無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第1頁21.引言本文目標(biāo)是闡述相關(guān)無菌產(chǎn)品生產(chǎn)微生物和微?？刂聘拍詈蜆?biāo)準(zhǔn)。這些概念對于無菌產(chǎn)品生產(chǎn)非常主要，但也可用于非無菌產(chǎn)品生產(chǎn)。環(huán)境監(jiān)測重點在于其相關(guān)設(shè)施控制和符合標(biāo)準(zhǔn)。環(huán)境監(jiān)測目標(biāo)在于可幫助建立一個有針對性、易于管理和有預(yù)防功效程序。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第2頁3為確保穩(wěn)定生產(chǎn)環(huán)境，全方面環(huán)境控制程序應(yīng)包含以下方面：

a.合理廠房設(shè)計和維護(hù)b.文件系統(tǒng)c.已驗證/確認(rèn)衛(wèi)生清潔/消毒程序d.可靠過程控制e.良好設(shè)備管理和保養(yǎng)f.進(jìn)入潔凈區(qū)有效控制g.有效培訓(xùn)，證書/資格以及評定程序h.物料及設(shè)備質(zhì)量確保環(huán)境監(jiān)測是一個評定對生產(chǎn)環(huán)境控制有效性工具。進(jìn)入制藥廠潔凈室和其它受控環(huán)境程序是無菌確保程序輔助。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第3頁42.

環(huán)境等級應(yīng)基于科學(xué)合理標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計和執(zhí)行環(huán)境監(jiān)測程序，并與生產(chǎn)所在地政府法規(guī)要求相一致。假如是為了供給國際市場，應(yīng)以最嚴(yán)格要求作為環(huán)境監(jiān)測基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第4頁5無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第5頁6無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第6頁7無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第7頁83.監(jiān)督確保從事環(huán)境監(jiān)測程序人員應(yīng)含有科學(xué)方面知識，并經(jīng)過對應(yīng)培訓(xùn)和授權(quán)。應(yīng)校準(zhǔn)所使用設(shè)備，驗證系統(tǒng)，正確制備培養(yǎng)基，全部操作程序應(yīng)書面成文并遵照執(zhí)行。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第8頁93.1清潔及衛(wèi)生/消毒執(zhí)行清潔和衛(wèi)生程序是廠房控制關(guān)鍵個別。環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)用于確定這些程序有效性。消毒劑選擇包含：

a.必需接觸時間評定

b.消除微生物種類

c.有效性確實定

d.待處理表面類型

e.毒性

f.殘留

g.使用方法對已建立清潔和衛(wèi)生程序進(jìn)行驗證應(yīng)證實微生物降低。其目標(biāo)是為了證實經(jīng)培訓(xùn)清潔人員執(zhí)行日常衛(wèi)生程序能夠確保所使用區(qū)域微生物控制是符合使用要求。采取環(huán)境監(jiān)測過程中取得分離菌，對所選擇清潔劑和消毒劑進(jìn)行挑戰(zhàn)試驗是可靠方法。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第9頁103.2

取樣點選擇取樣主要目標(biāo)是為了提供有意義數(shù)據(jù)，這些數(shù)據(jù)能夠幫助確定當(dāng)前或潛在污染，相關(guān)a)特殊操作；b)設(shè)備；c)物料；d)加工過程污染問題。應(yīng)從最有可能造成產(chǎn)品污染位置取樣；然而，應(yīng)慎重確定取樣點位置是靠近，但不是接觸產(chǎn)品。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第10頁11日常監(jiān)測選擇取樣點應(yīng)考慮原因：a.在這些取樣點，是否微生物污染最可能對產(chǎn)品質(zhì)量有不利影響？b.實際生產(chǎn)過程中，哪些位置是最利于微生物增殖？c.一些日常監(jiān)測點是否應(yīng)輪換？d.哪些位置能代表最難以靠近或清潔/消毒區(qū)域？f.區(qū)域中哪些操作造成污染擴(kuò)散？g.在指定位置取樣是否嚴(yán)重干擾環(huán)境，造成搜集了錯誤數(shù)據(jù)或污染產(chǎn)品？取樣是否僅在一班最終進(jìn)行？無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第11頁12無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第12頁133.3

取樣頻率單一取樣方案不適合于全部環(huán)境。選擇監(jiān)測頻率關(guān)鍵是能夠確定潛在系統(tǒng)缺點。每個點檢驗頻率能夠少于系統(tǒng)或區(qū)域檢驗頻率。在各種情況下，批生產(chǎn)時進(jìn)行監(jiān)測能夠滿足常規(guī)區(qū)域監(jiān)測要求。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第13頁143.4警報和行動水平普通，行動水平必須符合官方或行業(yè)指南，警報水平可依據(jù)環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)歷史分析制訂。一旦建立了警報和/或行動水平，應(yīng)作為日常趨勢分析一個別定時進(jìn)行回顧。警報和行動水平不是產(chǎn)品規(guī)格擴(kuò)充，但可作為確定改變標(biāo)志，所以能夠在產(chǎn)品質(zhì)量受到不良影響前采取糾正辦法。并非全部情況都需要使用警報和行動水平。普通，嚴(yán)格控制環(huán)境中污染不是在正態(tài)分布范圍內(nèi)。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第14頁153.5數(shù)據(jù)管理數(shù)據(jù)搜集：日常數(shù)據(jù)以統(tǒng)一統(tǒng)計格式聚集到指定數(shù)據(jù)庫中。數(shù)據(jù)分析：無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第15頁16數(shù)據(jù)整理：

