熒光效率儀使用方法第1頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日一、快速葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)動(dòng)力學(xué)曲線

1.簡(jiǎn)介

將暗適應(yīng)的綠色植物或含有葉綠素的部分組織突然暴露在可見光下之后就會(huì)觀察到，植物綠色組織發(fā)出一種暗紅色，強(qiáng)度不斷變化的熒光，熒光隨時(shí)間變化的曲線稱為葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)動(dòng)力學(xué)曲線。第2頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日O點(diǎn)J點(diǎn)I點(diǎn)P點(diǎn)第3頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日植物發(fā)出的熒光強(qiáng)度隨時(shí)間而變化，在從暗適應(yīng)到暴露在光下時(shí)，熒光強(qiáng)度先上升然后下降。一般情況下，剛暴露在光下時(shí)的最低熒光定義為O點(diǎn)，熒光的最高峰定義為P點(diǎn)，快速葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)動(dòng)力學(xué)曲線指的就是從O點(diǎn)到P點(diǎn)的熒光變化過程，主要反映了PSII的原初光化學(xué)反應(yīng)及光合結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)和狀態(tài)等的變化，而下降的第4頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日階段主要反映了光合碳代謝的變化，隨著光合碳代謝速率的上升，熒光強(qiáng)度逐漸下降（Krause和Weis，1991）。連續(xù)激發(fā)式熒光儀（如Handy-PEA

）主要是通過短時(shí)間照光后熒光信號(hào)的瞬時(shí)變化反映暗反應(yīng)活化前PSII的光化學(xué)變化，它具有相當(dāng)高的分辨率，所以能夠從O-P上升過程中捕捉到更多的熒光變化信第5頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日息，如O-P變化過程中的另外兩個(gè)拐點(diǎn)（J點(diǎn)和I點(diǎn)）。從照光后的10μs到5min內(nèi)不同時(shí)間的熒光信號(hào)都能被按時(shí)記錄。在對(duì)快速葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)動(dòng)力學(xué)曲線作圖時(shí)，為了更好地觀察J點(diǎn)和I點(diǎn)，結(jié)果得到O-J-I-P誘導(dǎo)曲線。植物快速葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)曲線中包含著大量關(guān)于PSII反應(yīng)中心原初光化學(xué)反應(yīng)第6頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日的信息（Forceetal，2003；Lazár，2006），通過對(duì)曲線熒光參數(shù)的分析，可以知道植物不同發(fā)育時(shí)期光合結(jié)構(gòu)的變化。為了能更好地反映動(dòng)力學(xué)曲線和被測(cè)樣品材料的關(guān)系，Strasser和Strasser（1995）以生物膜能量流動(dòng)為基礎(chǔ)，通過計(jì)算能量流和能量比率來衡量在給定物流狀態(tài)下樣品材料內(nèi)部變化，建立了高度簡(jiǎn)

第7頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日化的能量流動(dòng)模型圖。依照能量流動(dòng)模型，天線色素（Chl）吸收的能量（ABS）的一部分以熱能和熒光（F）的形式耗散掉，另一部分則被反應(yīng)中心（RC，在JIP-test中RC指有活性的反應(yīng)中心）所捕獲（TR），在反應(yīng)中心激發(fā)能被轉(zhuǎn)化為還原能，將QA還原成QA-，后者又可以被重新氧化，從而產(chǎn)生電子傳遞（ET），把傳遞

