽→生根→移栽”。下列有關(guān)敘述，錯(cuò)誤的是 (

)。 A．消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害 B．在愈傷組織培養(yǎng)中加入細(xì)胞融合的誘導(dǎo)劑，可獲得染色體加倍的細(xì)胞 C．出芽是細(xì)胞再分化的結(jié)果，受基因選擇性表達(dá)的調(diào)控 D．生根時(shí)，培養(yǎng)基通常應(yīng)含α－萘乙酸等生長(zhǎng)素類調(diào)節(jié)劑植物組織培養(yǎng)技術(shù)

B第53頁/共140頁題后歸納

植物激素在組織培養(yǎng)中的作用

在配制好的MS培養(yǎng)基中，常常需要添加植物激素其中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。植物激素的濃度、使用的先后順序以及用量的比例等，都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。第54頁/共140頁(1)按照不同的順序使用這兩類激素，會(huì)得到不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。第55頁/共140頁

當(dāng)同時(shí)使用這兩類激素時(shí)，兩者用量的比例影響植物細(xì)胞的發(fā)育方向。第56頁/共140頁動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)專題2動(dòng)物細(xì)胞工程第57頁/共140頁動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合生產(chǎn)單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞核移植動(dòng)物細(xì)胞工程常用技術(shù)其中動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)第58頁/共140頁動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)第59頁/共140頁一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程閱讀“動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程”并思考：

1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的概念是什么？該技術(shù)實(shí)施的原理是什么？有什么特點(diǎn)？

2、為什么要對(duì)取出的動(dòng)物組織進(jìn)行處理，使細(xì)胞分散？

3、用胰蛋白酶對(duì)動(dòng)物組織進(jìn)行處理是因?yàn)榧?xì)胞間的物質(zhì)主要是什么？用胃蛋白酶可以嗎？

4、胰蛋白酶真的不會(huì)把細(xì)胞消化掉嗎？為什么？

5、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？

6、簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的操作過程第60頁/共140頁動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)概念：

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)細(xì)胞,然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。原理

細(xì)胞增殖（有絲分裂）

第61頁/共140頁動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞部分細(xì)胞“癌變”，無限傳代動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成動(dòng)物體50代細(xì)胞原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁剝離、分瓶細(xì)胞株細(xì)胞細(xì)胞系2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程：增殖能力強(qiáng)，分裂旺盛，分化程度低，容易培養(yǎng)去掉組織間蛋白第62頁/共140頁

2、為什么要對(duì)取出的動(dòng)物組織進(jìn)行處理，使細(xì)胞分散？分散的單個(gè)細(xì)胞容易攝取所需的營(yíng)養(yǎng)，排出代謝廢物；而用大塊組織培養(yǎng)時(shí)，內(nèi)部細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)和代謝廢物的排出都較困難。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程第63頁/共140頁

3、用胰蛋白酶對(duì)動(dòng)物組織進(jìn)行處理是因?yàn)榧?xì)胞間的物質(zhì)主要是什么？用胃蛋白酶可以嗎？細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)（膠原纖維）。胃蛋白酶作用的適宜pH約為2，當(dāng)pH大于6時(shí)，胃蛋白酶就會(huì)失去活性。胰蛋白酶作用的適宜環(huán)境pH為7.2～8.4。多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2～7.4。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程第64頁/共140頁4、胰蛋白酶真的不會(huì)把細(xì)胞消化掉嗎？為什么？胰蛋白酶除了可以消化細(xì)胞間的蛋白外，長(zhǎng)時(shí)間的作用也會(huì)消化細(xì)胞膜蛋白，對(duì)細(xì)胞有損傷作用，因此必須控制好胰蛋白酶的消化時(shí)間。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程第65頁/共140頁

5、為什么選用動(dòng)物胚胎或幼齡個(gè)體的器官或組織做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)材料？動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官，它們的細(xì)胞分化程度低，增殖能力強(qiáng)，分裂旺盛，容易培養(yǎng)。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程第66頁/共140頁3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中幾個(gè)重要的概念1.細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上（單層）。要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。2.接觸抑制：