應(yīng)對監(jiān)測數(shù)據(jù)進(jìn)行總結(jié)和評定，以確定生產(chǎn)環(huán)境是否處于受控狀態(tài)。

統(tǒng)計學(xué)方法是進(jìn)行評定一個方法。

對于數(shù)據(jù)顯著波動或菌群改變所產(chǎn)生影響分析，應(yīng)基于有資質(zhì)人所作出判斷。

評定過程應(yīng)考慮情況：a)出現(xiàn)高于普通值數(shù)值時，可能預(yù)示工藝規(guī)格不再適當(dāng)?？赡苄杌仡櫣に噮?shù)。b)幾個連續(xù)點或偏離可看作是一組，假如高于警報水平，表示需進(jìn)行調(diào)查。c)數(shù)值顯著波動或跳躍也是很主要，重復(fù)出現(xiàn)可能顯示出周期性改變。d)一個或一個以上數(shù)據(jù)顯著高于或低于大多數(shù)數(shù)據(jù)時，能夠計算在內(nèi)或不計算在內(nèi)。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第16頁173.6分離菌檢定檢定環(huán)境和人員監(jiān)測中取得微生物是監(jiān)測程序主要個別。最初，檢定許多分離菌可建立一個區(qū)域中所發(fā)覺微生物數(shù)據(jù)庫。一旦數(shù)據(jù)庫建立，日常檢定應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行以確定分離菌是正常菌群一個別或是其它不一樣微生物。分離菌檢定也可用于環(huán)境調(diào)查，比如陽性無菌檢驗結(jié)果，陽性培養(yǎng)基灌封結(jié)果，警報和行動水平偏移，或引入一個可給出耐清潔劑信號普通生物體。菌群改變或系統(tǒng)中出現(xiàn)一個以前未檢測到菌時，應(yīng)進(jìn)行調(diào)查。檢定可為分離菌起源提供有用線索。比如，金黃色葡萄球菌通常在皮膚上發(fā)覺，銅綠假單胞菌經(jīng)常與水相關(guān)。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第17頁183.7調(diào)查/糾正辦法當(dāng)偏移發(fā)生時，可能會與基準(zhǔn)線有偏差。應(yīng)進(jìn)行調(diào)查以確定發(fā)生何種偏差以及采取何種辦法來預(yù)防這類偏差再次發(fā)生。統(tǒng)計應(yīng)顯示偏差已確認(rèn)而且采取了適當(dāng)辦法。當(dāng)超出警報或行動水平時，可采取以下辦法：a.通知相關(guān)管理者。 －開始調(diào)查，以確定偏離指定操作參數(shù)原因和結(jié)果。b.執(zhí)行糾正辦法，著手處理問題。c.回顧后續(xù)行動以評定糾正辦法有效性。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第18頁19無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第19頁203.8文件文件統(tǒng)計中應(yīng)考慮項目：

a)檢驗日期和時間b)檢驗方法/參考程序c)檢驗行動水平d)判別儀器e)位置f)區(qū)域分類g)平面圖顯示取樣點h)取樣點（關(guān)鍵點或非關(guān)鍵點）I)檢驗結(jié)果j)結(jié)果評定k)顯示數(shù)據(jù)結(jié)果l)警報和或行動水平m)溫度和培養(yǎng)時間n)查對檢驗結(jié)果o)匯報日期，同意日期，以及所使用培養(yǎng)基失效期。p)污染檢定q)回顧者姓名r)匯報日期s)歷史數(shù)據(jù)回顧t)變更控制系統(tǒng)u)所使用儀器校準(zhǔn)日期v)確定行動或警報水平分析方法w)統(tǒng)計調(diào)查/糾正辦法文件系統(tǒng)：1.缺點描述2.可能原因3.糾正辦法相關(guān)責(zé)任人確實定4.行動步驟描述以及執(zhí)行進(jìn)度表5.行動有效性評定無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第20頁214.監(jiān)測系統(tǒng)4.1.1

