流式細胞儀在臨床檢驗中的應用第1頁/共53頁1342流式細胞術的基本原理流式的臨床應用邁瑞流式介紹專家對邁瑞流式的評價目錄2第2頁/共53頁1342流式細胞術的基本原理流式的臨床應用邁瑞流式介紹專家對邁瑞流式的評價目錄3第3頁/共53頁流式細胞術的定義流式細胞術是以高能量激光照射高速流動狀態(tài)下經(jīng)熒光標記的單細胞（生物顆粒），通過檢測產(chǎn)生的散射光和熒光素發(fā)射熒光的強度，從而對細胞進行定性或者定量檢測，實現(xiàn)對目的細胞分析或分選的技術。4第4頁/共53頁傳統(tǒng)流式檢測流程圖NatRevImmunol.;12(3):191–200.第5頁/共53頁FL4FL6FL5(PE-cy7)FL3(PerCP)FL2(PE)FL1(FITC)SS488/10530/30FS488/10585/40670LP785/60491/LP550LP645LP660/20785/60740LP488/10反光鏡tvFL6(APC-cy7)FL4(APC)反光鏡tvtvtvtvtvtvtvFSCSSCFL1FL2FL3FL5流式細胞儀工作原理模擬圖第6頁/共53頁流式細胞儀與常用檢驗儀器的比較項目流式細胞儀血球儀生化分析儀免疫分析儀測試對象細胞，血清細胞(測量設置全部固定化）血清血清測試目標物理或化學性質（如細胞大小、內(nèi)部復雜程度、DNA含量）；小分子物質（如抗原，抗體）物理或化學性質（如細胞大小、內(nèi)部復雜程度、DNA含量）化學成分和一些小分子物質（如鉀、鈉、鈣、酶）小分子物質（如抗原、抗體、激素）測試原理流式細胞術+抗原抗體反應流式細胞術化學比色法抗原抗體反應計量百分比或絕對計數(shù)（如

%、**個/uL）；物質的量或定性判定（L、UI/L、

陰性、陽pmol/m性）百分比和絕對計數(shù)（如

%、**個/L）物質的量（mol/L）物質的量或定性判定（L、UI/L、

陰性、陽pmol/m性）宏觀和微觀測量宏觀對象（細胞）上的微觀物質（抗原、看不見、摸不到）測定宏觀對象（細胞）上的宏觀物質（物理、復雜度、含量，看得見、摸得到）測量微觀物質（可溶性成分和一些小分子物質，看不見、摸不到）測量微觀物質（小分子物質，看不見、摸不到）輸出第7頁/共53頁生命科學領域的應用制藥工業(yè)藥物篩選，疫苗研究…生物學研究遺傳，生殖，微生物，細胞生物，毒理，分子生物…環(huán)境研究湖泊、海洋生態(tài)研究…臨床診斷、研究血液，腫瘤，藥理，免疫…農(nóng)業(yè)畜牧業(yè)選種，育種…食品工業(yè)第8頁/共53頁9flowcytometry+tumorflowcytometry+Transplantflowcytometry+Autoimmunediseasesflowcytometry+leukemiaflowcytometry總結可以預計未來流式細胞儀在臨床上的應用一定會有更大的發(fā)展！第9頁/共53頁1342流式細胞術的基本原理流式的臨床應用邁瑞流式介紹專家對邁瑞流式的評價目錄第10頁/共53頁流式細胞術在臨床檢驗中的應用11淋巴細胞亞群分析HLA-B27檢測白血病免疫分型和MRD急性白血病、

慢性淋巴增生性疾?。–LD)

