細胞工程與基因工程詳解演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有33頁\編輯于星期三（優(yōu)選）細胞工程與基因工程現(xiàn)在是2頁\一共有33頁\編輯于星期三酶生物活性分子天然細胞天然細胞干細胞工程干細胞工程細胞組織器官個體組織工程組織器官個體生物活性分子發(fā)酵工程細胞工程代謝工程分離工程分離工程酶工程采集破碎蛋白質(zhì)工程途徑工程基因工程生物工程的技術(shù)體系細胞工程分離工程分離工程現(xiàn)在是3頁\一共有33頁\編輯于星期三細胞工程的基本原理

細胞工程是指通過組織、細胞、細胞器水平上的篩選和改造，獲得具有商業(yè)價值的人造組織（器官）、工程細胞株或細胞系，再通過規(guī)?；囵B(yǎng)，制備特殊產(chǎn)品的技術(shù)和過程。細胞工程包括：動植物細胞及組織大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)動植物細胞融合技術(shù)動植物細胞重組技術(shù)干細胞技術(shù)（組織或器官再生技術(shù)，即組織工程）現(xiàn)在是4頁\一共有33頁\編輯于星期三植物細胞和組織的大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)基本原理：植物細胞的分化全能性現(xiàn)在是5頁\一共有33頁\編輯于星期三動物細胞的大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)基本原理：動物細胞的接觸抑制性現(xiàn)在是6頁\一共有33頁\編輯于星期三動植物細胞融合技術(shù)將兩種不同性狀的細胞在促融劑的幫助下融合在一起，并從中篩選出具有優(yōu)異性能的雜合細胞。例如，B淋巴細胞具有合成特異性抗體的性狀，骨髓瘤細胞具有生長迅速的性狀。將兩者融合，就能篩選到集兩者優(yōu)點的雜合細胞，即單克隆抗體技術(shù)?，F(xiàn)在是7頁\一共有33頁\編輯于星期三細胞重組是把不同種類的細胞的部件重新組合裝配，包括細胞核移植、葉綠體移植、核糖體重建及線粒體裝配等，由此獲得具有優(yōu)良性能的重組細胞株或細胞系動植物細胞重組技術(shù)現(xiàn)在是8頁\一共有33頁\編輯于星期三經(jīng)歷277次乳腺細胞核的移植實驗；獲得29個發(fā)育為八細胞胚；使用13頭代孕母親；生出多莉動植物細胞重組技術(shù)現(xiàn)在是9頁\一共有33頁\編輯于星期三骨髓多能干細胞骨髓細胞淋巴細胞網(wǎng)狀細胞紅細胞巨核細胞血小板單核細胞巨噬細胞嗜中酸堿性粒細胞B、T淋巴細胞干細胞技術(shù)（組織或器官再生技術(shù)）現(xiàn)在是10頁\一共有33頁\編輯于星期三基因工程的基本原理切接轉(zhuǎn)增檢現(xiàn)在是11頁\一共有33頁\編輯于星期三DNA的體外重組：切與接用限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA分子識別雙鏈DNA分子中4-8對堿基的特定序列大部分酶的切割位點在識別序列內(nèi)部或兩側(cè)識別切割序列呈典型的旋轉(zhuǎn)對稱型回文結(jié)構(gòu)5’…GCTGAATTCGAG…3’3’…CGACTTAAGCTC…5’EcoRI的識別序列EcoRI的切割位點現(xiàn)在是12頁\一共有33頁\編輯于星期三EcoRI等產(chǎn)生的5’

粘性末端5’…G-C-T-G-A-A-T-T-C-G-A-G…3’3’…C-G-A-C-T-T-A-A-G-C-T-C…5’EcoRI37℃5’…G-C-T-G-OH

P-A-A-T-T-C-G-A-G…3’3’…C-G-A-C-T-T-A-A-P

OH-G-C-T-C…5’退火4-7℃5’…G-C-T-G

A-A-T-T-C-G-A-G…3’3’…C-G-A-C-T-T-A-A

G-C-T-C…5’OHPOHP現(xiàn)在是13頁\一共有33頁\編輯于星期三PstI等產(chǎn)生的3’

粘性末端5’…G-C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G…3’3’…C-G-A-G-A-C-G-T-C-C-T-C…5’PstI37℃5’…G-C-T-C-T-G-C-A-OH

P-G-G-A-G…3’3’…C-G-A-G-P

OH-A-C-G-T-C-C-T-C…5’退火4-7℃5’…G-C-T-C-T-G-C-A

G-G-A-G…3’3’…C-G-A-G

A-C-G-T-C-C-T-C…5’OHPOHP現(xiàn)在是14頁\一共有33頁\編輯于星期三PvuII等產(chǎn)生的平頭末端5’…G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G…3’3’…C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C…5’PvuII37℃5’…G-C-T-C-A-G-OH

P-C-T-G-G-A-G…3’3’…C-G-A-G-T-C-P

OH-G-A-C-C-T-C…5’現(xiàn)在是15頁\一共有33頁\編輯于星期三DNA的體外重組：切與接用T4-DNA連接酶連接DNA分子修復(fù)雙鏈DNA上缺口處的磷酸二酯鍵T4-DNA連接酶5’…G-C-T-C-T-G-C-A

G-G-A-G…3’3’…C-G-A-G

A-C-G-T-C-C-T-C…5’OHPOHP5’…G-C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G…3’3’…C-G-A-G-A-C-G-T-C-C-T-C…5’nicknick現(xiàn)在是16頁\一共有33頁\編輯于星期三DNA的體外重組：切與接用T4-DNA連接酶連接DNA分子連接多個平頭雙鏈DNA分子5’…G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G

