一、豬瘟ELISA原理——阻斷（競(jìng)爭(zhēng)）ELISA

抗體抗原加入樣品洗滌+酶標(biāo)識(shí)物洗滌+底物藍(lán)色淡藍(lán)色終止讀數(shù)阻斷（競(jìng)爭(zhēng)）ELISA原理比如：CSFV-Ab、PRV-gI、PRV-gB如何看抗體檢測(cè)結(jié)果及檢測(cè)應(yīng)用專(zhuān)家講座第1頁(yè)豬瘟疫苗免疫評(píng)定—關(guān)注兩點(diǎn)陽(yáng)性率：豬瘟抗體（阻斷率（Blocking）≥40%，判為陽(yáng)性結(jié)果；30%＜Blocking＜40%，判為可疑結(jié)果；Blocking≤30%，判為陰性結(jié)果）；免疫合格率：阻斷率（Blocking）≥50%，即為免疫合格。免疫合格百分比即為免疫合格率。

如何看抗體檢測(cè)結(jié)果及檢測(cè)應(yīng)用專(zhuān)家講座第2頁(yè)變異系數(shù)：CoefficientofVariation(CV)

變異系數(shù)計(jì)算是平均個(gè)體改變，以平均滴度背離百分?jǐn)?shù)來(lái)表示公式以下

標(biāo)準(zhǔn)偏差（STDEV）CV=X100%

平均阻斷率CV≤40%,顯示了群內(nèi)豬只有一個(gè)均衡、相同反應(yīng)CV≥60%,顯示了群內(nèi)豬只滴度反應(yīng)改變高于正常預(yù)計(jì)值如何看抗體檢測(cè)結(jié)果及檢測(cè)應(yīng)用專(zhuān)家講座第3頁(yè)豬瘟檢測(cè)應(yīng)用免疫評(píng)定：商品豬：豬瘟二免后4-6周，要求：陽(yáng)性率≥80%,CV≤40%種豬群（公豬和母豬）：豬瘟免疫后4-6周，要求：免疫合格率≥80%（嚴(yán)格一點(diǎn)，要≥90%）,CV≤40%后備豬（全群檢測(cè)）：進(jìn)入隔離舍后1-2周、進(jìn)入配種舍前1個(gè)月（6-6.5月齡），要求：Blocking≥40%，陰性豬補(bǔ)打疫苗，3周后復(fù)檢，不合格淘汰。如何看抗體檢測(cè)結(jié)果及檢測(cè)應(yīng)用專(zhuān)家講座第4頁(yè)豬瘟檢測(cè)應(yīng)用仔豬首免日齡確實(shí)定：選30-60頭仔豬，日齡和體重相近，每窩1-2頭，確認(rèn)沒(méi)有野毒感染風(fēng)險(xiǎn)，不接種豬瘟疫苗連續(xù)采血：出生后7天、14天、21天、28天、35天、42天檢測(cè)抗體水平要求：CSFAbBlock≤30%仔豬占20%-40%時(shí)為首免日齡(依據(jù)感染壓力和平均阻斷率而定)。如何看抗體檢測(cè)結(jié)果及檢測(cè)應(yīng)用專(zhuān)家講座第5頁(yè)二、藍(lán)耳ELISA原理——間接ELISA

抗體抗原加入樣品洗滌+酶標(biāo)識(shí)物洗滌+底物藍(lán)色無(wú)色終止讀數(shù)間接ELISA原理如何看抗體檢測(cè)結(jié)果及檢測(cè)應(yīng)用專(zhuān)家講座第6頁(yè)結(jié)果判斷結(jié)果判定：藍(lán)耳抗體（S/P≥0.4，判為陽(yáng)性結(jié)果；S/P<0.4，判為陰性結(jié)果）免疫豬群0.4＜S/P≤2.5；對(duì)于過(guò)高抗體種豬，隔離喂養(yǎng)，2周后采血檢測(cè)，若抗體處于上升趨勢(shì)種豬則淘汰非免疫豬群S/P值≥0.4淘汰或隔離喂養(yǎng)如何看抗體檢測(cè)結(jié)果及檢測(cè)應(yīng)用專(zhuān)家講座第7頁(yè)應(yīng)用公豬季度性監(jiān)測(cè)全部公豬