淋巴瘤造血干細胞分析造血干細胞絕對計數(shù)；陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）CD55/CD59/FLAER檢測血小板相關分析血小板計數(shù)、血小板免疫表型分析細胞周期與DNA倍體分析。。。2010年全國三級醫(yī)院檢驗科流式項目分布第11頁/共53頁流式細胞術分析淋巴細胞亞群的原理12第12頁/共53頁TBNK淋巴細胞的檢測及臨床指導意義診斷與鑒別診斷疾病臨床分期治療效果評估指導臨床用藥。。。13淋巴細胞分類百分比和絕對計數(shù)淋巴細胞種類特異性分子標記T淋巴細胞CD3+T輔助/誘導淋巴細胞CD3+CD4+T抑制/細胞毒淋巴細胞CD3+CD8+B淋巴細胞CD3-CD19+NK淋巴細胞CD3-CD16+CD56+第13頁/共53頁TBNK淋巴細胞檢測在臨床科室中的應用14流式在風濕免疫科的應用流式在腫瘤的應用流式在移植中心的應用流式在血液科的應用流式在感染科的應用流式在心血管內(nèi)科的應用流式在其他科室的應用流式在健康體檢的應用第14頁/共53頁15胃癌及其不同臨床分期淋巴細胞亞群的變化第15頁/共53頁16腫瘤術后淋巴細胞亞群的變化第16頁/共53頁17乙型肝炎患者體內(nèi)淋巴細胞亞群變化傳染病信息.2011.24.206-210第17頁/共53頁18（WorldJGastroenterol.2008,14:3710-8.）乙型肝炎患者體內(nèi)淋巴細胞亞群變化第18頁/共53頁HIV/AIDS病人的診斷與分期19成人及15歲以上青少年HIV/AIDS的臨床分期及其分期標準臨床分期CD4細胞計數(shù)（個數(shù)/mm3）HIV抗體檢測HIV核酸檢測主要臨床表現(xiàn)一般持續(xù)時間Ⅰ期6個月~12個月ⅠA期＞500或一過性降低﹣或±＋急性HIV感染綜合征或無癥狀1周~3周ⅠB期≥500血清陽轉或＋＋無癥狀或PGL6個月~12個月Ⅱ期6年~7.5年ⅡA期≥350＋＋無癥狀或A組臨床表現(xiàn)ⅡB期200~349＋＋B組臨床表現(xiàn)Ⅲ期﹤200＋＋C組臨床表現(xiàn)2~3年（WS293-2008艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標準）第19頁/共53頁肺部疾病的鑒別診斷疾病類型例數(shù)BALF淋巴細胞亞群（%）CD3+CD4+CD8+CD4/CD8結節(jié)病1491.8±5.6270.6±11.214.5±8.46.9±3.12IPF1694.5±3.9114.7±3.1278.4±7.920.2±0.04肺結核674.3±5.6142.3±1.9232.1±1.211.3±0.05肺部腫瘤767.5±10.424.3±5.2435.1±9.620.7±0.1320（中華檢驗醫(yī)學雜志.2000,23:214-216）

第20頁/共53頁利妥昔單抗治療效果監(jiān)測21(ArthritisResearch&Therapy2009,11；R131)利妥昔單抗(美羅華)：針對B細胞特異性抗原CD20的人-鼠嵌合單克隆抗體用于復發(fā)或耐藥的CD20陽性濾泡性淋巴瘤是首個以B細胞為靶標治療類風濕性關節(jié)炎的藥物外周血B細胞百分比顯著下降而骨髓B細胞略下降第21頁/共53頁移植病人免疫抑制劑治療指導22A移植前1-2天；B移植后1-2天；C移植后4-5天；D移植后6-8天；E移植后12-16天69例（50例沒有排斥，19例發(fā)生排斥）CD4在移植后有一個緩慢的下降過程CD4如果升高，預示發(fā)生排斥反應，需要調(diào)整免疫抑制藥的治療方案第22頁/共53頁（

