厭氧處理硫酸鹽有機廢水的微生物學(xué)論文名稱：厭氧處理硫酸鹽有機廢水的微生物學(xué)作者：冀濱弘1，章非娟2，穆軍2，宋力杰2摘要：對間歇厭氧反應(yīng)器、UASB反應(yīng)器、復(fù)合式厭氧反應(yīng)器和厭氧濾池污泥中的發(fā)酵細(xì)菌、硫酸鹽還原菌、產(chǎn)甲烷菌的數(shù)量和生物相進行了分析，并觀察了顆粒污泥的結(jié)構(gòu)，剖析了影響厭氧顆粒污泥形成的因素。關(guān)鍵字：硫酸鹽有機廢水發(fā)酵細(xì)菌硫酸鹽還原菌產(chǎn)甲烷顆粒污泥中圖分類號：X703文獻(xiàn)標(biāo)識碼：C文章編號：1000-4602(2001)03-0070-041試驗材料與方法1.1培養(yǎng)基和稀釋水的配制試驗所用的各類細(xì)菌的培養(yǎng)基配方如下：①發(fā)酵細(xì)菌蛋白胨：10.0g；牛肉膏：3.0g；NaCl：5.0g；蒸餾水：1000mL；pH＝7.4～7.6。②硫酸鹽還原菌K2HPO4·3H2O：0.5g；CaCl2·2H2O：0.1g；MgSO4·7H2O：2.0g；FeSO4·7H2O：0.5g；維生素C：0.1g；NH4Cl：1.0g；乳酸鈉(70%)：5.0g；酵母膏：1.0g；NaCl：1.0g；硫代乙醇酸：0.1g；蒸餾水：1000mL；pH＝7.0～7.5。③產(chǎn)甲烷菌K2HPO4·3H2O：0.4g；CaCl2·2H2O：0.2g；MgSO4·7H2O：1.0g；MgCl2·6H2O：4.0g；NH4Cl：0.25g；NaCl：1.0g；KCl：0.3g；Na2S·9H2O：0.5g；CH3COONa：2.0g；NaHCO3：2.0g；(NH4)2Fe(SO4)2·7H2O：0.0028g；KH2PO4：0.14g；酵母粉：1.0g；刃天青：0.0002g；半胱氨酸：0.5g；沼氣發(fā)酵液：300mL；蒸餾水：1000mL；pH＝7.0。稀釋水配方如下：NaCl：7g；蒸餾水：1000mL；pH＝7.2～7.4。1.2微生物的計數(shù)和觀察方法微生物的計數(shù)采用三管最大可能數(shù)(MPN)法［1］。培養(yǎng)一定時間后(發(fā)酵細(xì)菌1d，產(chǎn)甲烷細(xì)菌21d，硫酸鹽還原菌7d)觀察生長結(jié)果，判斷細(xì)菌生長陽性的依據(jù)如表1所示［2］。詠表挨1塞厭氧細(xì)菌生東長陽性的判斷借依據(jù)創(chuàng)細(xì)菌類群回生長陽性的主京要判斷依據(jù)黑發(fā)酵細(xì)菌線培養(yǎng)液混濁烏產(chǎn)甲烷細(xì)菌若產(chǎn)生甲烷氣體囑硫酸鹽還原菌釣產(chǎn)采生沃Fe棵S齒黑色沉淀2試驗結(jié)果各反應(yīng)器的運行情況見表2。柏表希2笑反應(yīng)器的運老行情況鵲反應(yīng)器序號稀進水條件風(fēng)反應(yīng)器類型樣CO買D焰負(fù)荷問［眉kg/(m聰3林·d晝)淋］哈CO枕D員去除懸率糖(繼%)士SO憂4留2-浪負(fù)荷惑［鳳kg/(m悶3砍·d輸)普］孝SO伏4香2-佩還原垮率推(轉(zhuǎn)%)倒COD/SO逆2他4-困Fe崗(觀Ⅱ隊)(mg/L健)芒COD(mg墳/L)桂SO鑄4陶2-(mg/使L)不1存＃廢