鹽脅迫白三葉產(chǎn)生的蛋白質(zhì)第1頁，共17頁，2023年，2月20日，星期六目錄1.實驗?zāi)康募耙饬x2.實驗方法3.實驗結(jié)果4.結(jié)論5.致謝第2頁，共17頁，2023年，2月20日，星期六1.實驗?zāi)康募耙饬x

用不同濃度的NaCl（50mmol/L、100mmol/L、150mmol/L、200mmol/L、250mmol/L）對白三葉進行鹽脅迫，誘導(dǎo)其產(chǎn)生鹽脅迫蛋白，因為鹽脅迫蛋白多為水溶蛋白，本實驗通過分析鹽濃度與水溶蛋白的關(guān)系，探究白三葉對鹽脅迫的蛋白響應(yīng)。白三葉是優(yōu)良的草坪草。另外，白三葉具有固氮能力，可提高農(nóng)作物產(chǎn)量。但是近年來由于土地鹽漬化嚴(yán)重，極大的影響白三葉的生長和種植。因此，研究白三葉鹽脅迫蛋白與NaCl濃度間的關(guān)系對城市美化，發(fā)展農(nóng)牧業(yè)方面都有重要的作用。返回第3頁，共17頁，2023年，2月20日，星期六2.實驗方法蛋白量的差異分析蛋白大小差異分析白三葉的培養(yǎng)1、種子培養(yǎng)：催芽，移栽。2、鹽脅迫：用NaCl溶液每24h遞增50mmol/L，至終濃度。3、蛋白樣品制備：將白三葉組織研磨倒入提取液，浸提，離心。首先制作標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)方程然后分別對白三葉葉片，根，莖的水溶蛋白和總蛋白做紫外分光光度測量。使用SDS分析葉片總蛋白。1，配置試劑；2，電泳；3，染色和脫色。返回第4頁，共17頁，2023年，2月20日，星期六3.結(jié)果及分析1.1白三葉葉片蛋白量分析

對照50mmol/L100mmol/L150mmol/L200mmol/L250mmol/L總蛋白濃度(ug/mg)25.10±0.02225.01±0.01631.04±0.01432.07±0.02331.11±0.01930.05±0.011水溶蛋白濃度(ug/ml)1.12±0.0151.21±0.1121.91±0.1213.01±0.0192.66±0.0102.18±0.03葉片水溶蛋白在峰值(150mmol/L)時的蛋白濃度與對照組相比增加了168%，相比而言總蛋白增加了27.8%，兩者之差140.2%。第5頁，共17頁，2023年，2月20日，星期六3.結(jié)果及分析葉片中水溶蛋白的比例圖：葉片中水溶蛋白占總蛋白的比例峰值在150mmol/L出現(xiàn)，為9.04%。峰值(150mmol/L)的水溶蛋白相對量與對照組相比增加4.58%。第6頁，共17頁，2023年，2月20日，星期六3.結(jié)果及分析1.2白三葉根部蛋白量分析

對照50mmol/L100mmol/L150mmol/L200mmol/L250mmol/L總蛋白濃度(ug/ml)25.20±0.10125.23±0.02425.69±0.02126.56±0.05429.92±0.12128.01±0.109水溶蛋白濃度(ug/ml)1.20±0.1621.21±0.0341.29±0.1421.44±0.1051.89±0.1301.60±0.071根部中水溶蛋白質(zhì)在峰值(200mmol/L)時的蛋白濃度與對照組相比增加了57.5%，相比而言總蛋白增加了18.7%兩者之差38.8%。第7頁，共17頁，2023年，2月20日，星期六3.結(jié)果及分析根部水溶蛋白的比例圖：根部水溶蛋白占總蛋白的比例峰值(200mmol/L)為6.33%，對照組為4.76%，峰值和對照組相比增加了1.57%。第8頁，共17頁，2023年，2月20日，星期六3.結(jié)果及分析1.3白三葉莖部蛋白量分析莖中水溶蛋白質(zhì)在峰值(150mmol/L)時的蛋白濃度與對照組相比增加了51.30%，相比而言總蛋白增加了20.98%，兩者之差30.32%。對照50mmol/L100mmol/L150mmol/L200mmol/L250mmol/L總蛋白濃度(ug/mg)20.21±0.10120.37±0.12422.15±0.02124.45±0.05422.92±0.12122.73±0.109水溶蛋白濃度(ug/ml)0.84±0.1620.94±0.0341.06±0.1421.27±0.1051.24±0.1301.13±0.171第9頁，共17頁，2023年，2月20日，星期六3.結(jié)果及分析莖部水溶蛋白的比例圖：莖部水溶蛋白占總蛋白的比例的峰值在150mmol/L出現(xiàn)5.52%，對照組為4.16%。峰值和對照組相比增加了1.36%。第10頁，共17頁，2023年，2月20日，星期六3.結(jié)果及分析1.4綜合上述結(jié)果(1)白三葉葉片中水溶蛋白的合成量高于根和莖，說明白三葉的葉片對鹽脅迫的蛋白響應(yīng)最明顯。(2)雖然白三葉葉片中有大量蛋白質(zhì)合成受阻，但這些蛋白質(zhì)的減少并沒有影響到白三葉的正常生長，可能是新合成的水溶性蛋白代替了這些合成受阻的蛋白的生理功能。第11頁，共17頁，2023年，2月20日，星期六3.結(jié)果及分析2.1SDS結(jié)果第12頁，共17頁，2023年，2月20日，星期六3.結(jié)果及分析2.1.1由圖可知(1)在150mmol/L時產(chǎn)生31KD鹽脅迫蛋白；(2)Protein3，Protein5，Protein8的消失；(3)Protein7在100mmol/L時驟變。返回第13頁，共17頁，2023年，2月20日，星期六4.結(jié)論（1）不同濃度NaCl處理過的白三葉根、莖、葉的水溶蛋白的表達量不一樣，其中葉片的表達量最多，葉片中水溶蛋白對鹽脅迫的響應(yīng)最敏感。另外，隨著NaCl濃度的升高，葉片的總蛋白增加了，但是相對總蛋白的增加量來說水溶蛋白增加的更多。第14頁，共17頁，2023年，2月20日，星期六4.結(jié)論（2）白三葉的鹽脅迫濃度閥值為100mmol/L，此濃度下時出現(xiàn)了一個24KD水溶性蛋白，該蛋白質(zhì)可能是白三葉在受到高濃度鹽脅迫時產(chǎn)生的應(yīng)激性蛋白。(3)當(dāng)鹽濃度為150mmol/L時，白三葉總蛋白中出現(xiàn)了一個新的31KD蛋白，可能是鹽脅迫蛋白。第15頁，共17頁，2023年，2月20日，星期六5.致謝

首先要感謝我的指導(dǎo)老師，閆秋潔老師，她在完成繁重的科研任務(wù)的同時，從論文的選題、構(gòu)思、試驗設(shè)計與結(jié)果觀察到撰寫的整個過程中，悉心指導(dǎo)，傾力相授，老師對科研一絲不茍、嚴(yán)肅認(rèn)真的態(tài)度將使我受用終生。同時還要感謝羅院長，姜立春、邊春象等老師的熱忱幫助，在此還要感謝