急性毒性二軍醫(yī)大學(xué)新藥評(píng)價(jià)中心新藥評(píng)價(jià)第1頁(yè)/共31頁(yè)臨床前毒理學(xué)評(píng)價(jià)目的意義

新藥評(píng)價(jià)的核心內(nèi)容之一

目的:確保臨床用藥安全超過(guò)限量、改變應(yīng)用范圍或用藥途徑變成毒物

1985--1994,收審新藥近四千種,已批準(zhǔn)上市

約占50%,而另外50%未被批準(zhǔn)上市新藥中,有相當(dāng)一部分就是因毒理學(xué)評(píng)價(jià)沒(méi)有通過(guò)第2頁(yè)/共31頁(yè)毒—無(wú)處不在

1274宋慈指出萬(wàn)物皆毒

美國(guó)“化學(xué)文摘”登記化學(xué)品約有一千萬(wàn)種,美國(guó)每年投放市場(chǎng)新化學(xué)品約一千五百種左右

1992年聯(lián)合國(guó)環(huán)境與發(fā)展大會(huì)將有毒化學(xué)品列為二十一世紀(jì)全球七大環(huán)境問(wèn)題之一

第3頁(yè)/共31頁(yè)藥害事件

1935-1937

美國(guó)

二硝基酚

減肥

白內(nèi)障、骨髓抑制,死亡

177人

1937

美國(guó)磺胺酏劑

消炎尿毒癥、腎衰，死亡107人1954-56法國(guó)有機(jī)錫抗感染207人視力障礙、其中102人死亡1959-62歐日反應(yīng)停鎮(zhèn)靜畸胎，12000多人1966-72日本氯碘喹啉腸道感染萬(wàn)余人失明或下肢癱瘓1937-59美國(guó)黃體酮先兆流產(chǎn)男性化,

600多人第4頁(yè)/共31頁(yè)臨床前毒理學(xué)評(píng)價(jià)成功例子

化學(xué)物質(zhì)致癌、致畸、己烯雌酚防流產(chǎn)而使子代女性出現(xiàn)陰道癌致癌、致畸、生殖及三代生殖試驗(yàn)青霉素嚴(yán)重過(guò)敏反應(yīng)動(dòng)物模型—豚鼠

第5頁(yè)/共31頁(yè)臨床前毒理學(xué)評(píng)價(jià)的局限性

新藥本身

新藥不斷地改變著化學(xué)結(jié)構(gòu)和藥理毒理學(xué)特征,不同于已有的老藥,因而也往往超出人們?cè)械闹R(shí)、經(jīng)驗(yàn)和評(píng)價(jià)手段所達(dá)到的預(yù)測(cè)能力

第6頁(yè)/共31頁(yè)臨床前毒理學(xué)評(píng)價(jià)的局限性現(xiàn)有評(píng)價(jià)手段不能完全適應(yīng)“新藥”評(píng)價(jià)需要

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)缺點(diǎn)

種屬差異

數(shù)量有限

品種單一

健康模型劑量太大第7頁(yè)/共31頁(yè)臨床前毒理學(xué)評(píng)價(jià)總的要求找出毒性劑量Toxicdosage確定安全劑量范圍

Safetymargin毒性反應(yīng)Toxicreaction:性質(zhì)、程度、量毒關(guān)系、產(chǎn)生時(shí)間，達(dá)峰時(shí)間,

持續(xù)時(shí)間及反復(fù)產(chǎn)生毒性反應(yīng)時(shí)間、遲發(fā)性、蓄積性、耐受性

尋找毒性反應(yīng)靶器官Targetorgan

毒性反應(yīng)是否可逆Reversibility確保臨床用藥安全第8頁(yè)/共31頁(yè)急性毒性試驗(yàn)?zāi)康囊饬x基本內(nèi)容和要求急性毒性LD50常用計(jì)算方法有關(guān)問(wèn)題第9頁(yè)/共31頁(yè)急性毒性試驗(yàn)

目的意義

了解新藥急性毒性強(qiáng)度

計(jì)算新藥相對(duì)毒性參數(shù)

為臨床毒副反應(yīng)監(jiān)護(hù)提供參考依據(jù)

為長(zhǎng)期毒性、蓄積性毒性和特殊毒性試驗(yàn)選擇劑量提供依據(jù)

其它方面

第10頁(yè)/共31頁(yè)新藥急性毒性的強(qiáng)度

表.化學(xué)物質(zhì)的急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(WHO,1977)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━毒性分級(jí)ig大、小鼠LD50