1逼∶唐1蹲/都6000嬸6000佛間歇式四0.6酷73.2介0.6播40.1俗2買＃瓜1善∶備1疤1.8繩6000積6000得間歇式偏0.6楚75插0.6祥44.9內(nèi)3壞＃間2害∶港1黎/貼12000詢6000址間歇式浸1.2蛛54.1翅0.6用81.5瓶4血＃灑2伴∶莖1瞇100之12000秀6000氏間歇式惜1.2羨82.7靈0.6庫82.6仍5朱＃忍5治∶燕1蔥/子5000館1000椒UASB恢5貌71.7賄1鑄83.2繞6囑＃屬5燥∶前1烈/來5000魔1000昆復(fù)合式臺5庫66.7柱1字93.3逮7乓＃溝2仰∶沸1才/鳴2000丈1000銹厭氧濾池挺4巷32.0帽2到69.7捐8王＃寫2爸∶敗1河/悄2000脫1000深厭氧濾池標(biāo)4貓31.3辦2群62.8隊9豆＃鼻2跌∶這1菜/題2000矛1000健厭氧濾池傭4拐25.2俯2嗚55.9各類細(xì)菌計數(shù)結(jié)果見表3，間歇厭氧反應(yīng)器中的微生物見圖1。占表矛3剛微生物的蛛計數(shù)結(jié)果圍個舞/mL湯序號竿發(fā)酵細(xì)菌捉硫酸鹽還原菌祥產(chǎn)甲烷細(xì)菌暖硫酸鹽還原菌個數(shù)蹄/漿產(chǎn)甲烷菌數(shù)半1掩＃尾(潑混厚合喘)超4.5×10乳6悉7.5×10局5哀1.4×10川5嬸5.4綿2爪＃紋(育混村合緩)咱2.0×10攤6貌1.1×10怖6述1.5×10斃5海7.3猴3益＃飼(諸混泳合愚)奧2.0×10遭7浮1.5×10網(wǎng)6箭1.1×10扶4離136.4尖4軋＃撕(乒混雷合度)揀1.4×10晌7位4.0×10枕6味7.5×10危5夏5.3堡5濟＃脅(忽下先層技)區(qū)1.4×10篇8蹄7.5×10蘇6靜1.4×10匯4舊535.7字6耽＃梯(蜜下曉層關(guān))淺1.4×10肯8糠4.5×10曠9戰(zhàn)2.5×10垃3茫1.8×10搏6手7選＃吊(派上枝層望)稱1.4×10戶6姐1.1×10琴7刑1.4×10替3霸7.9×10變3嚷8內(nèi)＃方(韻中沃層敵)虧1.1×10鎮(zhèn)7旁1.4×10欣8繳1.1×10掏6州1.3×10大2凱9推＃顆(正下向?qū)雍?械1.1×10塊8就4.5×10桶11齡1.1×10積2鹽4.1×10開93討論3.1間歇厭氧反應(yīng)器的生物相圖1和表3表明，在4個間歇厭氧反應(yīng)器中都是發(fā)酵細(xì)菌數(shù)量最多，硫酸鹽還原菌次之，產(chǎn)甲烷菌最少。計數(shù)結(jié)果與各反應(yīng)器水質(zhì)分析結(jié)果基本相符，說明投加鐵對抑制硫酸鹽還原菌作用不大。由于進水SO24-濃度較高(6000mg/L)，在SO42-不受限制的條件下，硫酸鹽還原菌比產(chǎn)甲烷菌具有熱力學(xué)上的優(yōu)勢，因此硫酸鹽還原菌生長繁殖得較好；采用以馴化產(chǎn)甲烷菌為主的馴化過程有利于產(chǎn)甲烷菌與硫酸鹽還原菌的競爭。當(dāng)有合適的COD/SO42-比值(≥2∶1)時，在同一個厭氧體系中硫酸鹽還原菌和產(chǎn)甲烷菌可建立良好的共生關(guān)系(見表2中4＃)，COD去除率與SO42-還原率均較高(見表2)。