最終滅菌最終滅菌環(huán)境控制程序與影響滅菌前產(chǎn)品生物負(fù)載和內(nèi)毒素含量微生物菌群相關(guān)。

包含蒸餾水、滅菌冷卻水、精制水、自來水、空氣、表面、容器和蓋子微生物程度。此程序最關(guān)鍵個別是已灌裝待滅菌產(chǎn)品生物負(fù)載。這個別確保滅菌過程中出現(xiàn)芽孢（耐熱）生物負(fù)載程度不超出經(jīng)驗證滅菌能力，而且到達(dá)期望滅菌水平。4.1.2無菌灌裝監(jiān)測取樣點數(shù)量和頻率通常大于已建立最終滅菌過程監(jiān)測點數(shù)量和頻率。灌裝間內(nèi)空氣、水、人員、壓縮空氣、地面、墻壁、設(shè)備、表面。有效環(huán)境控制是無菌制劑生產(chǎn)過程一個別，是確保無菌關(guān)鍵原因。無菌灌裝產(chǎn)品生產(chǎn)文件中應(yīng)包含日常環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)回顧。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第21頁22潔凈蒸汽檢測頻率：每個月一次

檢測項目 程度內(nèi)毒素 警報水平：=>0.12EU/ml；行動水平：>0.25EU/ml微粒數(shù) 光阻法（HIAC）:=>10微米max.500個/100ml =>25微米max.20個/100ml

微濾法（MF）: =>25微米max.100個/100ml =>50微米max.10個/100ml

金屬微粒=>100微米

max.1/100ml化學(xué)性質(zhì) 必須符合藥典中注射用水要求。

無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第22頁23氮氣檢測頻率：每個月一次

檢測項目 程度

微生物數(shù)量 警報水平：10cfu/m3；行動水平：100cfu/m3

壓縮空氣

檢驗頻率：每個月一次

檢測項目 程度

微生物數(shù)量 警報水平：10cfu/m3；行動水平：100cfu/m3

無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第23頁24高壓滅菌鍋中水檢驗頻率：微生物計數(shù)：每七天一次；內(nèi)毒素：每兩周一次；電導(dǎo)率：連續(xù)檢測

檢測項目 程度微生物數(shù)量 警報水平：5cfu/100ml；行動水平：10cfu/100ml

不得檢出大腸桿菌、大腸菌群和銅綠假單胞菌內(nèi)毒素 警報水平：0.12EU/ml；行動水平：0.25EU/ml電導(dǎo)率 max.15microS/cm

無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第24頁254.2水監(jiān)測水中微生物數(shù)量控制對于藥品生產(chǎn)廠非常主要，因為水可用于制劑產(chǎn)品以及各種清洗和沖洗程序。水起源或供給應(yīng)滿足飲用水標(biāo)準(zhǔn)要求。這些要求確保水中無大腸菌群。假如使用點水使用前是循環(huán)，搜集同一循環(huán)中樣品是適當(dāng)。假如生產(chǎn)過程需要使用水管，那么取經(jīng)過水管，而不是直接起源于水龍頭樣品。取樣后馬上進(jìn)行微生物檢驗。假如不能馬上進(jìn)行檢驗，試驗室收到樣品后應(yīng)在2-8°C條件下冷藏樣品。取樣和檢驗之間時間間隔通常不超出二十四小時。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第25頁26純化水

檢測項目 程度

微生物數(shù)量 警報水平：50cfu/ml；行動水平：100cfu/ml

不得檢出大腸桿菌、大腸菌群和銅綠假單胞菌

內(nèi)毒素 警報水平：0.12EU/ml；行動水平：0.25EU/ml

電導(dǎo)率 警報水平：1.0microS/cm；行動水平：1.5microS/cm(連續(xù))TOC 警報水平：250ppb；行動水平：500ppb(連續(xù))

無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第26頁27注射用水檢測頻率：天天；微粒：每個月

檢測項目 程度 微生物數(shù)量 警報水平：5cfu/100ml；行動水平：10cfu/100ml

不得檢出大腸桿菌、大腸菌群和銅綠假單胞菌內(nèi)毒素 警報水平：0.12EU/ml；行動水平：0.25EU/ml電導(dǎo)率 警報水平：1.0microS/cm；行動水平：1.5microS/cm(連續(xù))TOC 警報水平：250ppb；行動水平：500ppb微粒 光阻法（HIAC）:=>10微米max.500個/100ml =>25微米max.20個/100ml

