word.zl-word.zl-全國臨床檢驗操作規(guī)程〔第3版〕精液檢查一．標本收集.在3個月內(nèi)檢查2次至數(shù)次，二次之間間隔應＞7天，但不超過3周。.采樣前至少禁欲3天，但不超過7天。.采樣后1h內(nèi)送到檢驗科。.用清潔枯燥廣口塑料或玻璃小瓶收集精液，不宜采用避孕套內(nèi)的精液。某些塑料容器具有殺精子作用，但是否適宜應事先做實驗。.應將射精精液全部送檢。.傳送時溫度應在20~40℃。.容器必須注明患者姓名和〔或〕識別號〔標本號或條碼〕，標本采集日期和時間。.和所有體液一樣，精液也必須按照潛在生物危害物質處理，因為精液內(nèi)可能含有肝炎病毒、人類免疫缺陷〔病毒〕和皰疹病毒等。二．一般性狀檢查一般性狀檢查包括記錄精液量、顏色、透明度、粘稠度和是否液化。.外觀正常精液呈灰白色或乳白色，不透明。棕色或紅色提示出血。黃色可能服用某種藥物。精子濃度低時精液略顯透明。正常精液是一種均勻黏稠的液體，射精后立即凝固，30min后開場液化。假設液化時間超過60min考慮為異常，應記錄這種情況。正常精液可含有不液化的膠凍狀顆粒。.量用刻度量筒或移液管測定。正常一次全部射精精液量約2~5ml。精液量過多或過少是不育的原因之一。.黏稠度在精液全部液化后，用Pasteur滴管吸入精液，然后讓精液依靠重力滴落，并觀察拉絲長度。正常精液呈水樣，形成不連續(xù)小滴。黏稠度異常時，形成絲狀或線狀液滴〔長度大于2cm〕。也可使用玻璃棒或注射器測定黏稠度。.酸堿度用精細試帶檢查。正常人pH為7.2~8.0，平均7.8。三．精子存活率精子存活率〔motility〕用活精子比例來反映。1.伊紅染色法【試劑】5g/L伊紅Y染色液：伊紅Y0.5g，加生理鹽水至100ml。【操作】在載玻片上加新鮮精液和伊紅溶液各1滴，混勻后，加上蓋玻片，30s后在高倍鏡下觀察，活精子不著色。死精子染成紅色。計數(shù)200個精子，計算未著色〔活精子〕的百分率。.伊紅-苯胺黑染色法【試劑】〔1〕10g/L伊紅Y染色液：伊紅1g，加蒸餾水至100ml。〔2〕100g/L苯胺黑染色液：苯胺黑10g，加蒸餾水至100ml?！静僮鳌咳⌒≡嚬?，加新鮮精液和伊紅溶液各1滴，混勻。30s后，加苯胺黑溶液3滴，混勻。30s后，在載玻片上，加精液-伊紅-苯胺黑混合液1滴，制成涂片，待干。油鏡下觀察，活精子為白色，死精子染成紅色，背景呈黑色，計數(shù)200個精子，計算未著色活精子的百分率。.精子低滲膨脹試驗〔HOS〕【試劑】膨脹液：枸櫞酸鈉0.735g，果糖1.351g，加蒸餾水至100ml。分裝，-20℃冷凍保存，使用前解凍，并充分混勻?！静僮鳌咳⌒≡嚬埽?ml膨脹液，37℃預溫5min。加0.1ml液化精液，輕輕攪勻，在37℃孵育至少30min。在相差顯微鏡下觀察精子，膨脹精子為尾部形狀發(fā)生變化的精子，即活精子。計數(shù)200個精子，計算膨脹精子的百分率?！緟⒖紖^(qū)間】在排精30~60min內(nèi)，約有70%以上精子應為活動精子。精子低滲膨脹試驗應有60%以上精子出現(xiàn)尾部膨脹?！靖阶ⅰ咳缡覝氐陀?0℃時，應將標本先放入37℃溫育5~10min后鏡檢。某些標本試驗前就有尾部卷曲的精子，在HOS試驗前，計算未處理標本中尾部卷曲精子的百分數(shù)，實際HOS試驗結果百分率就等于測定值減去未處理標本中尾部卷曲精子百分率。HOS也是精子尾部膜功能試驗。四．精子活力WHO推薦一種無需復雜設備而能進展簡單精子活力〔activity〕分級的方法?！静僮鳌咳?0似標本涂片，連續(xù)觀察至少5個視野，對200個精子進展分級，首先計數(shù)a級和b級精子，隨后在同一視野內(nèi)計數(shù)c級和d級精子?！窘Y果判斷】根據(jù)下述標準把精子活力分為a、b、c、d四級。a級：快速前向運動：37℃時速度）25^m/s,或20℃時速度）20^m/s〔25^m大約相當于精子5個頭部的長度，或半個尾部的長度〕。b級：慢速或者呆滯的前向運動。c級：非前向運動〔＜5prn/s〕。d級：不動。【參考區(qū)間】正常精液采集后60min內(nèi)科級+b級精子達50%以上。五．精子計數(shù)【試劑】精子稀釋液：碳酸氫鈉5g,40%甲醛溶液1ml,蒸餾水100ml,待完全溶解過濾后使用?！静僮鳌坑谛≡嚬軆?nèi)加精子稀釋液0.38ml,吸液化精液20似，參加稀釋液內(nèi)搖勻。