1＃、2＃反應(yīng)器的硫酸鹽還原菌數(shù)量均比產(chǎn)甲烷菌高，但其硫酸鹽還原率卻很低，可見低COD/SO42-(1∶1)不利于硫酸鹽還原菌競爭基質(zhì)。3＃反應(yīng)器中的硫酸鹽還原菌數(shù)量是產(chǎn)甲烷菌的136倍，可見其在反應(yīng)器中是占絕對優(yōu)勢，產(chǎn)甲烷菌受到抑制，故該反應(yīng)器的COD去除率特別低，而硫酸鹽還原率與4＃反應(yīng)器相仿(見表2)。3.2UASB和復(fù)合厭氧反應(yīng)器的生物相UASB和復(fù)合式厭氧反應(yīng)器的細(xì)菌計數(shù)結(jié)果如圖2和表3所示?？梢钥吹剑?個反應(yīng)器中發(fā)酵細(xì)菌數(shù)量相同，但硫酸鹽還原菌與產(chǎn)甲烷菌卻相差很大。在UASB反應(yīng)器中，硫酸鹽還原菌比產(chǎn)甲烷菌大2個數(shù)量級；在復(fù)合式厭氧反應(yīng)器中，硫酸鹽還原菌比產(chǎn)甲烷菌大6個數(shù)量級，是UASB反應(yīng)器中硫酸鹽還原菌的600倍。產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因與反應(yīng)器的結(jié)構(gòu)有關(guān)，復(fù)合式厭氧反應(yīng)器的上部設(shè)置有填料，這些填料對一些游離的硫酸鹽還原菌具有一定的截留作用，使其隨出水流失的數(shù)量較小；而UASB反應(yīng)器中，上部是三相分離區(qū)，沒有填料的截留作用，隨出水流失的硫酸鹽還原菌數(shù)量也就較大一些。3.3厭氧濾池中微生物的組成分析由表3可以看到，在硫酸鹽還原相中，以硫酸鹽還原菌和發(fā)酵細(xì)菌為主，產(chǎn)甲烷菌的數(shù)量較少。產(chǎn)生這種現(xiàn)象的主要原因可能有3個：①反應(yīng)器中的生態(tài)環(huán)境。硫酸鹽還原相中的pH值較低、硫化物濃度較高，不利于產(chǎn)甲烷菌的生長繁殖，因此污泥中產(chǎn)甲烷菌生長受到抑制，數(shù)量最少，而硫酸鹽還原菌和發(fā)酵細(xì)菌則較適于在這種環(huán)境下生長，故其數(shù)量較多，并能順利完成其產(chǎn)酸和硫酸鹽還原的功能。②硫酸鹽還原相的代謝途徑。厭氧濾池中硫酸鹽還原菌和產(chǎn)甲烷菌的電子流情況表明，在負(fù)荷為4kgCOD/(m3·d)和2kgSO2-4/(m3·d)時，大部分有機物被硫酸鹽還原菌利用，進行硫酸鹽還原反應(yīng)，少部分為產(chǎn)甲烷菌用于產(chǎn)甲烷。③硫酸鹽還原菌比產(chǎn)甲烷菌具有熱力學(xué)上的優(yōu)勢。當(dāng)硫酸鹽還原相中SO2-4濃度較高，SO2-4不受限制的條件下，硫酸鹽還原菌比產(chǎn)甲烷菌更具競爭優(yōu)勢，有利于硫酸鹽還原菌的繁殖，因此反應(yīng)器內(nèi)的硫酸鹽還原菌多于產(chǎn)甲烷菌。硫酸鹽還原相厭氧濾池不同濾層的細(xì)菌計數(shù)結(jié)果如圖3和表3所示。從圖3可以看到，從下部到上部隨著高度的增加，發(fā)酵細(xì)菌和硫酸鹽還原細(xì)菌逐步減少，而產(chǎn)甲烷菌在中層的數(shù)量最多，上層次之，下層的數(shù)量最少。