艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理涉及質(zhì)量保證、質(zhì)量控制和質(zhì)量評價(jià)。1質(zhì)量保證（QA）1.1行政支持行政部門和領(lǐng)導(dǎo)要關(guān)心艾滋病實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)和發(fā)展，保證實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和重要技術(shù)人員隊(duì)伍的穩(wěn)定，保證實(shí)驗(yàn)室建筑和設(shè)備需要、給予充足的經(jīng)費(fèi)支持，并進(jìn)行經(jīng)常性監(jiān)督檢查。1.2實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化建設(shè)艾滋病實(shí)驗(yàn)室的設(shè)立及其建筑、設(shè)施、設(shè)備必須符合《艾滋病檢測工作管理辦法》的規(guī)定。1.3人員培訓(xùn)及其評價(jià)實(shí)驗(yàn)室工作人員上崗前必須接受技術(shù)培訓(xùn)并獲得合格證書。在工作中要定期或不定期接受復(fù)訓(xùn)。實(shí)驗(yàn)室主管領(lǐng)導(dǎo)應(yīng)定期對工作人員進(jìn)行評價(jià)，涉及工作的準(zhǔn)確性、效率、執(zhí)行安全條例和規(guī)章制度情況、職業(yè)道德、出勤率以及上崗資格等。1.4標(biāo)本采集、運(yùn)送和解決，嚴(yán)格遵照FJCDCXAM001-2023。1.5檢測方法和試劑的選擇應(yīng)使用最適合的檢測方法和敏感性高、特異性好的試劑，并定期進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)。1.6設(shè)備維護(hù)與校準(zhǔn)設(shè)立常用儀器的維護(hù)及校準(zhǔn)制度，以保證正常運(yùn)轉(zhuǎn)。1.6.1酶標(biāo)讀數(shù)儀、洗板機(jī)天天：核對酶標(biāo)儀濾光片波長，檢查洗板機(jī)管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象。每周：清潔儀器表面，保護(hù)光學(xué)零件不沾灰塵。每月：檢查洗滌時(shí)各孔是否與相應(yīng)的沖洗頭對位良好，負(fù)壓是否符合規(guī)定規(guī)定。每年：檢查、清洗濾光片，假如出現(xiàn)破裂或霉點(diǎn)則要更換。根據(jù)儀器內(nèi)具有的校準(zhǔn)程序或使用校準(zhǔn)板，對濾光片的精密度進(jìn)行校準(zhǔn)并保存記錄。實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)異常情況，應(yīng)隨時(shí)進(jìn)行解決，可根據(jù)使用情況更換必要的部件。1.6.2移液器一年至少應(yīng)當(dāng)標(biāo)定一次，發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)隨時(shí)進(jìn)行校準(zhǔn)。標(biāo)定方法涉及有色溶液光譜分析法、稱量校準(zhǔn)法、同位素計(jì)數(shù)法以及使用配套校準(zhǔn)盒等。校準(zhǔn)多道移液器時(shí)，必須保證每一個(gè)加樣頭都可以連續(xù)、準(zhǔn)確地加樣。移液器的精密度應(yīng)在廠家說明書規(guī)定的范圍內(nèi)。范例用蒸餾水稱量法標(biāo)定移液器：在室溫22℃無風(fēng)的工作室中，在萬分之一級別天平上放置一個(gè)小三角燒瓶，用待校準(zhǔn)的移液器吸取存放過夜的蒸餾水加入燒瓶底部，稱重并計(jì)算蒸餾水重量，連續(xù)稱重10次。加蒸餾水的量根據(jù)待校準(zhǔn)移液器的規(guī)格而不同（見下表），10次校準(zhǔn)稱量均在規(guī)定的重量范圍內(nèi)為合格，貼上合格標(biāo)簽，注明校準(zhǔn)日期，不合格移液器要請生產(chǎn)廠家進(jìn)行校準(zhǔn)。填寫和保存校準(zhǔn)記錄。稱重法校準(zhǔn)移液器方案移液器規(guī)格蒸餾水量規(guī)定重量范圍0.5–10μl2μl1.75-2.25mg5–40μl10μl9.8-10.2mg40–200μl70μl69.4-70.6mg200–1000μl300μl298.0-302.0mg1–5ml2023μl1990.0-2023.0mg2–10ml3500μl3485.0-3515.0mg1.6.3冰箱和孵育箱：必須天天檢查和記錄低溫超低溫冰箱及孵育箱的溫度，并作好記錄。1.6.4定期檢查其他儀器設(shè)備精密儀器及出具實(shí)驗(yàn)結(jié)果的儀器必須定期校準(zhǔn)，其他儀器定期檢查并做好記錄。1.7文獻(xiàn)和文獻(xiàn)管理1.7.1標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室要建立覆蓋重要工作內(nèi)容的SOP文獻(xiàn)。