充分搖勻后，滴入改良Neubauer血細胞計數(shù)池內(nèi)，靜置1~2min,待精子下沉后，以精子頭部作為基準進展計數(shù)。如每個中央方格內(nèi)精子少于10個,應計數(shù)所有25個中方格內(nèi)的精子數(shù)。如每個中央方格內(nèi)精子在10~40個,應計數(shù)10個中方格內(nèi)的精子數(shù)。如每個中央方格內(nèi)精子多于40個,應計數(shù)5個中方格內(nèi)的精子數(shù)?！窘Y果判斷】精子數(shù)=計數(shù)結果*25*1*20*103/ml計數(shù)中方格數(shù) 計數(shù)池高度=計數(shù)結果*1*5*105/ml計數(shù)中方格數(shù) 計數(shù)池高度【參考區(qū)間】正常男性）20*106/ml【附注】收集精液前防止性生活3~7天。收集精液標本后應在1h內(nèi)檢驗，冬季應注意保溫。出現(xiàn)一次異常結果,應隔1周后復查,反復查2~3次方能得出比較正確的結果。如低倍鏡、高倍鏡檢查均無精子,應將精液離心沉淀后再涂片檢查,如兩次均無精子,報告“無精子〞。六．精子形態(tài)觀察【試劑】改良巴氏染色液、Shorr染色液、Diff-Quik快速染色液：商品化染色液一般質量均佳，但實驗室也可自行配制?！静僮鳌?在載玻片上滴1滴精液，約5~20似，采用壓拉涂片法或推片法制片。.待干后，巴氏染色法用等量95%乙醇和乙醚混合液固定5~15min；Shorr染色法用75%乙醇固定1min；Diff-Quik快速染色法用甲醇固定15s。.作改良巴氏、Shorr或Diff-Quik染色，然后在油鏡下觀察。.精子頭部頂體染成淡藍色，頂體后區(qū)域染成深藍色，中段染成淡紅色，尾部染成藍色或淡紅色，細胞質小滴位于頭部后面或中段周圍，巴氏染色染成綠色。【結果判斷】評估精子正常形態(tài)時應采用嚴格標準，只有頭、頸、中段和尾部都正常的精子才正常。精子頭的形狀必須是橢圓形，巴氏染色精子頭部長4.0~5.0^m,寬2.5~3.5^m,長寬之比應在1.50~1.75，頂體的界限清晰，約占頭部的40%?70%。中段細，寬度＜Sm,約為頭部長度的1.5倍，且在軸線上緊貼頭部，細胞質小滴應小于正常頭部大小的一半。尾部應是直的、均一的，比中段細，非卷曲，其長約為45^m。所有形態(tài)學處于臨界狀態(tài)的精子均列為異常。異常精子可有：①頭部缺陷：大頭、小頭、錐形頭、梨形頭、圓頭、無定形頭、有空泡頭、頂體過小頭、雙頭等；②頸段和中段缺陷：頸部彎曲、中段非對稱地接在頭部、粗的或不規(guī)那么中段、異常細的中段等；③尾部缺陷：短尾、多尾、發(fā)卡形尾、尾部斷裂、尾部彎曲、尾部寬度不規(guī)那么、尾部卷曲等?！緟⒖紖^(qū)間】正常人精液中正常形態(tài)者》30%〔異常精子應少于20%，如超過20%為不正?！场Ｆ撸幽幽腔顒泳右愿鞣N方式，如頭對頭，尾對尾或頭對尾等彼此粘在一起。以分級方式報告，從“-〞〔沒有凝集〕~“3+〞〔所有可動的精子凝集到一起〕。凝集的存在，提示可能為免疫因素引起不育。八．非精子細胞精液含有的非精子細胞成分，成為“圓細胞〞，這些細胞包括泌尿生殖道上皮細胞、前列腺細胞、生精細胞和白細胞。正常人精液中：圓細胞＜5*106/ml。正常精液中白細胞，主要是中性粒細胞，數(shù)量不應超過1*106/ml。過多提示感染，為白細胞精子癥。九．其他成分精液中可以有結晶體、卵磷脂小體、淀粉樣體、脂滴、脫落上皮細胞等。十．臨床意義1．正常精液呈灰白色，久未排精者可呈淡黃色；離體30min后，完全液化。根據(jù)精液檢查結果，臨床上常用于診斷男子不育癥及觀察輸精管結扎術后的效果。2.正常精子活力一般在a級）25%。如活力a級＜25%;a級+b級＜50%可成為男性不育的原因。3．精索靜脈曲張癥患者精液中常出現(xiàn)形態(tài)不正常的精子。4．血液中有毒性代謝產(chǎn)物、接觸鉛等污染物、應用大劑量放射線及細胞毒藥物等可使精子形態(tài)異常。前列腺液檢查一．標本收集臨床醫(yī)師作前列腺按摩術后，采集標本于清潔玻片上，立即送檢。二．檢查內(nèi)容記錄液體顏色、是否混有血液、有無膿塊等。濕片鏡檢，高倍鏡下觀察白細胞、紅細胞、卵磷脂小體，其次為上皮細胞、精子、淀粉樣體等。革蘭染色后檢查細菌