分析原因是：由于下層水中COD/SO42-比值較低以及較高濃度的SO42-不利于產(chǎn)甲烷菌的生長，使硫酸鹽還原菌有較強的競爭能力，因此下層的硫酸鹽還原菌占優(yōu)勢，是產(chǎn)甲烷菌的4.09×109倍；隨著高度的上升，SO42-被大量地去除，中層水、上層水的COD/SO42-比值比下層水的要大，而有機物濃度還較高，改善了產(chǎn)甲烷菌的生長環(huán)境，使產(chǎn)甲烷菌的競爭能力增強，有利于產(chǎn)甲烷菌的生長繁殖，因此在中層、上層的產(chǎn)甲烷菌數(shù)量要多于下層。4顆粒污泥的結(jié)構(gòu)和生物相4.1材料與方法顆粒污泥樣取自于硫酸鹽還原相厭氧濾池下層的灰白色顆粒污泥，制片之后，在掃描電子顯微鏡下觀察。掃描電子顯微鏡樣本制備過程基本為［3］：樣本的取材和固定→樣品脫水→臨界點干燥→金屬噴金→電鏡觀察→照相。4.2試驗結(jié)果與討論4.2.1顆粒污泥表面結(jié)構(gòu)和生物相分布試驗樣品在掃描電子顯微鏡1500～10000的倍數(shù)下放大觀察，照片如圖4～7所示。由圖4可以看到，厭氧濾池中顆粒污泥表面凸凹不平，有起伏錯落的峰巒和低谷，這種山戀狀的表面，使微生物更有利于同基質(zhì)接觸、吸附、降解和進行物質(zhì)交換。還可以看到，表面上有許多直徑不等、形狀多樣的孔洞(圖4、6、7)，其中圖7顯示的另一個典型孔洞呈圓形，直徑為3～4μm。有報道認(rèn)為［4］，它們可能是釋放H2、CO2、CH4氣體和向內(nèi)輸送營養(yǎng)的通道。圖4～6表明有許多絲狀菌攀扶在顆粒污泥表面上，它們由內(nèi)向外或由外向內(nèi)自由地穿入穿出，象一條條絨線把其他微生物纏繞在一起，而且可以看到許多弧狀菌、桿菌、梭狀菌和球菌成片地聚集生長。由掃描電鏡的圖片可以說明以下情況：①顆粒污泥中微生物形態(tài)有球形、弧形、桿狀、梭狀及絲狀，包含了幾乎所有的基本細(xì)菌形態(tài)，這反映了顆粒污泥微生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能較穩(wěn)定。②顆粒污泥中的細(xì)菌顯示分裂不分離特點，造成這種現(xiàn)象的原因可能是：a.位阻效應(yīng)，即顆粒污泥內(nèi)部空間狹小、有限，細(xì)菌分裂后不能很好地分離；b.在顆粒污泥中生長速率較低，菌體含能水平較低，細(xì)胞喪失了鞭毛和運動性，從而無法脫離；c.自然選擇的結(jié)果，使微生物在受到水力沖刷的影響下，為適應(yīng)環(huán)境，可能選擇一些相互粘聯(lián)的微生物，使之不被水流帶走。③細(xì)菌粘聯(lián)現(xiàn)象是顆粒污泥結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的重要因素。許多桿菌形成的“假絲狀”細(xì)菌鏈將其他球菌、短桿菌、梭菌等形成的細(xì)菌團加以纏繞，并穿插到污泥縱深，起著類似“植物根系固定土壤”的作用，將整個顆粒污泥加以固定。4.2.2厭氧反應(yīng)器中顆粒化污泥的形成結(jié)合運行條件和觀察的結(jié)果，分析影響厭氧污泥顆粒化的因素如下：①試驗以葡萄糖為有機基質(zhì)，它有利于污泥的顆?；?。據(jù)文獻(xiàn)報道［4］，在碳水化合物廢水處理中有較高的氫分壓，而高氫分壓易于促成污泥顆?