微濾法（MF）:=>25微米max.100個/100ml =>50微米max.10個/100ml

金屬微粒=>100微米max.1/100ml

無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第27頁284.3壓縮空氣監(jiān)測應(yīng)考慮以下幾點：a)用于密封或保護(hù)無菌貯罐中產(chǎn)品壓縮空氣應(yīng)經(jīng)過疏水通風(fēng)過濾器，并按一定頻率進(jìn)行監(jiān)測，以確保過濾器能有效過濾細(xì)菌。b)用于無菌環(huán)境壓縮氣體/空氣應(yīng)采取無菌級過濾器過濾，并按一定頻率進(jìn)行檢驗，以確保氣體/空氣對環(huán)境無不良影響。c)全部不影響操作間中空氣壓縮氣體可按較少頻率進(jìn)行監(jiān)測。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第28頁294.4空氣監(jiān)測環(huán)境監(jiān)測程序應(yīng)包含有活性和無活性空氣中懸浮微粒日常監(jiān)測。起源于人體活菌與皮膚脫落物相關(guān)，所以無活性微粒數(shù)量高可能指示活性數(shù)量增加。人是環(huán)境中活性和無活性微粒主要起源。除滿足法規(guī)中要求動態(tài)監(jiān)測之外，靜態(tài)監(jiān)測也可能是必需。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第29頁304.4.1無活性微粒監(jiān)測生產(chǎn)過程中有暴露過程產(chǎn)品，應(yīng)證實環(huán)境中潛在污染是受控。0.5um或更大微粒通常作為環(huán)境污染指標(biāo)。對5.0um微粒監(jiān)測也可包含在內(nèi)。通常使用監(jiān)測方法是目視微粒計數(shù)。此方法原理是使帶有懸浮粒子氣體經(jīng)過一個聚焦光源，使得光線在單個微粒表面發(fā)生散射。微粒尺寸和數(shù)量可同時測量。除便攜式微粒計數(shù)器外，已研制出監(jiān)測系統(tǒng)可永久安裝在生產(chǎn)區(qū)域，連續(xù)監(jiān)測生產(chǎn)過程，并有集中數(shù)據(jù)存放和報警功效。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第30頁314.4.2活性微粒監(jiān)測空氣中微生物通常與固體或液體微粒相關(guān)。生物體可能粘附塵粒或其它小載體，假如沒有附著，也存在自由流動微粒懸浮在空氣中。監(jiān)測點監(jiān)測位置：在灌裝/密封過程中，距離操作點不超出1英尺，而且在氣流上游。除最初驗證/確認(rèn)時環(huán)境、人流和生產(chǎn)過程取樣點之外，應(yīng)選擇其它監(jiān)測位置。

方法環(huán)境中主動氣體取樣是為了證實可能存在活性懸浮微粒是受控。個別國家要求使用平皿暴露法和主動空氣取樣法。空氣中懸浮微粒監(jiān)測程序可能要求使用主動和被動空氣取樣兩種方法。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第31頁3設(shè)備表面空氣取樣器（SurfaceAirSampler）

SAS取樣器工作原理：空氣經(jīng)過渦輪被吸入裝置中，被吸在一個培養(yǎng)基平板表面。優(yōu)點：輕便靈活獨立電源帶孔蓋板可蒸汽滅菌可測量大量空氣使用標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基板可測量氣流

Slit-to-Agar(STA)空氣取樣器 在距裂縫口準(zhǔn)確位置處，使用一可旋轉(zhuǎn)瓊脂平板，氣體樣品直接撞擊固體營養(yǎng)培養(yǎng)基表面。優(yōu)點：可測量大量氣體可利用時間-濃度關(guān)系可使用微量取樣探針可用于壓縮氣體取樣缺點：設(shè)備大而不便有些設(shè)備不能蒸汽滅菌無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第32頁33離心取樣器

工作原理：空氣經(jīng)過渦輪被吸入裝置中，微粒因為地心引力而沉積在固體營養(yǎng)采集培養(yǎng)基（帶狀）表面。優(yōu)點：輕便靈活獨立電源搜集頂部可蒸汽滅菌可測量大量空氣可測量氣流缺點：培養(yǎng)帶起源單一表面真空取樣器

取樣器使用不銹鋼容器，填充有營養(yǎng)培養(yǎng)基培養(yǎng)皿置于容器中。利用真空系統(tǒng)將空氣樣品（和微粒）吸在培養(yǎng)平板表面。優(yōu)點：整個取樣個別可蒸汽滅菌可用于壓縮氣體取樣可遙控放置可測量氣流可取樣大量氣體缺點：設(shè)備有些粗笨（帶有真空系統(tǒng)）無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第33頁34液體氣霧捕集法

此種方法是使空氣經(jīng)過一個管子，管子出口在液體搜集培養(yǎng)基液面下。優(yōu)點：可選擇培養(yǎng)基，比如磷酸鹽緩沖液(PBS)或培養(yǎng)基（培養(yǎng)基中可能需加防沫劑）有生長力細(xì)胞在液體培養(yǎng)基中更易存活價格廉價缺點：

樣品處理可能會引發(fā)污染過濾法

此方法使用空氣取樣器，取樣器采取真空系統(tǒng)將空氣吸過一個過濾器，使得顆粒聚集在過濾器上。無菌轉(zhuǎn)移此過濾器，并在適當(dāng)營養(yǎng)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。優(yōu)點：可測量大量氣體過濾器培養(yǎng)基和可用孔徑選擇廣泛可測量氣流缺點：搜集樣品膜必須放置在營養(yǎng)培養(yǎng)基上無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第34頁35平皿放置法