當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)特點(diǎn)：貼壁生長(zhǎng)、接觸抑制：第67頁/共140頁細(xì)胞貼壁過程那么什么是接觸抑制？第68頁/共140頁接觸抑制：細(xì)胞在貼壁生長(zhǎng)過程中，隨著細(xì)胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個(gè)單層，此時(shí)細(xì)胞間相互接觸，細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)停止，數(shù)量不再增加。50代以后失去接觸抑制接觸抑制動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)特性部分細(xì)胞突變，獲得不死性，向癌細(xì)胞方向發(fā)展，糖蛋白減少。第69頁/共140頁3.原代培養(yǎng)(primaryculture)定義：把第1代細(xì)胞的培養(yǎng)與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。過程：從動(dòng)物機(jī)體中取出組織剪碎加胰蛋白酶細(xì)胞游離加培養(yǎng)液將細(xì)胞接種到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)（1--2天換一次培養(yǎng)液）細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)長(zhǎng)成單層細(xì)胞第70頁/共140頁定義：當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)停止，這時(shí)如果要使細(xì)胞繼續(xù)生長(zhǎng)，就要及時(shí)用胰蛋白酶等，使細(xì)胞從瓶壁上解離下來，然后加入新的培養(yǎng)液，將細(xì)胞分離稀釋，并從原培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，這個(gè)過程稱傳代培養(yǎng)4.傳代培養(yǎng)(subculture)第71頁/共140頁

細(xì)胞株：從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出進(jìn)行傳代培養(yǎng)的細(xì)胞，能傳到40-50代，其遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生變化。

細(xì)胞系：傳到40-50代后有部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生了變化，帶有癌變的特點(diǎn)，可能在培養(yǎng)條件下無限制的傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞系。細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。第72頁/共140頁細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞無限傳代原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞系知識(shí)點(diǎn)小結(jié)：各個(gè)新名詞之間的聯(lián)系多數(shù)組織細(xì)胞固定在表面生長(zhǎng)和分裂。隨細(xì)胞增多，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖遺傳物質(zhì)改變第73頁/共140頁1、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清、微量元素等）3、溫度和PH

溫度36.5+0.5度，pH7.2～7.44、氣體環(huán)境

O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件保證細(xì)胞順利的生長(zhǎng)增殖離體培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)微生物和有毒物質(zhì)沒有防御能力第74頁/共140頁思考：動(dòng)物血清的作用？主要是：提供有利于細(xì)胞生長(zhǎng)增殖所需的激素、生長(zhǎng)因子或提供合成培養(yǎng)基所缺乏的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等。第75頁/共140頁動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等。與植物培養(yǎng)基相比其特點(diǎn)是：（1）液體培養(yǎng)基（2）含有動(dòng)物血清動(dòng)物體細(xì)胞大都生活在液體的環(huán)境植物組織培養(yǎng)呢？無機(jī)鹽、蔗糖、維生素、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、植物激素成分比較：第76頁/共140頁5、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用（1）生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。（3）用于檢測(cè)有毒物質(zhì)（2）獲得大量自身的皮膚細(xì)胞，用于植皮。（4）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)（5）作為基因工程的受體細(xì)胞第77頁/共140頁獲得細(xì)胞細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體培養(yǎng)結(jié)果或細(xì)胞分泌蛋白快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動(dòng)物血清促生長(zhǎng)因子蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目6、植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較第78頁/共140頁

1.用動(dòng)、植物成體的體細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，下列敘述正確的是

A．都需用培養(yǎng)箱

B．都須用液體培養(yǎng)基

C．都要在無菌條件下進(jìn)行

D．都可體現(xiàn)細(xì)胞的全能性C鞏固練習(xí)：外界條件適宜，植物細(xì)胞不需要。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一般需要培養(yǎng)箱。第79頁/共140頁

2、下列屬于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)主要區(qū)別的是

A.培養(yǎng)基成分不同

B.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進(jìn)行

C.動(dòng)物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能

D.動(dòng)物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株A

3、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是

A.動(dòng)物細(xì)胞融合B.單克隆抗體

C.胚胎移植D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)D愈傷組織條件適宜可以傳代培養(yǎng)不分化。第80頁/共140頁

