【試驗目標】了解藥品中相關物質起源及檢驗意義；掌握薄層層析法用于藥品中相關物質程度檢驗方法和基本操作；掌握永停滴定法測定含量方法與原理。實驗五鹽酸普魯卡因注射液的質量分析專家講座第1頁結構特點：這類藥品含有對氨基苯甲酸酯基本結構。普通，氨基沒有被取代，含有游離芳伯氨基。鹽酸普魯卡因苯佐卡因鹽酸丁卡因實驗五鹽酸普魯卡因注射液的質量分析專家講座第2頁性質：含有芳伯氨基，顯芳伯氨基特征(可發(fā)生重氮化或重氮化-偶合反應)堿性含有脂烴胺側鏈，游離堿多為堿性，能與生物堿沉淀試劑發(fā)生反應。含有酯結構，輕易水解。紫外吸收

因為在這類藥品分子中也含有苯環(huán)結構，所以一樣也含有紫外吸收。實驗五鹽酸普魯卡因注射液的質量分析專家講座第3頁判別反應：1．重氮化-偶合反應凡含有芳伯氨基藥品，都能夠在酸性溶液中與NaNO2TS發(fā)生重氮化反應，再與堿性-萘酚偶合產生紅色偶氮化合物。實驗五鹽酸普魯卡因注射液的質量分析專家講座第4頁２.本品水溶液顯氯化物判別反應實驗五鹽酸普魯卡因注射液的質量分析專家講座第5頁檢驗：１、pH值應為3.5～5.02、對氨基苯甲酸：供試品溶液：每１ml含鹽酸普魯卡因2.5mg對照品溶液：每１ml含對氨基苯甲酸30μg展開劑：苯－冰醋酸－丙酮－甲醇(14:1:1:4）點樣量：10μL顯色劑：對二甲氨基苯甲醛溶液實驗五鹽酸普魯卡因注射液的質量分析專家講座第6頁含量測定（亞硝酸鈉滴定法

）：原理：含有芳伯氨基藥品，可在酸性條件下可與NaNO2反應生成重氮鹽，依據消耗NaNO2量，能夠計算出藥品含量。對于含有潛在芳伯氨基藥品，如芳酰氨基、硝基等，可先進行水解或還原，得到芳伯氨基后，再進行測定。實驗五鹽酸普魯卡因注射液的質量分析專家講座第7頁操作中主要條件：１.反應速度與藥品結構關系在鹽酸存在下，重氮化反應機制是：首先然后實驗五鹽酸普魯卡因注射液的質量分析專家講座第8頁２.反應速度與酸及酸度關系重氮化反應反應速度與酸種類和濃度相關。a.酸種類重氮化反應在HBr、HCl、H2SO4中反應速度是

HBr＞HCl＞H2SO4但因為HBr價格很貴，用鹽酸來代替，為加緊反應速度，需要加入KBr（催化劑）。產生HBr與HNO2反應，可產生大量NOBr，所以能夠加緊反應速度。實驗五鹽酸普魯卡因注射液的質量分析專家講座第9頁b.鹽酸用量理論上－－1mol芳胺∶2mol鹽酸實際測定時－－芳胺∶鹽酸＝1∶2.5~6mol原因：在強酸性溶液中可加速反應進行重氮鹽在酸性下穩(wěn)定在酸性下可防止副反應發(fā)生。假如酸度不足則沒反應芳胺與生成重氮鹽有可能會產生偶氮氨基化合物，而影響測定結果。注意：假如鹽酸濃度太大，反到會使游離芳伯氨量減?。ǔ甥}），而影響重氮化反應速度，使反應速度減慢。實驗五鹽酸普魯卡因注射液的質量分析專家講座第10頁３.反應速度與滴定時溫度關系重氮鹽不穩(wěn)定，溫度升高重氮鹽分解速度也一樣加緊。溫度高時，滴定液亞硝酸鈉也輕易分解逸失，而影響測定結果。所以，重氮化反應應在低溫條件下進行。實驗五鹽酸普魯卡因注射液的質量分析專家講座第11頁中國藥典要求：在30C以下，并把滴定管尖端插入液面下2/3處進行滴定。這么，在滴定時一邊攪拌一邊加入大部分標準溶液。因為標準溶液是在液面下加入，能夠防止NaNO2揮發(fā)。到近終點時把滴定管提出液面，用水沖洗后再繼續(xù)滴定至終點。實驗五鹽酸普魯卡因注射液的質量分析專家講座第12頁4.反應速度與滴定速度關系滴定速度不能過快!!!實驗五鹽酸普魯卡因注射液的質量分析專家講座第13頁重氮化滴定法指示終點方法:永停法電位法外指示劑法內指示劑法我國藥典主要采取永停滴定法指示終點。實驗五鹽酸普魯卡因注射液的質量分析專家講座第14頁永停法原理在被測溶液中插入兩個相同鉑電極，在兩個電極間10~200mV電壓，而且在回路中串聯一個靈敏檢流計（10A－9/格）。當用NaNO2滴定時，因為在終點前回路中沒有電流，所以電流計指針指零，或指針偏轉后立刻又返回到零點。當抵達滴定終點時，因為溶液中有微過量NaNO2，使得在兩個電極上發(fā)生氧化還原反應實驗五鹽酸普魯卡因注射液的質量分析專家講座第15頁陽極：陰極：造成在兩電極間有電子流動，從而回路中有電流產生，使得電流計指針發(fā)生偏轉而且不再返回零點。永停滴定法就是利用這一現象指示終點。永停滴定法特點：永停滴定法裝置簡單，操作方便，方法準確。缺點是電極輕易鈍化。如電極發(fā)生鈍化可用濃硝酸加1~2滴FeCl3試液溫熱活化。實驗五鹽酸普魯卡因注射液的質量分析專家講座第16頁精密量取供試品適量（約相當于鹽酸普魯卡因０.１2g），置燒杯中，加水４０ml與鹽酸（１→２）１５ml，再加ＫＢr２g，置電磁攪拌器上攪拌使溶解，插入鉑電極后，將滴定管按要求調整好后，用亞硝酸鈉（0.05