吸入大、小鼠LC50

涂皮兔LD50

人口服可能的

(mg/kg)(ppm)(mg/kg)致死量(g)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━極毒<1<10<50.06劇毒1-5010-1005-444中等毒51-500101-100045-35030低毒501-50001001-10000351-2180250實(shí)際無(wú)毒>5000>10000>2180>1200━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━*吸入毒性LC50指中毒欄中的濃度,一次中毒2-4小時(shí),觀察24天

第11頁(yè)/共31頁(yè)新藥急性毒性的強(qiáng)度

表.歐共體對(duì)化學(xué)物的毒性分級(jí)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━動(dòng)物及給藥途徑劇毒毒有害━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━大鼠LD50ig(mg/kg)≤2525-200200-2000大鼠或兔經(jīng)皮LD50(mg/kg)≤5050-400400-2000大鼠LC50(mg/L/4hr)≤0.50.2-22-20━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━

第12頁(yè)/共31頁(yè)相對(duì)毒性參數(shù)

治療指數(shù)TI=LD50/ED50安全系數(shù)SF=LD5/ED95可靠或確實(shí)安全系數(shù)CSF=LD1/ED99安全范圍SM=(LD1/ED99-1)X100%SED50/ED50,越大越安全LD5基本無(wú)害量ED95基本有效量LD1肯定無(wú)害量

ED99肯定有效量第13頁(yè)/共31頁(yè)為臨床毒副反應(yīng)監(jiān)護(hù)提供參考

中毒癥狀起始時(shí)間持續(xù)時(shí)間恢復(fù)時(shí)間對(duì)抗試驗(yàn)為臨床急救提供依據(jù)

第14頁(yè)/共31頁(yè)急性毒性試驗(yàn)觀察動(dòng)物反應(yīng)指標(biāo)

中毒部位毒性癥狀表現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)

呆滯:對(duì)刺激反應(yīng)遲緩、減弱、消失；不安：對(duì)刺激反應(yīng)過(guò)敏、興奮；強(qiáng)直：行動(dòng)姿勢(shì)改變、叫聲異常、震顫、共濟(jì)失調(diào)

植物神經(jīng)系統(tǒng)瞳孔縮小、放大;分泌增多，如流涎、流淚

呼吸系統(tǒng)鼻孔流鼻涕、呼吸緩慢、困難、潮式呼吸、速率加快等心血管系統(tǒng)心動(dòng)過(guò)速、緩慢、心律不齊、心跳過(guò)強(qiáng)、微弱胃腸系統(tǒng)氣脹、腹瀉、便秘、糞便不成形、糞便黑色生殖系統(tǒng)乳腺膨脹、會(huì)陰部污濁、陰囊下垂等皮膚、毛皮膚發(fā)紅、松弛、皮疹、毛豎起粘膜口腔流粘液、充血、潰瘍、出血性紫紺眼睛上瞼下垂、眼球突出混濁其他直腸溫度升高、降低；消瘦；拒食等

第15頁(yè)/共31頁(yè)為長(zhǎng)毒、蓄毒試驗(yàn)選擇劑量提供依據(jù)

長(zhǎng)期毒性劑量設(shè)計(jì)LD50法(1/10,1/50,1/100)MTD法(1,1/3,1/10)蓄積性毒性劑量設(shè)計(jì)1/10LD50,然后按等比級(jí)數(shù)1.5倍逐漸遞增第16頁(yè)/共31頁(yè)為特殊毒性試驗(yàn)選擇劑量提供依據(jù)

生殖毒性試驗(yàn)高劑量為母鼠MTD致突變?cè)囼?yàn)嚙齒類(lèi)動(dòng)物微核試驗(yàn)高劑量為1/2LD50果蠅伴性隱性致死試驗(yàn)的高、低劑量分別為1/2LD50和1/4LD50精原細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)高劑量應(yīng)為1/2LD50

動(dòng)物短期致癌試驗(yàn)高劑量應(yīng)是MTD主要藥效學(xué)劑量限度、一般藥理學(xué)和藥動(dòng)學(xué)劑量設(shè)計(jì)也要參考急性毒性的LD50

