白細胞分類計數(shù)12白細胞的種類

白細胞分類計數(shù)

【操作】

1．制備血涂片2．血涂片染色3．白細胞分類4．計算百分率4血涂片的制備黃慧器材推片載玻片一、載玻片的清潔1.新玻片1mol/LHCl泡24小時→水洗→干燥。

2.舊載玻片肥皂水或其他合成洗滌劑水中煮沸20分鐘→熱水洗→自來水洗→干燥。7標本8毛細血管血EDTA抗凝新鮮全血：標本采集后4小時內(nèi)制片二、血涂片的制作取血液一滴，置于載玻片一端。以邊緣平滑的推片的一端，放在血滴前方，逐漸后移接觸血滴，血液立即沿推片散開。9二、血涂片的制作將推片與載玻片保持30°-45°夾角，平穩(wěn)向前推進至載玻片的另一端，玻片上即留下一薄層血膜。101212良好血涂片的要求（1）厚薄適宜（2）頭體尾明顯（3）細胞分布均勻（4）兩側留有空隙（5）血膜邊緣整齊尾體頭細胞呈單層或近單層緊密排列血膜厚薄的影響因素1.血滴大小2.推片與載玻片之間的角度3.推片時的速度血滴愈大、角度愈大、推片時速度愈快，則血膜愈厚；反之血膜愈薄。13較好用力不均勻載玻片不清潔血膜過窄血膜過短

19推片邊緣不整齊血細胞染色黃慧血細胞染色瑞特染色法吉姆薩染色法混合染色法21一、瑞特染色法【原理】1、染液成分

瑞特染液是有酸性染料伊紅和堿性染料美藍組成的復合染料溶于甲醇而成。

22一、瑞特染色法

【原理】伊紅系不易解離的弱酸性染料，通常用伊紅鈉鹽（Ｎａ+Ｅ－），其有色部分是伊紅，為陰離子，所以伊紅是酸性染料。23一、瑞特染色法【原理】

美藍又名亞甲藍，為四甲基硫堇染料，通常為氯鹽，即氯化美藍（Ｍ+Ｃl-）。其有色部分是美藍，為陽離子，所以是一種堿性染料。

美藍在空氣中很容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級染料（即天青），在制備瑞特染料時，一部分美藍被氧化為各種天青。24一、瑞特染色法美藍和伊紅的水溶液混合后，生成一種疏水性伊紅化美藍的中性沉淀物，即瑞特染料，其反應式為：

水中ＭＣl＋ＮａＥ－－→ＭＥ↓＋ＮａＣl瑞特染料在甲醇中溶解后，重新解離，與不同的細胞成分選擇性結合而使細胞著色。25一、瑞特染色法【原理】2、細胞的受色原理

細胞的受色既有化學親和作用，也有物理吸附作用。26血紅蛋白、嗜酸性顆粒等堿性物質(zhì)+酸性染料伊紅→粉紅色（嗜酸性物質(zhì)）核染色質(zhì)、嗜堿性顆粒等酸性物質(zhì)+堿性染料美藍→藍色或紫黑色（嗜堿性物質(zhì)）中性顆粒+伊紅和美藍→淡紫紅色（中性物質(zhì)）27一、瑞特染色法

pH對細胞染色的影響1.在酸性環(huán)境中，染色偏紅；2.在堿性環(huán)境中，染色偏藍。

染色時應用pH6.4～6.8的磷酸鹽緩沖液維持恒定的酸堿環(huán)境。28一、瑞特染色法【染色方法】1、用蠟筆在血膜兩端畫線，以防染色時染液外溢。

2930勿沖洗，滴加等量或稍多的緩沖液，用吸耳球輕吹使染液與緩沖液充分混合，染色5～

10分鐘涂片干燥后用油鏡分類計數(shù)100個白細胞李四123涂片干燥后加瑞特染液5-8滴覆蓋整個血膜0.5～1分鐘用細流水從血涂片的一端沖去染液，30秒以上（切勿先倒掉染液）【染色結果】正常染色:肉眼觀察：血膜外觀呈淡紫紅色成熟紅細胞粉紅色

顯微鏡下白細胞顆粒清楚呈現(xiàn)各自色彩

細胞核紫紅色染色質(zhì)結構清楚31染色偏酸:

紅細胞、嗜酸粒細胞顆粒偏紅

白細胞核淡紫紅色或不著色

32染色偏堿：紅細胞灰藍色中性粒細胞顆粒深暗、偏粗，紫黑色嗜酸性粒細胞暗褐色或紫黑色、藍色33【注意事項】1.染色偏酸或偏堿時，應更換緩沖液再染。2、染色時間染液淡、室溫低、細胞多、有核細胞多，則染色時間要長反之，可減少染色時間3、

血膜干透后方可固定染色。344、染色過程玻片要放平染液不能過少染液覆蓋全部血膜緩沖液和染液混勻【注意事項】354、沖洗染液流水沖洗沖洗時間不能過長沖洗完后的血片應立即立于架上染料顆粒沉積：甲醇或Wright染液溶解

【注意事項】36白細胞分類計數(shù)黃慧

白細胞分類計數(shù)法【原理】

將血液制成分布均勻的血涂片，經(jīng)瑞特染色后置于顯微鏡下觀察，根據(jù)各類白細胞的形態(tài)特征逐個進行分類計數(shù)，計數(shù)100個白細胞得出各種白細胞的百分率。同時注意觀察各種白細胞的形態(tài)變化。

38低倍鏡觀察：1.染色情況(滿意、偏酸、偏堿）2.細胞分布情況油鏡下分類計數(shù)：體尾交界處。油鏡分類時應按一定走向，不要重復計數(shù)。李四123白細胞分類39

白細胞分類計數(shù)法白細胞分類記錄方法（1）手工記錄法：畫“正”字（2）分類計數(shù)器法

某類白細胞％＝（某類白細胞個數(shù)／分類白細胞總數(shù)）×100%40【報告結果】白細胞分類計數(shù)：中性桿狀核粒細胞%中性分葉核粒細胞%嗜酸性粒細胞%嗜堿性粒細胞%淋巴細胞%單核細胞%41

白細胞總數(shù)與分類白細胞數(shù)的關系白細胞總數(shù)（×109/L）應分類白細胞個數(shù)＜450～1004～1010010～2020020～30300＞30400【注意事項】1、分類計數(shù)的白細胞數(shù)量視白細胞總數(shù)而定422、由于各種白細胞大小不同在血片中分布不很均勻。一般體積較小的淋巴細胞在頭、體部較多，而尾部和兩側以中性粒細胞和單核細胞較多，特別是異常大的細胞常常在片尾末端出現(xiàn)。43

分類最好是在血膜體尾交界處．由血膜邊緣向中央依次上下呈曲線向血膜