ICS65.020B61黑DB23地方標準DBT019黑龍江省市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB23/T2536—2019前言本標準依據(jù)GB/T1.1-2009的編寫規(guī)則起草。本標準由黑龍江省科學院提出。本標準起草單位：黑龍江省科學院自然與生態(tài)研究所。本標準主要起草人：陳菲、曾祥俊、曲彥婷、李黎、沈光、韓輝、熊燕、張悅、唐煥偉、楊軼華、李虹、曲線、孫波。1DB23/TXXXX—XXXX橡膠草組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程1范圍本標準規(guī)定了橡膠草(Taraxacumkok-saghyzRodin.)組織培養(yǎng)育苗技術(shù)的環(huán)境與設(shè)備消毒、培養(yǎng)基制備、外植體誘導(dǎo)、繼代增殖、生根培養(yǎng)、煉苗移栽、生產(chǎn)檔案。本標準適用于橡膠草組織培養(yǎng)育苗。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6001育苗技術(shù)規(guī)程LY/T1882林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程NY/T2306花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程3環(huán)境與設(shè)備消毒3.1接種室消毒接種室消毒按NY/T2306-2013中8.6進行。3.2超凈工作臺消毒超凈工作臺消毒按NY/T2306-2013中8.5、8.6進行。3.3培養(yǎng)室消毒培養(yǎng)室消毒按NY/T2306-2013中8.7進行。3.4接種器具消毒接種器具按NY/T2306-2013中8.4進行。4培養(yǎng)基制備4.1母液配制LY/T1882-2010中4.1進行。4.2培養(yǎng)基配制2DB23/TXXXX—XXXX4.2.1培養(yǎng)基配方培養(yǎng)基配制成分如下：a)誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+6-BA2.0mg/L+2,4-D1.0mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉5.5g/L，pH值5.8；b)繼代增殖培養(yǎng)基：MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉5.5g/L，pH值5.8；c)生根培養(yǎng)基：1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂粉5.5g/L，pH值5.8。4.2.2培養(yǎng)基配制方法培養(yǎng)基配制方法按LY/T1882-2010中4.2.1進行。4.3培養(yǎng)基滅菌培養(yǎng)基滅菌按LY/T1882-2010中4.2.2進行。4.4培養(yǎng)基保存培養(yǎng)基保存按LY/T1882-2010中4.2.3進行。5外植體誘導(dǎo)5.1外植體的選擇從生長健壯無病蟲害的母株上選取5cm~6cm長的幼嫩葉片作為外植體。5.2外植體消毒處理將外植體置于燒杯中，用洗潔精溶液洗滌，然后用自來水沖2h~4h，在超凈工作臺上用75%酒精浸泡消毒30s，倒掉酒精，用無菌水沖洗3次~4次；再用0.1%氯化汞溶液浸泡6min，期間不斷搖動，倒凈氯化汞溶液，用無菌水沖洗6次~7次，放在接種盤內(nèi)用無菌濾紙吸干表面水分。5.3外植體接種與誘導(dǎo)培養(yǎng)將消毒處理后的外植體切成長1cm~2cm，接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進行初代誘導(dǎo)培養(yǎng)。操作時，先將培養(yǎng)瓶的瓶蓋取下，再將培養(yǎng)瓶的瓶口傾斜靠近酒精燈火焰，用鑷子將外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，將培養(yǎng)瓶瓶口在酒精燈外焰上旋轉(zhuǎn)灼燒后封好瓶口。接種完成后，在培養(yǎng)瓶上標注接種物名稱和日期，培養(yǎng)20d~25d。6繼代增殖外植體經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)生成愈傷組織后，分化產(chǎn)生不定芽，將不定芽不斷轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，20d~25d為1代，進行多次繼代。7生根培養(yǎng)將繼代后的組培苗接種在生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)25d~30d，當組培苗基部長出健壯的不定根3條~5條，根長為2cm~3cm時，即可出瓶移栽。8培養(yǎng)條件培養(yǎng)室白天的溫度控制在25±2℃，夜間不低于15℃，相對空氣濕度控制在70%~80%，光照強度為2000Lux~3000Lux，光照時間為12h/d~14h/d。3DB23/TXXXX—XXXX9煉苗移栽9.1煉苗將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到過渡培養(yǎng)室中，自然光照下煉苗2d~3d，然后打開瓶蓋，再煉苗2d~3d，溫度控制在22~25℃。9.2移栽從培養(yǎng)瓶中取出生根的小苗，用清水洗凈根部的培養(yǎng)基，清洗培養(yǎng)基時動作要輕，避免傷根，將洗凈的生根苗移栽至裝有珍珠巖的穴盤中，每穴1株，移栽后要把苗周圍的基質(zhì)壓實，然后澆透水。9.3苗期管理將移栽后的組培苗放到溫室中，保證幼苗水分供需平衡，育苗水分管理按照GB/T6001進行。移栽初期應(yīng)進行遮陰，5d~7d后發(fā)現(xiàn)幼苗有生長趨勢，可以逐漸降低濕度，加強光照。溫室環(huán)境應(yīng)保持清潔，溫度控制在22℃~25℃