第17頁(yè)/共31頁(yè)其它方面

系列化合物的合格率分析(除理化性質(zhì)為主外)也參考LD50復(fù)方中藥物的相互作用,有時(shí)也通過(guò)拆方及合用的LD50來(lái)判別相互作用的性質(zhì)第18頁(yè)/共31頁(yè)基本內(nèi)容和要求---動(dòng)物嚙齒類(lèi)----小鼠或大鼠非嚙齒類(lèi)----犬或其它一類(lèi)藥至少必須用二種動(dòng)物(嚙齒類(lèi)及非嚙齒類(lèi)各一種,其中非嚙齒類(lèi)宜用Beagle犬);其它類(lèi)酌情用二種動(dòng)物小鼠18-22g,同次體重相差不超過(guò)4g;大鼠120-150g,同次體重不超過(guò)20g;犬用成年犬♀♂各半

第19頁(yè)/共31頁(yè)基本內(nèi)容和要求---給藥途徑一類(lèi)藥及可溶于水的至少用兩種給藥途徑,其中一種必須是臨床給藥途徑其它類(lèi)至少有一種臨床給藥途徑實(shí)驗(yàn)動(dòng)物上無(wú)法進(jìn)行時(shí),則作特殊說(shuō)明,可用別的給藥途徑第20頁(yè)/共31頁(yè)基本內(nèi)容和要求---劑量和分組

小動(dòng)物一般分4-6個(gè)劑量組,組距0.65-0.85,求出LD50大動(dòng)物可用50%等量遞升法,一般用6條犬,求出ALD和MTD

第21頁(yè)/共31頁(yè)基本內(nèi)容和要求---給藥容積

不等濃度等容量給藥常規(guī)給藥容量為:小鼠ig0.2-0.4ml/10g,ip、sc和iv0.1-0.2ml/10g大鼠ig1-1.5ml/100g,ip、sc和iv為0.5-1ml/100g

第22頁(yè)/共31頁(yè)基本內(nèi)容和要求---觀察記錄

給藥當(dāng)天,尤其是藥后4h內(nèi)應(yīng)嚴(yán)密觀察并記錄,然后每天上下午各一次,連續(xù)觀察7-14天詳細(xì)記錄動(dòng)物毒性反應(yīng)情況和死亡情況,中毒癥狀,中毒發(fā)生時(shí)間、持續(xù)時(shí)間、恢復(fù)期及動(dòng)物最短死亡時(shí)間、最長(zhǎng)死亡時(shí)間和平均死亡時(shí)間

死亡動(dòng)物應(yīng)及時(shí)進(jìn)行尸檢,記錄病變情況;若肉眼可見(jiàn)變化時(shí)則需進(jìn)行病理檢查第23頁(yè)/共31頁(yè)基本內(nèi)容和要求---結(jié)果處理

實(shí)驗(yàn)資料按下表列出,用Bliss法計(jì)算LD50。必要時(shí)求出不同性別LD50

表.XXX急性毒性結(jié)果及LD50計(jì)算━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━劑量對(duì)數(shù)劑量動(dòng)物數(shù)死亡動(dòng)物數(shù)死亡率機(jī)率單位LD50及可信限(mg/kg)(X)(只)(只)%(Y)(mg/kg)━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━第24頁(yè)/共31頁(yè)基本內(nèi)容和要求---MTD測(cè)定

最大允許濃度和最大允許容積仍未測(cè)出LD50,可只求MTD值。方法：一次給20只動(dòng)物,連續(xù)觀察7-14天,未見(jiàn)任何動(dòng)物死亡,則MTD＞XXg/kg。若僅有個(gè)別死亡,則宜寫(xiě)成LD50>XXg/kg。iv要求

pH5-8，速度：大、小鼠

10-20s。ig時(shí)空腹,即禁食12-16h左右第25頁(yè)/共31頁(yè)表.急性毒性試驗(yàn)常用容量和最大容量(ml)

━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━給藥途徑小鼠大鼠豚鼠家兔狗

ig0.2-1.01-41-55-1050-100ip0.2-1.01-32-55-105-15im0.1-0.20.2-0.50.2-0.50.5-12-5iv0.2-0.51-21-53-1035-50sc0.1-0.50.5-10.5-21-33-10━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━*小鼠指20g,大鼠200g,豚鼠200g,兔2.5kg,狗10kg,前者為常用量,后者為最大容量第26頁(yè)/共31頁(yè)急性毒性LD50常用的統(tǒng)計(jì)方法白侖氏法(Behren'smethod)(累計(jì)法)密勒和滕特爾二氏法(MillerandTaninter'smethod),也叫目測(cè)法、概率法