SOP由各崗位工作人員起草，實(shí)驗(yàn)室主任審定，并應(yīng)定期修訂。修訂應(yīng)當(dāng)在實(shí)驗(yàn)室主管人員（技術(shù)負(fù)責(zé)人）的領(lǐng)導(dǎo)下進(jìn)行，每年至少一次。所有工作人員要在所從事工作的SOP文獻(xiàn)上署名表達(dá)已經(jīng)閱讀并掌握了有關(guān)內(nèi)容。艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立以下SOP：1）樣品的接受、登記和解決2）檢測方法和環(huán)節(jié)3）儀器的使用與維護(hù)和校準(zhǔn)4）實(shí)驗(yàn)中的質(zhì)量控制5）結(jié)果解釋與報(bào)告6）保密程序7）檢測數(shù)據(jù)的記錄與保存8）追蹤和解決9）實(shí)驗(yàn)室的清理和消毒10）實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)SOP通常涉及（但不限于）以下內(nèi)容：1）標(biāo)題和編號2）編寫和修改日期3）編寫和修訂人員姓名4）方法、目的和應(yīng)用范圍5）相應(yīng)的職業(yè)規(guī)范6）檢測設(shè)備和試劑7）安全防護(hù)相關(guān)環(huán)節(jié)8）結(jié)果的解釋和報(bào)告9）附錄，涉及相關(guān)的附加文獻(xiàn)如標(biāo)準(zhǔn)表格、設(shè)備和試劑盒說明書等。1.7.2實(shí)驗(yàn)原始登記表應(yīng)按實(shí)驗(yàn)規(guī)定，設(shè)計(jì)操作的原始登記表，標(biāo)明空白對照、陽性對照、陰性對照、外部對照以及待檢樣品的位置，便于指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)人員加樣。要注明試劑盒廠家、測定方法、批號、效期、操作人員和復(fù)核人員姓名及檢測日期。1.7.3標(biāo)本的登記收到標(biāo)本后，及時(shí)登記有關(guān)參數(shù)，涉及受檢者姓名或代號、試管編號、性別、年齡、職業(yè)、送檢單位、人群類別、檢查結(jié)果、送檢日期、報(bào)告日期、備注(必要時(shí)記錄通信地址)等。1.7.4HIV陽性標(biāo)本的保存記錄涉及HIV陽性標(biāo)本的類型、貯存量、貯存溫度、貯存起始時(shí)間以及標(biāo)本保管人姓名。1.7.5文獻(xiàn)存檔實(shí)驗(yàn)原始登記表、打印數(shù)據(jù)、免疫印跡實(shí)驗(yàn)的膜反映條帶或其照片、檢測登記表、標(biāo)本登記、標(biāo)本保存記錄以及儀器設(shè)備維修和校準(zhǔn)記錄等都應(yīng)當(dāng)妥善存檔保存5年以上。最佳同時(shí)使用計(jì)算機(jī)保存各種文獻(xiàn)和記錄。2質(zhì)量控制（QC）2.1質(zhì)控血清的制備和保存（以ELISA實(shí)驗(yàn)檢測HIV抗體為例）在每次實(shí)驗(yàn)中必須包具有內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清。內(nèi)部對照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。內(nèi)部對照是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)。每一次檢測必須使用內(nèi)部對照，并且只能在同批號的試劑盒中使用。外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的反復(fù)性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差異而由實(shí)驗(yàn)室設(shè)立的一套對照血清，涉及強(qiáng)陽性、弱陽性和陰性對照血清。也可以只設(shè)立一個(gè)弱陽性對照，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的2-3倍為宜。2.1.1外部對照質(zhì)控血清的制備HIV抗體陽性和陰性血清，56℃30分鐘滅活，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘。弱陽性對照可以用HIV抗體陰性血清梯度稀釋HIV抗體強(qiáng)陽性血清并標(biāo)定后得到。按一年使用量配制，用0.2μm濾膜過濾除菌。2.1.2外部對照質(zhì)控血清的保存1）按一周實(shí)驗(yàn)用量分裝、分類、標(biāo)記、封口、-20℃凍存于非自動(dòng)除霜冰箱中。2）外部對照血清不可反復(fù)凍融，一旦融化后應(yīng)當(dāng)存放2-8℃，供一周內(nèi)使用。2.1.3外部對照質(zhì)控血清的使用每一次實(shí)驗(yàn)必須使用外部對照質(zhì)控血清，以便監(jiān)控實(shí)驗(yàn)的反復(fù)性和穩(wěn)定性。同時(shí)可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異，繪制質(zhì)量控制圖。