4、細(xì)胞株的特點(diǎn)是

A．遺傳物質(zhì)沒有改變，可以無限傳代

B．遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，不可無限傳代

C．遺傳物質(zhì)沒有改變，不可無限傳代

D．遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，且有癌變特點(diǎn)，可以無限傳代

5、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中有部分細(xì)胞可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱之為:A．原代培養(yǎng)B．傳代培養(yǎng)

C．細(xì)胞株D．細(xì)胞系CD第81頁/共140頁

7.（09江蘇）下圖是一個(gè)新生小鼠的肝臟小塊培養(yǎng)裝置示意圖。請(qǐng)回答下列問題。（1）肝臟切成小薄片，這有利于肝臟細(xì)胞

。（2）氣室中充入5％C02：氣體的主要作用是

。（3）培養(yǎng)液中添加抗生素是為了抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，但要注意選擇抗生素的

，以保證抗生素對(duì)肝臟無害。吸收氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、排出代謝廢物維持培養(yǎng)液適宜的pH種類和劑量第82頁/共140頁08年寧夏卷回答下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的問題：⑴在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到細(xì)胞表面

時(shí)，細(xì)胞會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的

。此時(shí)，瓶壁上形成的細(xì)胞層數(shù)是

，要使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，可用的酶是

。

⑵隨著細(xì)胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細(xì)胞分裂停止，進(jìn)而出現(xiàn)

的現(xiàn)象；但極少數(shù)細(xì)胞可以連續(xù)增殖，其中有些細(xì)胞會(huì)因遺傳物質(zhì)發(fā)生改變而變成

細(xì)胞，該種細(xì)胞的黏著性

，細(xì)胞膜表面蛋白質(zhì)（糖蛋白）的量

。相互接觸單層胰蛋白酶衰老甚至死亡接觸抑制不死性降低減少第83頁/共140頁⑷檢查某種毒物是否能改變細(xì)胞染色體的數(shù)目，最好選用細(xì)胞分裂到

期的細(xì)胞用顯微鏡進(jìn)行觀察。⑸在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，通常在

條件下保存細(xì)胞，因?yàn)樵谶@種條件下，細(xì)胞中

的活性降低，細(xì)胞的

速率降低。⑹給患者移植經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)形成的皮膚組織后，發(fā)生了排斥現(xiàn)象，這是因?yàn)闄C(jī)體把移植的皮膚組織當(dāng)作

進(jìn)行攻擊。中冷凍酶新陳代謝抗原

第84頁/共140頁

既然動(dòng)物體細(xì)胞核仍具有全能性，為什么不能直接利用動(dòng)物體細(xì)胞培育動(dòng)物體？

想一想利用動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞的全能性會(huì)隨著動(dòng)物細(xì)胞分化程度的提高而逐漸受到限制，分化潛能逐漸變?nèi)酢?/p>

怎樣才能使動(dòng)物體細(xì)胞表現(xiàn)出全能性呢？第85頁/共140頁

1.概念：將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。核移植（難度高）受體細(xì)胞：MⅡ期的卵母細(xì)胞三、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易用核移植的方法得到的動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物第86頁/共140頁卵母細(xì)胞黑面母綿羊白面母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠融合后的卵母細(xì)胞2.體細(xì)胞核移植過程電脈沖刺激第87頁/共140頁供體細(xì)胞（供核）細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢卵母細(xì)胞（MⅡ中期：供質(zhì)）去核無核卵母細(xì)胞注入細(xì)胞融合重組細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳基礎(chǔ)相同的犢牛歸納:1.共分成兩大階段：核移植和胚胎移植2.取卵母細(xì)胞作受體細(xì)胞的原因是:它是最大的細(xì)胞,易操作；含有激發(fā)細(xì)胞核全能性的物質(zhì)3.嚴(yán)格來說新個(gè)體有卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)所以有兩個(gè)親本的性狀2.體細(xì)胞核移植過程第88頁/共140頁供體細(xì)胞培養(yǎng)（MⅡ卵母細(xì)胞）減數(shù)第二次分裂中期去核的卵母細(xì)胞供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞受體細(xì)胞激活，完成減數(shù)分裂、發(fā)育胚胎移植第89頁/共140頁無性生殖2、為什么不是取供體細(xì)胞核進(jìn)行核移植操作，而是直接將供體細(xì)胞整個(gè)注入去核卵母細(xì)胞中？保證供核不被破壞，使所得個(gè)體的性狀更符合供體。想一想