；?。脂類廢水如含乙酸、丙酸、丁酸等的混合廢水處理時需極低的氫分壓，因而不易形成顆粒。②一定的水力負(fù)荷和有機負(fù)荷。厭氧顆粒污泥形成只有在較高的水力負(fù)荷下，才能將小的顆粒污泥與絮狀污泥分離，有利于污泥的顆?；?。Hulshobbpot曾指出，污泥顆?；囊粋€必要條件是污泥負(fù)荷在0.6kgCOD/(kgVSS·d)以上，最小升流速率為1m/d；方冶華認(rèn)為在污泥顆粒化時，反應(yīng)器進水COD濃度最好控制在2000mg/L左右；在顆粒生成后，水力負(fù)荷和有機負(fù)荷分別在0.4m3/(m2·h)和0.5kgCOD/(kgVSS·d)以上，可加快顆粒污泥的生成。本試驗是在水力負(fù)荷為0.04m3/(m2·h)、COD負(fù)荷為5kgCOD/(m3·d)時，形成了顆粒污泥。③適當(dāng)?shù)奈⑸锓N群。由圖4～7可以看到，反應(yīng)器內(nèi)的污泥中存在著大量的絲狀菌，這些細(xì)菌往往可以形成長絲狀，纏聯(lián)交叉成網(wǎng)絡(luò)狀或捆束狀，這種結(jié)構(gòu)有利于其他形狀的細(xì)菌被網(wǎng)絡(luò)在其中組成密集型微生物生態(tài)分布。而且，細(xì)菌在生命活動中形成和分泌多肽類物質(zhì)、粘液物質(zhì)或鞘狀物質(zhì)，這些物質(zhì)都有利于細(xì)菌間的粘附和膠聯(lián)，有利于顆?；勰嗟男纬?。5結(jié)論①在間歇厭氧反應(yīng)器中，發(fā)酵性細(xì)菌數(shù)量最多，硫酸鹽還原菌次之，產(chǎn)甲烷菌最少。計數(shù)結(jié)果與各反應(yīng)器水質(zhì)分析結(jié)果基本相符，說明COD/SO2-4是影響硫酸鹽還原菌與產(chǎn)甲烷菌對基質(zhì)競爭的重要因素，投加鐵對抑制硫酸鹽還原菌作用不大。②在UASB和復(fù)合式厭氧反應(yīng)器中，發(fā)酵細(xì)菌量最多，硫酸鹽還原菌次之，產(chǎn)甲烷菌最少。復(fù)合式厭氧反應(yīng)器上部的填料有利于截留硫酸鹽還原菌，因此，其硫酸鹽還原菌數(shù)量比UASB反應(yīng)器約多出近3個數(shù)量級，而產(chǎn)甲烷菌數(shù)量約少1個數(shù)量級，這與水質(zhì)分析結(jié)果(復(fù)合式厭氧反應(yīng)器的硫酸鹽還原率高于UASB反應(yīng)器，而COD去除率低于UASB反應(yīng)器)是一致的。③在硫酸鹽還原相厭氧濾池中，以硫酸鹽還原菌和發(fā)酵細(xì)菌為主，硫酸鹽還原菌數(shù)量最多，發(fā)酵性細(xì)菌次之，產(chǎn)甲烷菌最少。對反應(yīng)器中不同高度的生物相分析表明，從下部到上部隨著高度的增加，發(fā)酵細(xì)菌和硫酸鹽還原細(xì)菌逐步減少，而產(chǎn)甲烷菌在中層的數(shù)量最多，上層次之，下層的數(shù)量最少。④顆粒污泥的形成主要有以下原因：進水有機基質(zhì)是葡萄糖；有合適的水力負(fù)荷和COD負(fù)荷［分別為0.04m3/(m2·h)和5kgCOD/(m3·d)］；反應(yīng)器中存在著大量有利于污泥顆粒化的絲狀菌。參考文獻(xiàn)：［1］BeliaefeB,MaryJY.TheMos