此方法使用有固體營養(yǎng)培養(yǎng)基細(xì)菌培養(yǎng)皿，細(xì)菌培養(yǎng)皿直接暴露在環(huán)境中。

空氣中微粒沉積在瓊脂表面，培養(yǎng)后可直接計數(shù)。優(yōu)點：使用簡便經(jīng)濟(jì)實際上任何培養(yǎng)基都可使用可沿著灌裝線放置可連續(xù)監(jiān)測，經(jīng)過更換培養(yǎng)皿延長監(jiān)測時間不需要提供能量缺點：微生物數(shù)量與空氣體積無關(guān)。沉積微粒受微粒大小、溫度和經(jīng)過其表面氣流/空氣量影響。假如暴露時間太長，平皿會變干。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第35頁36空氣中微生物監(jiān)測平皿放置法：頻率和程度cfu/25cm2微生物數(shù)量等級需氧菌霉菌和酵母菌厭氧菌警報水平行動水平A.無菌灌裝： 最少每季度4h最少每年4h0 0 -每一灌裝前準(zhǔn)備工作最少30' -每一無菌連接操作最少30' -整個灌裝期間(max.4h/平皿) -灌裝后

最終滅菌產(chǎn)品:

灌裝過程中最少天天4小時B.無菌灌裝 最少每季度4h最少每年4h1 5 -整個灌裝期間(max.4h/平皿) -灌裝后

最終滅菌產(chǎn)品:

灌裝過程中最少天天4小時C.最少每七天4h 最少每季度4h最少每年4h950D最少每個月4h 最少每季度4h 最少每年4h10100E.最少每個月1h

最少每季度1h 最少每年1h13 100

無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第36頁374.4.3表面監(jiān)測所使用培養(yǎng)基類型可能影響取樣點代表菌群檢測。培養(yǎng)基中可加入中和劑，使得經(jīng)過化學(xué)消毒劑處理表面鈍化。1.接觸平板法

通常使用接觸平板是因為其使用方便，并可提供定量結(jié)果。

普通平板直徑是50mm，而且是經(jīng)填充，所以培養(yǎng)基形成半球型。

培養(yǎng)基表面可被壓成一個平坦表面，因而采樣面積大約25cm2。

然后培養(yǎng)皿按照要求培養(yǎng)時間放置在培養(yǎng)箱中。缺點：不適合用于不規(guī)則表面假如培養(yǎng)基是濕，可能發(fā)生微生物聚集培養(yǎng)基殘留物必須從取樣點移走無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第37頁382.擦拭法

此方法適合用于無法使用接觸平板設(shè)備和不規(guī)則表面。

擦拭物類型包含棉花、達(dá)克龍(聚酯纖維)和藻酸鈣。藻酸鈣纖維能夠溶化，所以可將全部搜集微生物釋放到溶液中。缺點：方法和取樣可能影響結(jié)果需經(jīng)處理才能培養(yǎng)樣品3.表面沖洗法

此方法最適合用于需確定內(nèi)表面生物負(fù)載大表面積區(qū)域。

無菌水是常見用于沖洗內(nèi)表面液體；然后可經(jīng)過膜過濾法搜集和檢驗。缺點：多數(shù)設(shè)備不適用需大量操作方法和取樣過程可能影響結(jié)果無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第38頁39表面微生物監(jiān)測頻率和程度cfu/25cm2微生物數(shù)量等級需氧菌霉菌和酵母菌厭氧菌警報水平

行動水平A.無菌灌裝最少每季度一次最少每年一次0 0-每一灌裝前準(zhǔn)備工作-每一無菌連接操作 -最少每班一次 -灌裝后

最終滅菌產(chǎn)品：

最少每七天一次

閑置A級潔凈區(qū)域:

最少每七天一次B.無菌灌裝 最少每季度一次最少每年一次15 -最少每班一次 -灌裝后

最終滅菌產(chǎn)品：

最少每七天一次

閑置B級無菌室:

最少每七天一次C.最少每七天一次

最少每季度一次最少每年一次 525D.最少每個月一次

最少每季度一次最少每年一次 550

無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第39頁40主動取樣頻率和程度(RCS) 微生物數(shù)量等級需氧菌霉菌和酵母菌厭氧菌警報水平行動水平A.無菌灌裝最少每季度一次最少每年一次0 0-最少每班一次最終滅菌產(chǎn)品：最少每七天一次閑置無菌室-最少每七天一次

B.無菌灌裝最少每季度一次最少每年一次<510最少每班一次最終滅菌產(chǎn)品：-最少每七天一次閑置無菌室-最少每七天一次C.最少每七天一次最少每季度一次最少每年一次30100

D.最少每個月一次最少每季度一次最少每年一次20200

E.最少每個月一次

最少每季度一次最少每年一次220500

無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第40頁414.5人員監(jiān)測人是無菌環(huán)境中污染主要起源。培訓(xùn)/任職資格培訓(xùn)/任職資格包含以下幾方面a.