1、受體細(xì)胞為什么選用卵母細(xì)胞？

卵母細(xì)胞體積大，易操作，而且含有促使細(xì)胞核表達(dá)全能性的某種物質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

2.體細(xì)胞核移植的過程第90頁/共140頁P(yáng)49討論：

為使核移植的胚胎或動(dòng)物的遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價(jià)值的動(dòng)物提供的體細(xì)胞，在供體細(xì)胞的細(xì)胞核移至受體細(xì)胞之前，必須將受體細(xì)胞的遺傳物質(zhì)去掉或?qū)⑵淦茐摹?.在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？2.用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，想一想，這是為什么？

培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞一般當(dāng)傳代至10～50代左右時(shí)，部分細(xì)胞核型可能會(huì)發(fā)生變化，其細(xì)胞遺傳物質(zhì)可能會(huì)發(fā)生突變，而10代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型。因此，在體細(xì)胞核移植中，為了保證供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)，通常采用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞。第91頁/共140頁2.體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景1、在畜牧業(yè)中可以加速家畜遺傳改良的進(jìn)程.2、保護(hù)瀕危物種.3、醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)及組織器官的移植.第92頁/共140頁克隆動(dòng)物的研究意義1.克隆動(dòng)物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白2.改良動(dòng)物品種3.治療人類疾病，作為供體4.保護(hù)瀕危動(dòng)物第93頁/共140頁3.體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題⑴許多克隆動(dòng)物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，免疫失調(diào)等。⑵成功率非常低及克隆動(dòng)物食品的安全性問題。第94頁/共140頁體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題許多克隆動(dòng)物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等。在研究方面，克隆動(dòng)物基因組重新編程的機(jī)制尚不清楚，克隆技術(shù)效率低，克隆動(dòng)物畸形率高、死亡率高、易出現(xiàn)早衰等問題。這些問題尚在研究中。在應(yīng)用上，生產(chǎn)克隆動(dòng)物費(fèi)用昂貴，距大規(guī)模應(yīng)用還有一定距離。第95頁/共140頁3．動(dòng)物體細(xì)胞核移植及克隆技術(shù)引發(fā)的倫理問題

(1)原理：動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性

(2)核移植過程(以高產(chǎn)奶?？寺槔?第96頁/共140頁(3)克隆人的類型及其倫理問題第97頁/共140頁一、動(dòng)物細(xì)胞融合1.概念：動(dòng)物細(xì)胞融合（cellfusion）也成細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。融合和形成的具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳物質(zhì)的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。2、原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性第98頁/共140頁3.融合過程：誘導(dǎo)融合的方法？第99頁/共140頁誘導(dǎo)方法：物理方法：化學(xué)法：生物法：滅活的病毒電激等聚乙二醇（PEG)第100頁/共140頁為什么滅活的病毒能作誘導(dǎo)劑？3.融合過程：第101頁/共140頁滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理：

病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。第102頁/共140頁植物細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合原理融合前處理使用的酶誘導(dǎo)方法主要用途細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性纖維素酶、果膠酶胰蛋白酶物理方法（離心、振蕩、電激）化學(xué)方法（PEG）物理、化學(xué)方法滅活的病毒獲得雜種植株制備單克隆抗體去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合第103頁/共140頁4.意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。5.應(yīng)用：最重要的用途是制備單克隆抗體第104頁/共140頁動(dòng)物細(xì)胞融合物理法：化學(xué)法：生物法：誘導(dǎo)融合的方法原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性過程：離心、震動(dòng)、電激聚乙二醇（PEG)滅活的病毒動(dòng)、植物細(xì)胞融合的主要區(qū)別用途：最重要的用途是制備單克隆抗體第105頁/共140頁思考？1.抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生？2.抗體的化學(xué)本質(zhì)是什么？與抗原作用的特點(diǎn)？主要分布在哪里？3.用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？(三)單克隆抗體第106頁/共140頁第107頁/共140頁思考？1.抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？如何產(chǎn)生？2.抗體的化學(xué)本質(zhì)是什么？與抗原作用的特點(diǎn)？主要分布在哪里？3.用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？(三)單克隆抗體第108頁/共140頁抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從血清中分離抗體該法制備抗體的特點(diǎn)：