Neuroimmunomodulation.2014,214:206-12.）

老年人身體狀況評估23第23頁/共53頁（

ClinicalandAppliedImmunologyReviews.2002,2:129–139.）慢性疲勞綜合征與淋巴亞群分析24第24頁/共53頁（

MechanismsofAgeingandDe6elopment.1998,100:121–132.）

體育鍛煉對淋巴亞群的影響25第25頁/共53頁臨床需要監(jiān)測免疫功能的常見疾病26疾病類別內(nèi)容原發(fā)性免疫缺陷B細胞免疫缺陷、T細胞免疫缺陷、聯(lián)合免疫缺陷…繼發(fā)性免疫缺陷感染（HIV、CMV…）免疫抑制劑的使用腫瘤代謝性疾病、營養(yǎng)不良、衰老自身免疫病SLE、RA…血液腫瘤白血病/淋巴瘤其他手術（KubyImmunology,7th,2013）第26頁/共53頁TBNK淋巴細胞亞群檢測27CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APCCD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC第27頁/共53頁HLA-B27檢測與脊柱關節(jié)病28脊柱關節(jié)?。⊿pondyloarthritis,SpA）疾病HLA-B27陽性率(%)強直性脊椎炎>90Reiter’s綜合癥70~90銀屑病性關節(jié)炎

50~60急性前葡萄膜炎40~50潰瘍性結腸炎伴關節(jié)病5~10正常人群

2~7第28頁/共53頁29強直性脊柱炎強直性脊柱炎（AS）定義：

一種慢性、進行性和炎性疾病，也是血清陰性脊柱關節(jié)病（SpA）中最具代表性的疾病。主要累計骶髂關節(jié)、脊柱、脊柱軟組織及四肢關節(jié)，表現(xiàn)為椎間盤纖維環(huán)和纖維環(huán)結締組織的骨化，椎間動關節(jié)和四肢關節(jié)滑膜的炎癥和增生，嚴重者可失去勞動能力。實驗室檢查：

CRP升高

血沉加快

HLA-B27陽性

類風濕因子陰性

第29頁/共53頁HLA-B27檢測與AS輔助診斷301984年修訂的紐約標準；1991年歐洲脊柱關節(jié)病研究組（ESSG）標準；2009年國際脊柱關節(jié)病評估工作組（ASAS）SpA診斷標準標準—增加HLA-B27作為重要的診斷指標

RudwaleitM.CurrOpinRheumatol.

2010,22:375-380）第30頁/共53頁31HLA-B27檢測在AS中的診斷價值臨床意義：

1.輔助疾病早期確診,早期治療; 2.鑒別診斷癥狀相似的疾病; 3.對高危人群進行預測;HLA-B27+HLA-B27+

的ASHLA-B27-

的AS約5-10%的AS患者為HLA-B27-

HLA-B27陽性率在我國為2~7%，AS的患病率為0.1%，因此大部分HLA-B27+并不患ASAS患者中HLA-B27+達90~95%第31頁/共53頁不同HLA-B27檢測方法比較32方法檢測手段優(yōu)點缺點MLCT顯微鏡人工觀察經(jīng)濟，無需昂貴的設備操作步驟繁瑣、費時，且易受血清、補體、單抗的品質以及操作者主觀因素的影響，常出現(xiàn)誤判漏判。靈敏度、特異性和重復性均較差。目前，僅少數(shù)實驗室使用。ELISA酶標儀測定吸光度敏感性較高，設備簡單，可進行高通量檢測操作步驟較多，洗滌步驟復雜、要求嚴格，易污染導致假陽性，重復性一般。PCRDNA擴增后，電泳紫外分析敏感性、特異性高實驗室常用方法，耗時長，需要提取DNA、PCR擴增后還需要電泳分析；容易污染，假陽性率高：空氣中DNA氣溶膠極易污染擴增產(chǎn)物，對環(huán)境要求高。FCM計算機數(shù)據(jù)分析操作步驟簡單、快捷，敏感性和特異性高

實驗室常用方法，需配備流式細胞儀；注意抗原/抗體交叉反應。第32頁/共53頁HLA-B27檢測的敏感性和特異性33（RudwaleitM,

SieperJ.NatRevRheumatol.