2.1.4外部對照質(zhì)控物的質(zhì)量規(guī)定質(zhì)控物的管間或瓶間變異必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預(yù)期的變異，并且質(zhì)控物的成分應(yīng)在穩(wěn)定狀態(tài)中。質(zhì)控物應(yīng)無菌，并不具有影響ELISA反映的防腐劑。2.2質(zhì)控圖的建立及應(yīng)用（以ELISA實(shí)驗(yàn)檢測HIV抗體為例）最常用的質(zhì)控圖是Levey-Jennings質(zhì)控圖2.2.1建立質(zhì)控圖參數(shù)外部對照質(zhì)控物的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)建立在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用方法對質(zhì)控物反復(fù)測定的基礎(chǔ)上。一般采用在不同批次檢測取得至少20個(gè)數(shù)據(jù)；假如僅做少量批次的檢測，也至少做5個(gè)批次的檢測，每個(gè)批次中不少于4個(gè)質(zhì)控物測定結(jié)果，以建立一個(gè)臨時(shí)性的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，當(dāng)達(dá)成20批次數(shù)據(jù)后，替代臨時(shí)性的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。1）算術(shù)平均值()：代表一組S/CO值的平均值。為了記錄學(xué)上有顯著性意義，應(yīng)當(dāng)采用至少20次(天)所測得的外部對照質(zhì)控血清S/CO值結(jié)果計(jì)算出平均值。2）標(biāo)準(zhǔn)差(s)：是描述樣品與均數(shù)之間離散限度的一個(gè)指標(biāo)，是與對照值的均值有關(guān)的預(yù)期范圍。一組S/CO值的標(biāo)準(zhǔn)差以s表達(dá)。3）變異系數(shù)(cv)：是反映各次S/CO值相對于均值離散限度的一個(gè)指標(biāo)，可以用來衡量檢測的反復(fù)性或精密度。4）控制限：由實(shí)驗(yàn)室根據(jù)對質(zhì)控物檢測結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差來擬定。例如12S質(zhì)控規(guī)則的控制限為外部對照S/CO平均值加減2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差；13S質(zhì)控規(guī)則的控制限為外部對照S/CO平均值加減3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差。計(jì)算公式為：Σx=──ns計(jì)算公式為：───────∑(xn-x)2s=───────n-1cv計(jì)算公式為：scv=──x100%2.2.2繪制質(zhì)控圖質(zhì)控圖的繪制環(huán)節(jié)1）在常規(guī)條件下，對同一批血清連續(xù)測定20次（天）或以上，獲得一組S/CO值，求均數(shù)()和標(biāo)準(zhǔn)差(s),超過2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。2）將均值()和標(biāo)準(zhǔn)差(s)分別在質(zhì)控框架圖中標(biāo)示出來。以S/CO值作縱座標(biāo)(Y軸)，每一次(天)實(shí)驗(yàn)作橫座標(biāo)(x軸)，繪制質(zhì)控圖。3）從第21次起，將每次質(zhì)控血清的檢測結(jié)果依次點(diǎn)入該質(zhì)控框架圖中，檢查進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)。2.2.3質(zhì)控規(guī)則及使用實(shí)驗(yàn)室在報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果之前必須評價(jià)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計(jì)算機(jī)審核結(jié)果來決定。目前許多質(zhì)控規(guī)則已被采用，常用的是12S和13S規(guī)則。1）告警（12S）：當(dāng)外部對照的S/CO值超過+2s范圍時(shí)，系統(tǒng)處在告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀測。若將12S做失控標(biāo)準(zhǔn)，有較高的假失控概率，所以一般不采用。2）失控（13S）：當(dāng)外部對照的S/CO值超過+3s范圍時(shí)，系統(tǒng)處在失控狀態(tài)，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受，也許是系統(tǒng)誤差或存在隨機(jī)誤差。