人員衛(wèi)生/習(xí)慣1.頭發(fā)、皮膚、手指甲和衣服清潔2.無化裝品、指甲油、修剪手指甲、指甲膠、口香糖、糖果3.不允許吃東西、喝水、咀嚼口香糖或吸煙b.

疾病1.匯報全部感冒、流感、傳染病、傷口、曬傷2.匯報全部疾病或慢性皮膚病c.著裝1.工廠或潔凈區(qū)專用統(tǒng)一潔凈服2.不佩帶手表或珠寶3.保護(hù)性衣服d.

微生物介紹1.微生物種類普通起源e.

無菌技術(shù)介紹f.

更衣程序1.人員更衣程序是經(jīng)證實適當(dāng)（比如，未增加污染）。2.除前額、面罩、頸部、頭后部、衣服拉練、手臂、手指日常監(jiān)測點外，更衣程序還可包含其它取樣點。3.日常監(jiān)測可包含潔凈服兩前臂和兩手手指取樣。全部側(cè)面可能也需要進(jìn)行評定。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第41頁42再培訓(xùn)a.更衣證書假如來自潔凈服或手指涂抹樣品超出警報/行動水平，應(yīng)在進(jìn)入經(jīng)同意無菌區(qū)域時，對員工進(jìn)行相關(guān)程序再培訓(xùn)并再次證實合格。b.日常監(jiān)測假如來自潔凈服或手指涂抹樣品超出行動水平，可能需要對員工進(jìn)行相關(guān)程序再培訓(xùn)或再次取樣。假如出現(xiàn)超出警報/行動水平趨勢，應(yīng)考慮將該員工指派在無菌區(qū)域外擔(dān)任新職責(zé)。全部在無菌環(huán)境中工作員工都應(yīng)接收再培訓(xùn)并再次證實合格。全部與無菌生產(chǎn)相關(guān)員工應(yīng)最少每年參加一次模擬生產(chǎn)測試（培養(yǎng)基灌裝）。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第42頁43無菌室人員檢驗頻率：

無菌灌裝每班和全部相關(guān)人員，包含維修人員最終滅菌產(chǎn)品最少每七天每班1位員工

監(jiān)測點 程度

微生物數(shù)量ClassA:警報水平:0cfu/25cm2;行動水平:0cfu/25cm2 ClassB:警報水平:1cfu/25cm2;行動水平:5cfu/25cm2

不得檢出桿菌，革蘭氏陰性菌，霉菌和酵母菌無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第43頁44無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第44頁454.6產(chǎn)品或組分生物負(fù)載非無菌產(chǎn)品進(jìn)行生物負(fù)載檢驗以確定其微生物總量。僅生物負(fù)載量不能提供足夠信息?？赡苄枰u定生物負(fù)載耐熱性或D值。假如生物負(fù)載耐熱性超出了滅菌方法所能到達(dá)程度，即使是在程度內(nèi)總生物負(fù)載量也可能引發(fā)重大問題。無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第45頁46無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第46頁47謝謝!無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第47頁EnvironmentalMonitoring

–apracticalapproachDr.BerndKalkertSep.2nd,

無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第48頁491.IntroductionThepurposeofthisdocumentistoidentifymicrobiologicalandparticulatecontrolconceptsandprinciplesastheyrelatetothemanufactureofsterilepharmaceuticalproducts.Theconceptsforsterileproductmanufacturingarethemoststringentapplication,buttheseconceptscanalsobeappliedtonon-sterileproductmanufacture.Thefocusisenvironmentmonitoringasitrelatestofacilitycontrolandcompliance.Thiswascompiledtoaidinsettingupaprogramthatismeaningful,manageable,anddefendable.

無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第49頁50Inordertoensureaconsistentlyacceptableproductionenvironment,acomprehensiveenvironmentalcontrolprogramshouldbesupportedby:a.soundfacilitydesignandmaintenanceb.documentationsystemsc.validated/qualifiedsanitization/disinfectionproceduresd.reliableprocesscontrolse.goodhousekeepingpracticesf.effectiveareaaccesscontrolsg.effectivetraining,certification/qualificationandevaluationprogramsh.qualityassuranceofmaterialsandequipmentEnvironmentalsurveillanceisatoolutilizedtoevaluatetheeffectofcontrolsonthemanufacturingenvironment.Aprocesstoassessthecleanroomandothercontrolledenvironmentsofapharmaceuticalfacilitycanserveasanadjuncttothesterilityassuranceprogram.