2012,8:262-268）與其他指標相比，HLA-B27在SpA鑒別和診斷上具更高的敏感性、特異性ParameterSensitivity%SpecificityInflammatorybackpain38-9576-100Heelpain(enthesitis)16-5289-96Peripheralarthritis26-6291-100Dactylitis12-2796-99Anterioruveitis10-2297-100Psoriasis1-1796IBD2-799PositivefamilyhistoryforAS,reactivearthritis,IBD,psoriasis,anterioruveitis7-3693-100ResponsetoNSAIDs64-7775-85Elevatedacutephasereactants(CRP)38-6967-100HLA-B2783-9691-96MRIofsacroiliacjoints54-9383-100第33頁/共53頁HLA-B27檢測配套試劑34健康人（左）和強直性脊柱炎患者（右）的HLA-B27的檢測結果（上：同型對照，下：測試樣本）FITC-HLA-B27/PE-HLA-B7雙色第34頁/共53頁1342流式細胞術的基本原理流式的臨床應用邁瑞流式介紹專家對邁瑞流式的評價目錄35第35頁/共53頁邁瑞流式細胞儀及配套試劑36BriCyteE6流式細胞儀及配套試劑第36頁/共53頁人性化設計—降低臨床操作難度臨床常規(guī)項目全自動軟件雙向LIS連接全中文操作界面37第37頁/共53頁1.選擇檢測項目2.自動進樣3.報告智能化自動設計—自動分析軟件第38頁/共53頁智能化自動檢測設計39自動調(diào)節(jié)-準確、可靠臨床軟件TBNK淋巴細胞分析HLA-B27檢測電壓補償質控第39頁/共53頁自動電壓調(diào)節(jié)40第40頁/共53頁自動補償調(diào)節(jié)418.00第41頁/共53頁單平臺絕對計數(shù)無需內(nèi)標微球內(nèi)置高精度流量傳感器，精確測定樣本流體積，直接計算絕對計數(shù)；采用陶瓷泵負壓吸樣形成有效“雙閉環(huán)”，穩(wěn)定控制樣本流；42第42頁/共53頁智能溫度控制

15℃到32℃無需調(diào)整光路全封閉防塵設計簡潔穩(wěn)定-光學系統(tǒng)第43頁/共53頁12×75mm試管12×75mm試管1.5mL、2mL微量離心管方便快捷-多種進樣方式手動上樣系統(tǒng)自動進樣系統(tǒng)44第44頁/共53頁機型BriCyteE6FC500CantoII外形尺寸*(mm，寬×高×深)500×500×550610×978×889910×630×610重量*(Kg)≤55≤85≤146自動進樣器重量(Kg)≤15--≤22氣源不需要需要需要穩(wěn)壓電源不需要需要需要簡潔穩(wěn)定第45頁/共53頁儀器性能：高分辨率46BriCyteE6檢測305A八峰粒子PE<50MESFBDFACSCantoII檢測305A八峰粒子PE<50MESF第46頁/共53頁淋巴細胞亞群分析臨床評估47北京協(xié)和醫(yī)院北醫(yī)三院四川省人民醫(yī)院臨床評估病人；42例對照儀器：BCIFC500臨床評估病人；30例對照儀器：BDFACSCantoII臨床評估病人；34例對照儀器：BCIFC500第47頁/共53頁48HLA-B27檢測臨床評估試驗儀器對照儀器合計陰性陽性陰性23023陽性077小計23730結果判讀標準結論陽性符合率100.00%≥95%Pass陰性符合率100.00%≥95%Pass總體符合率100.00%≥95%PassKappa1＞0.8Pass試驗儀器對照儀器合計陰性陽性陰性16016陽性01717小計161733結果判讀標準結論陽性符合率100.00%≥95%Pass陰性符合率100.00%≥95%Pass總體符合率100.00%≥95%PassKappa1＞0.8Pass北醫(yī)三院四川省人民醫(yī)院臨床評估病人：30例對照儀器：BDFACSCantoII臨床評估病人；33例對照儀器：BCIFC500第48頁/共53頁49項目BriCyteE6傳統(tǒng)流式細胞儀軟件界面全中文操作軟件，模塊化設計，可見即所得，兩小時掌握儀器操作英文界面，菜單式設計，需要長時間熟悉菜單功能位置儀器開關機1.開機（10分鐘以內(nèi)）；2.關機（7分鐘以內(nèi)）1.開機（15分鐘）；2