上節(jié)回反向平行、右手螺旋，每周含10.5個(gè)堿基對(duì)氫鍵相互作用、堿基π堆積直徑2nm，堿基間距0.34nm4431TA432612CGA 432612CG上節(jié)回 DNA的損傷及修修復(fù)嘧啶二聚體或甲基化直接direct錯(cuò)配修mismatch恢復(fù)

切除修excision基或核易錯(cuò)修errorprone高變異性

重組修重新啟動(dòng)停滯的上節(jié)回

直接修這是一種 ”式修3上節(jié)回切除修例如

DNA連接4上節(jié)回拓?fù)?(1)：Lk=Tw+拓?fù)?(2)：σ=(Lk–Lk0)/Lk：連接 超螺旋數(shù)（大圈）σ： I型和II型拓?fù)洚悩?gòu)5上節(jié)回核小

超螺旋玫瑰花結(jié) 6上節(jié)回組蛋白八聚 其中146bpDNA7上節(jié)回

RNA結(jié)環(huán)結(jié)環(huán)結(jié)

發(fā)夾結(jié)原核真核5’加帽8上節(jié)回 tRNA的三葉草式二級(jí)結(jié)氨基酸受二氫尿嘧啶(D額外 (anti-codon 課程設(shè) 蛋白核酸的結(jié)核酸研究的化學(xué)DNARNA蛋白質(zhì)翻核苷酸分解代謝及生物核酸生物化第三核酸研究的化學(xué)課后閱讀第12Lehninger第8內(nèi)容提紫外吸變性和雜沉降特凝膠電核水解反

分析化有機(jī)化一、核酸的紫外吸核酸具有紫吸收范圍：240-290 U

λmax=DNA:A260/A280=1.8RNA:A260/A280=CTBeer–Lambert

A=減色效應(yīng)：核酸復(fù)性時(shí)，ε解釋：堿基間相互作吸光度A1對(duì)應(yīng)于：50ng/μL雙螺旋DNA20ng/μL寡核苷可用于監(jiān)測(cè)DNA熱變性進(jìn)二、核酸的變性、復(fù)性及雜氫鍵：A-T成鍵，G-C成鍵，G-C>A-成強(qiáng)大的疏水靜電引力：介質(zhì)中陽離子與核苷酸中 之*干擾這些相互作用會(huì)導(dǎo)致DNA變性DNA的變化學(xué)變

物化性質(zhì)發(fā)生改

粘度稀鹽溶物化性質(zhì)改沉稀鹽溶物化性質(zhì)改DNA 溫度Tm(melting 影響Tm值的因ⅱ）G-C含量GC%=(Tm-69.3)*介質(zhì)的離子強(qiáng)高離子強(qiáng)度Tm較高熔解溫度范圍DNA的復(fù)性和影響因素：降溫速度、DN段的大小、DNA退火：變性DNA緩慢冷卻而復(fù)性的過Southernblot(Southern印記硝硝酸纖維素隨后Alwine發(fā)明Northernblot用于雜交Burnette等人發(fā)明Westernblot識(shí)別蛋白質(zhì)三、核酸的沉降特DNA分子的大腸桿菌DNA：4×106bpMW長(zhǎng)1.4×106nm（L/D DNA：3.2×109bp,長(zhǎng)=2m（L/D≈109）極大的粘度；易于斷裂；易形成纖維狀物質(zhì)RNA分子沒有如此明顯的物化特CsCl密度梯度離分子沉降速度有很大差異超速離心：分離密度梯度超離分離RNA：蔗糖梯DNA：CsCl梯 ρ=1.660+0.00098(GC%)利用密度梯度離心純化破釋放1mol/L（水或濃鹽溶液）0.14mol/LDNP纖纏繞在玻

純化質(zhì)粒除去混雜

多次溶解、沉溶于水乙較純

RNA分子極四、核酸電泳分凝膠電影響電泳遷移率的因分子大小：遷移率與分子量對(duì)數(shù)成反膠濃度：遷移率與膠濃度成電壓：在一定范圍內(nèi)，遷移率正比于電堿基組聚丙烯酰胺凝膠電泳膠濃度：2.4~24分離片段大?。?.5~1000PAGE可分析小于1000bp的DNA和瓊脂糖凝膠電泳(agarosegel瓊脂糖濃度：0.1~2.5分離片段大?。?0~500000膠濃度分膠濃度分子量范圍1000~500~100~510~1~0.33~五、核 FrederickSanger(1918–2013)

Maxam-堿基特異性反A+G反甲酸催化脫嘌G反硫酸二甲酯使N7甲基C+T嘧啶環(huán)的肼C反1M哌啶加熱破壞磷酸酯 基本策略DNA分為四利用2’,3’-

物作用下合成 斷利用2’,3’-ddNTP使 法得到如下片段，由此推斷DNA序列

1 9 2)根據(jù)互補(bǔ)原則，可推知97 序列是76 42 3)重新整理得2 自動(dòng)化③①毛細(xì)管電 二 技術(shù)：高通 數(shù)據(jù)量高達(dá)18費(fèi)用$2Applied三 技術(shù)：?jiǎn)畏秩?技術(shù)：?jiǎn)畏至?、核酸的水解反核酸的水pH1.6，于37℃透析得DNA的磷酸酯較RNA會(huì)產(chǎn)生2’核苷酸和3核苷酸核酸酶分類）核苷酸酶、牛胰核糖核酸酶RNaseⅠ（內(nèi)切酶

+

+ 作用位核糖核酸酶T1（內(nèi)切酶，高專一性

3’-嘧啶核PPPPPP PPPPPP

PPP+PPP RNase

P

限制性內(nèi)切酶restrictionnuclease1968EColi特點(diǎn)專一性強(qiáng)，有嚴(yán)格的堿基序列專一性DNA的特定位點(diǎn)（往往為回文序列）命 母：細(xì)菌有不同株系時(shí)需加字母或數(shù)若同一菌株有不同種類的限制酶，要用大寫羅馬數(shù)字EcoREcoR識(shí)別一個(gè)6bp的序5’GAATTC3’CTTAAG(haemophilus堿性主要來自環(huán)上氮原穩(wěn)定

堿基氫 離狀

溶液互變異

堿基上的氫原子位置相對(duì)固七、核酸的固相合鏈①鏈增 ④鏈終止工作原理（DNA合成儀固相載體用核苷衍生化，進(jìn)入合成偶連反應(yīng)延長(zhǎng)核苷酸鏈直至要求的鏈長(zhǎng)脫離循環(huán)，過濾后從固相載體上脫下核苷酸純化得