無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第50頁512.EnvironmentalclassificationTheenvironmentalmonitoringprogramshouldbedesignedandimplementedbasedonsoundscientificprinciplesandinconformancewiththeregulatoryrequirementsofthegovernmentagenciesregulatingthemanufacturingsite.Iftheintentistoserveinternationalmarketsthemoststringentrequirementsshouldbeevaluatedasthebasisofanenvironmentalmonitoringprogram.無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第51頁52無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第52頁53無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第53頁54無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第54頁553.SurveillancesupportThepersonnelsupervisingtheenvironmentalmonitoringprogramshouldbecompetentinthescientificdisciplineandhaveappropriatetrainingandauthority.Equipmentusedshouldbecalibrated,systemsshouldbeappropriatelyvalidated,mediashouldbeproperlyprepared,andalloperationalproceduresshouldbewrittenandfollowed.無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第55頁563.1Cleaning&sanitization/disinfectionImplementationofcleaningandsanitizationproceduresisacriticalcomponentofoverallfacilitycontrol.Environmentalmonitoringdataareusedindeterminingtheeffectivenessoftheseprocedures.Selectionofsanitizersmayinclude:a.evaluationofrequiredcontacttimeb.typeofmicroorganismsthataretobeeliminatedc.confirmationofefficacyd.typeofsurfacetobetreatede.toxicityf.residueg.meansofapplicationValidationofestablishedcleaningandsanitizationproceduresshoulddemonstratemicrobialreduction.Thegoalistodemonstratethatroutinesanitizationprocedures,performedbytrainedcleaningpersonnel,consistentlyresultinalevelomicrobialcontrolsuitablefortheintendeduseofthearea.Itisasoundpracticetoperformchallengetestingoftheselectedsanitizers/disinfectantswithisolatedroutinelyrecoveredbytheenvironmentalmonitoringprogram.無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第56頁573.2

SamplesiteselectionTheprimarypurposeofsamplingshouldbetoprovidemeaningfuldatathatcanhelpidentifyactualorpotentialcontaminationproblemsassociatedwitha)specificprocedures;b)equipment;c)materials;d)processes.Oneshouldbeabletosamplethosesitesmostlikelytoresultinproductcontaminationiftheybecomecontaminated;however,itmaybeprudenttoidentifyindicatorsitesthatarenear,butnotincontactwithproduct.無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第57頁58Factorstoconsiderinselectingsitesforroutinesurveillanceare:a.Atwhichsiteswouldmicrobialcontaminationmostlikelyhaveanadverseeffectonproductquality?b.Whatsiteswouldmostlikelydemonstrateheaviestmicrobialproliferationduringactualproduction?c.shouldsomesitesforroutinemonitoringberotated?d.whatsiteswouldrepresentthemostinaccessibleordifficultareastoclean,sanitize,ordisinfect?f.Whatactivitiesintheareacontributetothespreadofcontamination?g.Wouldtheactofsamplingatagivensitedisturbtheenvironmentsufficientlytocauseerroneousdatatobecollectedorcontaminateproduct?Shouldsamplingonlybeperformedattheendoftheshift?無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第58頁59無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第59頁603.3

SamplingfrequencyNosinglesamplingschemeisappropriateforallenvironments.Thekeyistoselectmonitoringfrequenciesthatcanidentifypotentialsystemdeficiencies.Thetestfrequencypersitemaybelessfrequentthanthesystemorareafrequency.Inmanycases,monitoringperformedinconjunctionwithbatchproductionmayfulfilltherequirementsforroutineareamonitoring.無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第60頁613.4

AlertandactionlevelsTypically,theactionlevelswillbedrivenbytheregulatoryorindustryguidelineswhilethealertlevelsmaybedrivenbyhistoricalanalysisoftheenvironmentalmonitoringdata.Oncealertand/oractionlevelshavebeenestablished,theyshouldbeperiodicallyreviewedaspartofroutinetrendanalysis.Theyarenotextensionsofproductspecifications,butareintendedtoflagchangessothatcorrectiveactionmaybetakenbeforeproductqualityisadverselyaffected.Notallsituationsrequireuseofbothalertandactionlevels.Typically,contaminationinstrictlycontrolledenvironmentsdoesnotfallwithinanormaldistribution.無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第61頁623.5

DatamanagementDatacollection:routinedatamaybepooledintoadesignateddatabaseinaconsistentrecordformat.Dataanalysis:無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第62頁63Datainterpretation:Datageneratedshouldbesummarizedandevaluatedtodeterminewhethertheproductionenvironmentisinastateofcontrol.Statisticalprocesscontrolisonemethodofperformingthisevaluation.Interpretationoftheimpactofasignificantfluctuationincountsorachangeinflorashouldbebasedontheexperiencedjudgementofaqualifiedperson.Considerationsforassessingprocessstateofcontrol:a)Highervaluesthanthosecurrentlyimposedmaybeindicativeofaprocessspecificationthatisnolongerappropriate.Areviewoftheprocessmaybeneeded.b)Severalconsecutivepointsordriftsmaybeconsideredtobeapatternorclusterformationthat,ifabovethealertlevel,signalsatrendthatrequiresaninvestigation.c)Significantfluctuationsorjumpsinthevaluesfortheprocessarealsosignificantwhererecurringcyclesmaypointtoseasonalvariations.d)Oneormorevaluesmarkedlyhigherorlowerthanthemajorityofthedatamayormaynotbeprocessoutliers.無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第63頁643.6