產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。多種效應(yīng)B細(xì)胞動(dòng)物體內(nèi)多種抗體抗原第109頁/共140頁單克隆抗體的制備單克隆抗體:單個(gè)細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一特異性強(qiáng)的抗體利用效應(yīng)B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得雜交瘤細(xì)胞利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞設(shè)計(jì)方案：第110頁/共140頁

1、過程

注射抗原已免疫的B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體第111頁/共140頁骨髓瘤細(xì)胞免疫小鼠單克隆抗體篩選克隆、篩選體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)B淋巴細(xì)胞（選擇培養(yǎng)基）（抗體檢測(cè)）細(xì)胞融合雜交細(xì)胞第112頁/共140頁1、（只考慮兩兩融合）融合細(xì)胞幾種類型？2、本過程中進(jìn)行了兩次篩選，目的分別是什么？第1次篩選要淘汰哪些細(xì)胞？3、雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？4、本過程利用的哪些技術(shù)？思考以下問題：第113頁/共140頁單克隆抗體制備過程中兩次篩選的比較第114頁/共140頁第115頁/共140頁2、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)特異性強(qiáng)、靈敏度高第116頁/共140頁3、單克隆抗體的應(yīng)用（1）作為診斷試劑——最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速（如同位素標(biāo)記單克隆抗體，可診斷腫瘤、心血管畸形等）第117頁/共140頁（2）運(yùn)載藥物生物導(dǎo)彈=單克隆抗體+藥物，治療腫瘤）(“生物導(dǎo)彈”—單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭)第118頁/共140頁

看書上53頁圖，分組討論，單抗制備過程分哪幾步？請(qǐng)用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？

第119頁/共140頁1.單克隆抗體制備

(1)誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的原理：

。

(2)誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法：物理法——離心、振動(dòng)、電激等；化學(xué)法——聚乙二醇；生物法——

。細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性滅活病毒小結(jié)第120頁/共140頁

(2)單克隆抗體制備過程第121頁/共140頁(3)單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：

、靈敏度高，可大量制備。(5)單克隆抗體的應(yīng)用：作為

；用于治療疾病和運(yùn)載藥物。特異性強(qiáng)診斷試劑第122頁/共140頁5．比較動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、核移植與動(dòng)物細(xì)胞融合第123頁/共140頁第124頁/共140頁第125頁/共140頁思維激活 判斷正誤 (1)植物組織培養(yǎng)常用液體培養(yǎng)基，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)常用固體培養(yǎng)基 ()。 (2)具有包含物種完整基因組的細(xì)胞核的活細(xì)胞是生物克隆的重要條件之一 () (3)一般血清中的抗體是一群識(shí)別不同抗原部位的抗體混合物，單抗則識(shí)別抗原分子的特殊部位，具專一性 ()。×√√第126頁/共140頁(4)細(xì)胞克隆的基本要求是：必須保證分離出來的細(xì)胞是一個(gè)而不是多個(gè) ()。(5)在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶處理使細(xì)胞從瓶壁上脫離，制成懸浮液 ()。(6)二倍體細(xì)胞的傳代培養(yǎng)次數(shù)通常是無限的 ()。(7)核移植過程中供體理論上是提供細(xì)胞核，但操作過程中可以把整個(gè)體細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞中去 ()?！獭獭獭恋?27頁/共140頁思考與填空 仔細(xì)閱讀圖示及相關(guān)內(nèi)容辨析并填充其含義 從A、B到C的過程可以表示不同的含義(如圖所示)： ①若A、B為動(dòng)物細(xì)胞，則該過程表示

； ②若B為精子，A為卵細(xì)胞，則該過程表示

； ③若A為除去細(xì)胞核的卵母細(xì)胞，B為細(xì)胞核，則該過程表示

。