…3’3’…C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C

…5’5’…G-C-T-C-A-G-OH

P-C-T-G-G-A-G

…3’3’…C-G-A-G-T-C-P

OH-G-A-C-C-T-C

…5’T4-DNA連接酶現(xiàn)在是17頁\一共有33頁\編輯于星期三同種內(nèi)切酶生產(chǎn)的粘性末端的連接5'

5'GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGEcoRI5'GCTTAAAATTCG5'

5'

GCTTAA

5'5'

AATTCG5'

退火GCTTAAAATTCG5'

GCTTAA

5'

AATTCGGCTTAAAATTCG5'

GCTTAA

5'

AATTCGT4-DNAligaseGAATTCCTTAAG5'

5'GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAG5'

5'GAATTCCTTAAG現(xiàn)在是18頁\一共有33頁\編輯于星期三同尾酶生產(chǎn)的粘性末端的連接BamHI5'

5'GGATCCCCTAGGGGATCCCCTAGG5'GCCTAGGATCCG5'

5'

TACTAG

5'5'

GATCAT5'

退火GCCTAGGATCCG5'

TACTAG

5'

GATCATT4-DNAligaseTGATCCACTAGG5'

5'GGATCACCTAGT5'

TGATCAACTAGT5'

BclIGCCTAGGATCCG5'

TACTAG

5'

GATCATTGATCCACTAGG5'

5'GGATCACCTAGT現(xiàn)在是19頁\一共有33頁\編輯于星期三同尾酶生產(chǎn)的粘性末端的連接載體質(zhì)粒BamHISau3AIGGATCCCCTAGGGATCCTAGBamHISau3AISau3AIGATCCGCTAG現(xiàn)在是20頁\一共有33頁\編輯于星期三不同酶生產(chǎn)的粘性末端的連接BamHI5'

5'GGATCCCCTAGGCTGCAGGACGTCGATCCG5'

5'

G5'

GACGTCT4-DNAligase5'

CTGCAGGACGTC5'

PstI3'

PstICTGCA3'

GGGATCCCCTAGGBamHICCTAG5'

5'

G5'

GACGTCCCTAGGATCCGCTGCAG5'

G5'ACGTCCCTAGGGATCCCTGCAGG混合退火現(xiàn)在是21頁\一共有33頁\編輯于星期三重組DNA分子的轉(zhuǎn)化和擴增：轉(zhuǎn)與增物理轉(zhuǎn)化法：鈣離子誘導(dǎo)的細菌轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化電擊轉(zhuǎn)化生物轉(zhuǎn)化法：病毒轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)化細菌接合轉(zhuǎn)化現(xiàn)在是22頁\一共有33頁\編輯于星期三轉(zhuǎn)化子的篩選和鑒定：檢由于重組率和轉(zhuǎn)化率不可能達到理想極限，因此必須借助各種篩選和鑒定方法區(qū)分轉(zhuǎn)化子與非轉(zhuǎn)化子、重組子與非重組子、目的重組子與非目的重組子。轉(zhuǎn)化子重組子目的重組子現(xiàn)在是23頁\一共有33頁\編輯于星期三基于載體遺傳標記篩選抗藥性篩選法ROPROISalIBamHITcrPvuIPstIPstIEcoRIClaIHindIIIHindIIBalIAprpBR3224363bpori此類篩選法可區(qū)分轉(zhuǎn)化子與非轉(zhuǎn)化子、重組子與非重組子。將外源DNA片段插在EcoRI位點：非重組子呈Apr、Tcr重組子呈Apr、Tcr將外源DNA片段插在BamHI位點：非重組子呈Apr、Tcr重組子呈Apr、Tcs

現(xiàn)在是24頁\一共有33頁\編輯于星期三基于載體遺傳標記篩選抗藥性篩選法抗藥性篩選法的基本操作：

先將轉(zhuǎn)化液涂布含有Ap的平板上；再將Ap平板上的轉(zhuǎn)化子影印至含有Ap和Tc的平板上。

在Ap平板上生長、但在Ap和Tc平板上不長的轉(zhuǎn)化子即為重組子。

ApAp+Tc影印挑選現(xiàn)在是25頁\一共有33頁\編輯于星期三基于載體遺傳標記篩選重組子（Apr+lacZ-）

pUC18AprlacZ'oriAp+X-gal顯色篩選法現(xiàn)在是26頁\一共有33頁\編輯于星期三pUC182.7kbHindIIISphIPstISalIBamHISmaIKpnIEcoRIAprlacZ’oriBBEP4.0kb1.0kb0.8kb區(qū)分重組子與非重組子用BamHI酶切轉(zhuǎn)化子質(zhì)粒DNA電泳觀察酶解產(chǎn)物片段重組子：2.7kb+4.0kb非重組子：2.7kb如果外源DNA片段也是2.7kb，最好選用單一切口的酶將質(zhì)粒線型化，然后通過其長度來鑒定其是否為重組子基于克隆DNA序列檢測限制性酶切圖譜法：現(xiàn)在是27頁\一共有33頁\編輯于星期三pUC182.7kbHindIIISphIPstISalIBamHISmaIKpnIEcoRIAprlacZ’oriBBEP4.0kb1.0kb0.8kb區(qū)分目的重組子與非目的重組子用EcoRI酶切轉(zhuǎn)化子質(zhì)粒DNA：目的重組子：3.0kb+3.7kb或者：1.0kb+5.7kb用PstI酶切轉(zhuǎn)化子質(zhì)粒DNA：目的重組子：3.2kb+3.5kb或者：0.8kb+5.9kb基于克隆DNA序列檢測限制性酶切圖譜法：現(xiàn)在是28頁\一共有33頁\編輯于星期三基于目標DNA序列鑒定DNA雜交法影印堿解雜交感光漂洗取膜ATGCCGTATGTGTCATAGCGGCATACACAG