———白管在熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)耗材選擇中的優(yōu)勢和應(yīng)用

明白之間說說熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)耗材的選擇

小朗課堂

前兩天，小朗在與某實(shí)驗(yàn)室研究員交流時(shí)了解到這么一個(gè)情況，他們?cè)趒PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)使用透明管，得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果熒光信號(hào)值比較低，曲線被壓得很低，坐標(biāo)軸也不能自適應(yīng)曲線，顯示如下圖。而正常情況如下圖，縱坐標(biāo)的范圍是可以隨著曲線最大熒光信號(hào)值而變化的，并可獲得一條漂亮的S曲線。明白了這個(gè)情況后，小朗為其推薦了白管，更換成白管后，問題就迎刃而解了。

那么，問題來了，

為何做qPCR實(shí)驗(yàn)時(shí)一定要用白管呢？

熒光信號(hào)值與哪些因素有關(guān)呢？

我們一起來學(xué)習(xí)一下吧～

白管PK透明管

PCR管/板常見的有白色和透明兩種。在傳統(tǒng)PCR實(shí)驗(yàn)中，兩者在使用效果上沒有太大差異，相比較透明管更為方便，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)者更容易看清楚試劑加上與否。但在熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中，白管的優(yōu)勢就凸顯出來了。

優(yōu)勢一：白管管壁支持一致的信號(hào)反射，提高qPCR結(jié)果的一致性。

qPCR實(shí)驗(yàn)的核心數(shù)據(jù)是Ct值，而熒光信號(hào)是Ct值計(jì)算的數(shù)據(jù)來源，所以管內(nèi)的熒光能否完好地傳遞至頂部的檢測器是至關(guān)重要的。

如下圖是三種不同透明度的管子，因?yàn)橥该鞴芩闹芫峭该鞯模瑢?duì)于底部試劑激發(fā)出來的熒光會(huì)散向四面八方，管內(nèi)的熒光信號(hào)只有少量能到達(dá)管頂部，最終只有少量信號(hào)進(jìn)入檢測器，且管間熒光信號(hào)不一致。

圖1白管和透明管內(nèi)部熒光信號(hào)路線圖

然而，如圖1所示，與其他管材相比，白管管壁不透明，幾乎沒有信號(hào)丟失，且隔絕了樣品臺(tái)污染的熒光信號(hào)干擾，減少了相同樣本孔間差異。

優(yōu)勢二：白管支持最大限度的信號(hào)傳輸，改進(jìn)對(duì)低拷貝數(shù)樣本的檢測，提高靈敏度。

圖2白管和透明管檢測信號(hào)對(duì)比圖

從圖2中可以看出，同樣試劑量的情況下，到達(dá)檢測器的信號(hào)強(qiáng)度，使用白管明顯高于透明管。因此相比于透明管，使用白管可明顯提高檢測器檢測到的信號(hào)強(qiáng)度，提高qPCR數(shù)據(jù)的靈敏度。

優(yōu)勢三：支持更小體系擴(kuò)增，節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本。

正因?yàn)榘坠苡兄哽`敏度的特性，使用白管可以采用小體積反應(yīng)，從而可減少實(shí)驗(yàn)試劑量，大大節(jié)省成本～

圖3白管擴(kuò)增結(jié)果展示圖

國際一線品牌也同樣證實(shí)白管更適合實(shí)時(shí)熒光定量實(shí)驗(yàn)的結(jié)論。如上圖，qPCR使用透明和白色耗材的結(jié)果比較：

（A）與透明孔相比，白色孔Ct值更低（靈敏度更高）。

（B）白色孔在技術(shù)重復(fù)中也表現(xiàn)出更高的一致性。

在設(shè)置實(shí)時(shí)PCR或qPCR的反應(yīng)時(shí)，與透明耗材相比，我們更推薦使用白色耗材，以實(shí)現(xiàn)靈敏和準(zhǔn)確的熒光檢測。賽默飛生命科學(xué)

JenaSarstedt

Eppendorf

那么熒光定量PCR儀需要采用

什么技術(shù)才能滿足使用白管呢?

我們來看一下

國際主流品牌的定量PCR儀產(chǎn)品，

一探究竟吧～

首先我們來看一下賽默飛的高端系列Q5和Q7，他們用的是CCD頂部檢測的技術(shù)方案，再來看一下羅氏的旗艦產(chǎn)品LG480，我們可以看到，他們用的也是CCD頂部檢測技術(shù)。朗基是國內(nèi)第一家全部采用頂部CCD檢測技術(shù)的定量PCR儀廠家。朗基奧金系列熒光定量PCR系統(tǒng)

頂部CCD檢測技術(shù)光學(xué)部件固定，穩(wěn)定性好，故障率低，對(duì)熒光信號(hào)的接收和處理能力強(qiáng)，是定量PCR儀檢測技術(shù)的大勢所趨。頂部CCD檢測技術(shù)

此外，同樣是白管，我們實(shí)驗(yàn)證明白管的質(zhì)量高低也會(huì)影響熒光信號(hào)值的大小。如下圖：結(jié)果表明，相較于其他品牌白色管和透明管的擴(kuò)增曲線，朗基標(biāo)配的白色管的熒光信號(hào)值更強(qiáng)，曲線重合度更好。

綜上所述，

在進(jìn)行qPCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，

使用白管和頂部檢測技術(shù)的qPCR儀，

可