PekingUniversityHealthScienceCenter

微生物感染的實驗室診斷LaboratorydiagnosisofmicroorganisminfectionMedicalMicrobiologyExcellentCurriculum精品課程醫(yī)學微生物學P157實驗室診斷的意義明確患者的臨床診斷選擇有效的治療措施預防疾病繼續(xù)傳播與流行判斷患者預后實驗室診斷方法分類鏡下直接觀察病原微生物分離、培養(yǎng)和鑒定病原微生物的抗原檢測特異性RNA或DNA片段檢測抗體和細胞免疫指征的檢測采集操作：無菌操作，做好標記采集部位：組織、血、尿液、糞便、痰、腦脊液、分泌物、嘔吐物、胸腹穿刺物及解剖樣品等采集時機：根據(jù)病程發(fā)展的不同階段采集不同部位的樣品運輸：應遵循安全、快捷的原則前期處理：濃縮標本采集和運送形態(tài)學檢查細菌的培養(yǎng)特征觀察：顏色、氣味、溶血性、菌落形態(tài)、細菌動力及在液體、半固體、固體培養(yǎng)基中的生長狀態(tài)顯微鏡檢查法：形態(tài)、基本結(jié)構(gòu)、染色性、排列方式、數(shù)量非染色檢查法染色檢查法負染色檢查法

細菌分離培養(yǎng)法臨床標本細菌分離：分區(qū)劃線細菌培養(yǎng)挑取單菌落，純培養(yǎng)鑒定免疫學檢查免疫沉淀反應

凝集反應

補體結(jié)合試驗

免疫標記技術(shù)

生物化學檢查糖代謝試驗糖發(fā)酵試驗甲基紅試驗V-P試驗蛋白質(zhì)代謝試驗硫化氫產(chǎn)生試驗尿素分解試驗碳源和氮源利用試驗枸櫞酸鹽利用試驗呼吸酶類試驗過氧化氫酶試驗氧化酶試驗分子生物學檢查G+C測定技術(shù)核酸雜交技術(shù)聚合酶鏈反應技術(shù)質(zhì)粒指紋圖譜技術(shù)蛋白質(zhì)芯片技術(shù)DNA芯片技術(shù)動物實驗及細菌毒素檢測小鼠豚鼠家兔*LD50*ID50藥物敏感性試驗紙片擴散法液體稀釋法E測定法(Etest)自動化藥敏測定法耐藥基因測定法病毒感染的實驗室診斷形態(tài)學檢查光學顯微鏡檢查

包涵體（inclusion）：某些病毒感染宿主細胞后,可在細胞核或漿內(nèi)出現(xiàn)一個或數(shù)個、呈圓形或不規(guī)則、大小不一、嗜酸性或嗜堿性的結(jié)構(gòu)電鏡檢查

直接電鏡法免疫電鏡法輪狀病毒負染的電鏡照片病毒分離和培養(yǎng)動物接種小白鼠、大白鼠、豚鼠、兔、雞、猴，采用鼻腔、腦內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腹腔、靜脈等方式雞胚培養(yǎng)組織培養(yǎng)器官培養(yǎng)組織培養(yǎng)細胞培養(yǎng)原代細胞培養(yǎng)：2~3代用于診斷和疫苗制備

二倍體細胞培養(yǎng)：40±10代

傳代細胞培養(yǎng)：無限傳代用于分離多種病毒，但不能用于制備疫苗

病毒生長繁殖的指標與鑒定細胞病變效應(cytopathiceffect,CPE)紅細胞吸附

紅細胞凝集

干擾作用

細胞代謝反應空斑形成單位（PFU）

細胞病變效應(cytopathiceffect,CPE)培養(yǎng)的單層細胞接種病毒后導致細胞發(fā)生圓縮、溶解、脫落等病變的現(xiàn)象。病變細胞正常細胞redbloodcell紅細胞吸附virus+susceptiblecells+viralproteinsexpressedonthecellmembranevirusA+susceptiblecellsvirusB+CPE(-)virusB+CPE(+)susceptiblecells病毒干擾作用空斑plaque由病毒感染細胞后在培養(yǎng)瓶的瓊脂層上形成的一個壞死病灶空斑形成單位PFU(plaqueformationunit)每毫升空斑形成單位病毒核酸的檢測核酸分子雜交技術(shù)

核酸分子擴增技術(shù)

基因芯片技術(shù)

血清學診斷補體結(jié)合試驗

中和試驗

血凝抑制試驗

膠乳凝集試驗

間接血凝