，一年4次要求：

S/P≥2.5公豬暫停使用(1-2個(gè)月)或PCR確認(rèn)感染狀態(tài)母豬季度性監(jiān)測(cè)母豬

要求：S/P應(yīng)主要在2.5≥S/P≥0.4(90%母豬抗體在免疫后轉(zhuǎn)陽(yáng))后備母豬和后備公豬在引進(jìn)種群前1個(gè)月，全群監(jiān)測(cè)要求：S/P≥2.5和S/P≤0.4暫停引入繁殖群如何看抗體檢測(cè)結(jié)果及檢測(cè)應(yīng)用專(zhuān)家講座第8頁(yè)應(yīng)用動(dòng)態(tài)檢測(cè)4周齡、10周齡豬群，每次20-30樣本主要是：分析藍(lán)耳感染狀態(tài)，判斷豬群是否穩(wěn)定，(對(duì)于不穩(wěn)定群體,延遲轉(zhuǎn)群或免疫等)，假如S/P≥2.5百分比超出5%，則判斷該場(chǎng)藍(lán)耳不穩(wěn)定，有感染；沒(méi)有則穩(wěn)定。如何看抗體檢測(cè)結(jié)果及檢測(cè)應(yīng)用專(zhuān)家講座第9頁(yè)三、偽狂犬偽狂犬gE：結(jié)果成立條件：陰性對(duì)照平均值-陽(yáng)性對(duì)照平均值必須大于或等于0.3；不然試驗(yàn)無(wú)效。判定結(jié)果：假如S/N值低于或等于0.60，樣品應(yīng)判定為陽(yáng)性；假如S/N值大于0.70，樣品應(yīng)判為陰性；處于0.6~0.7樣品判定為可疑，間隔兩周時(shí)間可重新檢測(cè)。偽狂犬病毒gE片段gB片段疫苗病毒片段如何看抗體檢測(cè)結(jié)果及檢測(cè)應(yīng)用專(zhuān)家講座第10頁(yè)豬群PRV感染情況普查采樣要求公豬群：全部采樣生產(chǎn)母豬群：隨機(jī)采樣30個(gè)樣本15周齡后生長(zhǎng)豬（母源抗體消失）：隨機(jī)采樣20-30個(gè)樣本檢測(cè)方法IDEXXPRVgIELISAS/N≤0.6陽(yáng)性，S/N＞0.7陰性0.6<S/N≤0.7隔離2周后重復(fù)檢測(cè)普查結(jié)果分析：低感染群：種豬陽(yáng)性率10%以下，可做凈化高感染群：種豬陽(yáng)性率10%以上，低于30%，可做凈化；高于30%，經(jīng)過(guò)疫苗控制，來(lái)穩(wěn)定豬群如何看抗體檢測(cè)結(jié)果及檢測(cè)應(yīng)用專(zhuān)家講座第11頁(yè)偽狂犬疫苗免疫評(píng)定—針對(duì)陰性場(chǎng)商品豬群免疫疫苗后4-6周，隨機(jī)采樣20-30份要求：gE抗體檢測(cè)全部為陰性；gB抗體檢測(cè)陽(yáng)性率≥95%如何看抗體檢測(cè)結(jié)果及檢測(cè)應(yīng)用專(zhuān)家講座第12頁(yè)偽狂犬評(píng)級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：偽狂犬gE抗體全陰性，則為陰性場(chǎng)偽狂犬gE抗體陽(yáng)性，但檢測(cè)15周齡豬，gE抗體轉(zhuǎn)陰，則為陽(yáng)性穩(wěn)定場(chǎng)偽狂犬gE抗體陽(yáng)性，但檢測(cè)15周齡豬，gE抗體陽(yáng)性率到達(dá)20%以上，則為陽(yáng)性不穩(wěn)定穩(wěn)定場(chǎng)如何看抗體檢測(cè)結(jié)果及檢測(cè)應(yīng)用專(zhuān)家講座第13頁(yè)應(yīng)用—凈化母豬群,公豬群(全部)過(guò)去6-12個(gè)月沒(méi)有使用全病毒滅活苗或非gE基因缺失弱毒疫苗

若S/N≤0.6則淘汰（對(duì)于懷孕母豬:能夠先隔離,產(chǎn)后2周淘汰）;若0.6<S/N≤0.7淘汰或隔離2周后重復(fù)檢測(cè),陽(yáng)性者淘汰;間隔6,12個(gè)月重復(fù)檢測(cè)全群,若前后兩次檢測(cè)全部為陰性，則后續(xù)檢測(cè)不需要全群采樣,能夠按季度檢測(cè):每群隨機(jī)采樣15-20份;若季度檢測(cè)時(shí)出現(xiàn)陽(yáng)性豬只,其所在豬舍則需要全部檢測(cè),陽(yáng)性淘汰如何看抗體檢測(cè)結(jié)果及檢測(cè)應(yīng)用專(zhuān)家講座第14頁(yè)商品群隨機(jī)抽樣檢測(cè)