第8頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日的電子用于固定CO2或其它途徑。在此基礎(chǔ)上發(fā)展起來的數(shù)據(jù)處理稱為“JIP-test”。JIP-test為我們提供了被測(cè)樣品材料的大量信息?？焖偃~綠素?zé)晒庹T導(dǎo)動(dòng)力學(xué)曲線包含豐富和復(fù)雜的信息。第9頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日二、Handy-PEA使用說明第10頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日第11頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日4.用配備的暗適應(yīng)夾，對(duì)葉片進(jìn)行充分的暗適應(yīng)。將葉片夾入暗適應(yīng)夾中，關(guān)閉適應(yīng)夾上的金屬遮光片，暗適應(yīng)10分鐘以上。第12頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日5.將探頭置于暗適應(yīng)夾上的圓形槽之中，確保探頭與暗適應(yīng)夾緊密接觸，無光線進(jìn)入。用手按緊探頭與暗適應(yīng)夾，拉開適應(yīng)夾上的金屬遮光片。第13頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日6.按下探頭一側(cè)的遙控按鈕，或從菜單中選擇測(cè)定功能進(jìn)行測(cè)定。7.待儀器測(cè)定完畢后（大約1秒），記錄測(cè)定數(shù)據(jù)的編號(hào)，然后點(diǎn)擊OK。使用上下光標(biāo)選擇是否保存數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)保存完畢點(diǎn)擊OK即可進(jìn)入下一次測(cè)定。第14頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日三、數(shù)據(jù)傳輸與保存1.將儀器與計(jì)算機(jī)連接，點(diǎn)擊on/off打開儀器。2.雙擊打開數(shù)據(jù)傳輸軟件第15頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日出現(xiàn)下圖第16頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日點(diǎn)擊圖片進(jìn)入第17頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日從HPEA中傳出數(shù)據(jù)第18頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日如果要輸入的數(shù)據(jù)是第100-200個(gè)，應(yīng)在Firstfile中輸入100，在Lastfile中輸入200，然后點(diǎn)擊Transfer。第19頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日傳輸完畢，點(diǎn)擊“Close”第20頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日保存數(shù)據(jù)第21頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日保存文件，自定義文件名第22頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日點(diǎn)擊OK，完成數(shù)據(jù)保存。在對(duì)話框中輸入描述數(shù)據(jù)的字符，字符不超過250個(gè)即可。第23頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日如何打開保存文件？打開傳輸軟件，點(diǎn)擊第24頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日在文件夾中找到目標(biāo)文件，打開即可第25頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日點(diǎn)擊OK，即可打開文件查看數(shù)據(jù)。第26頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日四、BiolyzerHP3使用說明雙擊打開BiolyzerHP3分析軟件第27頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日點(diǎn)擊close第28頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日點(diǎn)擊圖片第29頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日點(diǎn)擊第30頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日選擇文件第31頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日注意，此處可能出現(xiàn)錯(cuò)誤！正確如下，可點(diǎn)擊“是”第32頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日錯(cuò)誤如下，出現(xiàn)原因是：測(cè)定數(shù)據(jù)存在異常數(shù)值，在傳輸軟件HPEA中將異常數(shù)值刪除即可。第33頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日用HPEA傳輸軟件打開出現(xiàn)錯(cuò)誤的文件，選中異常數(shù)值，右鍵點(diǎn)擊Cutselectedlines即可，然后再次保存數(shù)據(jù)。第34頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日打開文件后，點(diǎn)擊下圖中的“大腦”圖標(biāo)第35頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日工具欄功能增加，變?yōu)榈?6頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日選中待處理的數(shù)據(jù)第37頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日如果要保存數(shù)據(jù)，點(diǎn)擊“Tools”第38頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日出現(xiàn)下圖第39頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日點(diǎn)擊上圖中的紅圈處的下拉箭頭，選擇“MS-ExcelFile”第40頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日點(diǎn)擊“YES”第41頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日選擇路徑，保存文件。用Excel可打開文件第42頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日如果想進(jìn)一步看數(shù)據(jù)之間的差異，選擇不同的模式處理你的數(shù)據(jù)，具體可供選擇的有如下紅色圓圈中的模式：第43頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日點(diǎn)擊紅圈中的按鈕可看到O-J-I-P圖第44頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日第45頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日利用右上角“Plotsettings”可設(shè)定一些參數(shù)。第46頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日如：X和Y軸范圍第47頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日點(diǎn)擊紅圈中的圖標(biāo)第48頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日可以做出下圖第49頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日并得到大量數(shù)據(jù)第50頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日五、應(yīng)用實(shí)例李鵬民,高輝遠(yuǎn),RetoJ.Strasser(2005).快速葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)動(dòng)力學(xué)分析在光合作用研究中的應(yīng)用.植物生理學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)報(bào),31(6):559-566(重點(diǎn)參閱此文)許珍,李鵬民,高輝遠(yuǎn),董樹亭,王空軍,張吉旺(2007).玉米不同朝向葉片原初光化學(xué)反應(yīng)日變化的差異.

作物學(xué)報(bào),33(8):1375-1379孫山,王少敏,王家喜,高輝遠(yuǎn)(2008).黑暗中脫水對(duì)‘金太陽’杏離體葉片和功能的影響.園藝學(xué)報(bào),35(1):1-6以上是一些中文應(yīng)用實(shí)例，可用于入門學(xué)習(xí)。更多應(yīng)用實(shí)例可根據(jù)需要自行查閱。第51頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日結(jié)語以上是對(duì)熒光效率儀的簡(jiǎn)單介紹，還有很多功能有待大家在使用過程中去開發(fā)和利用。由于它具有獲得信息量大、操作簡(jiǎn)便、易于重復(fù)等特點(diǎn)，所以是深入研究光合作用原初反應(yīng)的一種有力而便捷的工具。第52頁，共53頁，2023年，2月20日，星期日參考文獻(xiàn)ForceL,CritchleyC,vanRensenJJS.2003.Newfluorescenceparametersformonitoringphotosynthesisinplants.PhotosynthRes,78:17~33KrauseGH,WeisE.1991.Chlorophyllfluorescenceandphotosynthesis:thebasics.AnnuRevPlantPhysiolPlantMolBiol,42:313~349LazárD.2006.Thepolyphasicchlorophyllafluorescencerisemeasuredunderhighintensityofexcitinglight.FunctionalPlantBiology,33:9~30StrasserBJ,Strasse