3）位移：連續(xù)幾次（3-5次）外部對照S/CO值都落在均值的一側(cè)則稱為位移，提醒實(shí)驗(yàn)條件發(fā)生了較大的變化重新繪制質(zhì)控圖。4）趨勢：連續(xù)幾次（5-7次）外部對照S/CO值幾乎按一個(gè)方向分布時(shí)稱為趨勢，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。質(zhì)控規(guī)則的使用應(yīng)檢出隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差，即具有高的檢出分析誤差的能力，同時(shí)應(yīng)具有較低的假失控概率?？疾鞂?shí)驗(yàn)系統(tǒng)的可靠性應(yīng)采用多標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控方案，多規(guī)則質(zhì)控方法能提高誤差檢出，并具有低的假失控概率。其要點(diǎn)為：出現(xiàn)一次2s范圍的變化時(shí)，系統(tǒng)處在告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀測。出現(xiàn)下列情況時(shí)，應(yīng)暫停檢測查找因素：出現(xiàn)一次3s范圍的變化、連續(xù)兩次出現(xiàn)同一方向2s范圍的變化、連續(xù)四次出現(xiàn)同一方向的1s范圍的變化、連續(xù)十次結(jié)果都在1s范圍內(nèi)，但落在均值線的同一側(cè)。2.2.4質(zhì)控圖的分析及失控解決實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況解決程序當(dāng)質(zhì)控已有計(jì)劃并恰本地執(zhí)行時(shí)，規(guī)定可靠的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差用于計(jì)算質(zhì)控限，將假失控概率降到最低。當(dāng)出現(xiàn)失控時(shí)進(jìn)行如反復(fù)質(zhì)控測定或重新分析新的質(zhì)控物不是最有效的方法，必須找出問題因素，找出解除故障的方法，并消除因素，防止將來出現(xiàn)同樣的問題。2.2.5繪制和分析質(zhì)控圖的要點(diǎn)1）要在常規(guī)條件下建立質(zhì)控圖參數(shù)，用S/CO比值繪制質(zhì)控圖。對同一批質(zhì)控物連續(xù)測定得到20個(gè)數(shù)據(jù)，求均數(shù)()和標(biāo)準(zhǔn)差(s),超過2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。2）由專人負(fù)責(zé)建立質(zhì)控圖，每月定期召開質(zhì)控分析會，討論本月的質(zhì)量控制情況。3）建議長期和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑盒，更換不同廠家的試劑盒后，必須重新繪制質(zhì)控圖。改用新批號試劑盒也應(yīng)重新制作質(zhì)控圖。使用新批號或不同廠家的試劑盒必須在質(zhì)控圖上注明使用日期。4）發(fā)現(xiàn)質(zhì)控結(jié)果失控，應(yīng)填寫報(bào)告單，上交質(zhì)量負(fù)責(zé)人，分析因素并決定是否發(fā)出檢測報(bào)告。5）使用新批次的外部對照質(zhì)控物時(shí)，必須重新繪制質(zhì)控圖。變異系數(shù)(cv)小于20％，表達(dá)外部對照處在穩(wěn)定狀態(tài)。2.3即刻法”質(zhì)控“即刻法”質(zhì)控方法是在對同一批外部質(zhì)控血清連續(xù)測定3次后，即可對第3次檢查結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。具體計(jì)算方法如下：2.3.1將質(zhì)控血清的測定值從小到大排列：x1，x2，x3……xn(x1為最小值，xn為最大值)2.3.2計(jì)算和s2.3.3計(jì)算SI上限值和SI下限值SI上限=X最大值-sSI下限=-X最小值s2.3.4將SI上限、SI下限與SI值表（表4）中的數(shù)字比較。表4SI值表nn3sN2snn3sn2s31.151.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.3761.941.82152.712.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.882.561）當(dāng)SI上限和SI下限<n2s時(shí)表達(dá)處在控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)測定。繼續(xù)反復(fù)以上各項(xiàng)計(jì)算；2）當(dāng)SI上限和SI下限有一值處在n2s~n3s值之間時(shí)說明該值在2s-3s范圍，處在“告警”狀態(tài)；3）當(dāng)SI上限和SI下限有一值>n3s值時(shí)說明該值已在3s范圍之外，屬“失控”。數(shù)值處在“告警”和“失控”狀態(tài)