CharacterizationofisolatesCharacterizingmicroorganismsrecoveredfromenvironmentalandpersonnelmonitoringisanimportantpartofsurveillanceprograms.Initially,manyisolatesmaybecharacterizedtoestablishadatabaseofthemicroorganismsfoundintheareaOnceadatabaseisestablished,routinecharacterizationshouldcontinuetodeterminewhetherisolatesarepartofthenormalmicrobialfloraorrepresentsomethingdifferent.Characterizationofisolatesalsomaybeusefulininvestigatingsituationssuchaspositivesterilitytestresults,positivemediafillresults,alertandactionlevelexcursions,orintroductionofacommonorganismthatmaysignaladevelopingresistancetoasanitizingagent.Achangeinthemicrobialfloraortheintroductionofapreviouslyundetectedspeciesmightsignifyachangeinasystemthatshouldbeinvestigated.Characterizationcanbeusefulcluesastothepossiblesourceofisolates.Forexample,StaphylococcusspeciesarecommonlyfoundonskinandtheformerPseudomonasspeciesareusuallyassociatedwithwater.無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第64頁653.7

Investigations/correctiveactions

Whenexcursionsoccur,theremaybeadriftfromthebaseline.Aninvestigationisneededtodeterminewhathappenedandwhatshouldbedonetopreventarecurrence.Recordsshouldshowthattheexcursionswererecognizedandappropriatefollow-upoccurred.Whenanalert/actionlevelisexceeded,thefollowingactionsmaybeappropriate.a.Notifytheappropriatemanagement.-Initiateaninvestigationtodeterminethecausesandconsequencesoftheexcursionfromthespecifiedoperatingparameters.b.Performcorrectiveactionstoaddresstheproblemasneeded.c.Follow-upreviewtoassesseffectivenessofcorrectiveaction.無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第65頁66無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第66頁673.8

DocumentationItemstobeconsideredfordocumentationrecords:a)Dateandtimeoftestb)Testmethod/procedurereferencec)Activitylevelatsiteduringtestd)Equipmentidentificatione)Locationf)Areaclassificationg)Schematicsofareasshowingsamplesitelocationsh)Samplesite(criticalornon-critical)I)Testresultsj)Evaluatorofresultsk)Dateresultsreadl)Alertand/oractionlevelm)Temperatureanddurationofincubationn)Controltestresultso)Certificationdate,validationdate,andexpirationdateofmediausedp)Characterizationofcontaminantsq)Nameofreviewerr)Reportingofdatas)Reviewofhistoricaldatat)Changecontrolsystemu)Calibrationdateoninstrumentationv)Methodology,analysisusedtospecifyaction/alertlevelsw)Systemfordocumentinginvestigative/correctiveaction:1.Descriptionofdeficiency2.Possiblecause(s)ofproblem3.Identificationofpersonsresponsibleforrelevantcorrectiveaction4.Descriptionofactionstepsandtheirscheduleforimplementation5.Evaluationofeffectivenessofactionsteps無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第67頁684.SystemSurveillance4.1.1

TerminalSterilizationTheterminalsterilizationenvironmentalcontrolprogramisconcernedwithmicrobialflorathatcontributestothebioburdenandendotoxincontentoftheproductpriortosterilization.Thisincludesdistilledwater,sterilizercoolingwater,treatedwater,citywater,air,surfaces,microbiallevelsofcontainersandclosures.Themostcriticalaspectoftheprogramisthebioburdenofthefilledproducttobesterilized.Thisaspectensuresthatthespore(heatresistant)bioburdenlevelspresentedtotheproductsterilizationcycledonotexceedthevalidatedcapabilitiesoftheprocessandthatthedesiredsterilityassurancelevelsareachieved.4.1.2

AsepticfillingThenumberofsamplesitesandfrequencyofmonitoringaregenerallygreaterthanthatmonitoredforestablishedterminalsterilizationprocesses.Air,water,personnel,compressedgases,floors,walls,machinery,surfaceswithinthefillingroom.Adequateenvironmentalcontrolisanintegralpartoftheasepticmanufacturingprocessandacriticalfactorincontributingtosterilityassurance.Areviewoftheroutineenvironmentalcontroldatashouldbeincludedinthemanufacturingdocumentationforasepticallyfilledproducts.無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第68頁69PureSteamFrequencyoftesting:1xpermonth

Testingpoints LimitsEndotoxins Alertlevel:=>0.12EU/ml;actionlevel:>0.25EU/mlParticles HIAC: =>10micronmax.500particles/100ml =>25micronmax.20particles/100ml MF: =>25micronmax.100particles/100ml =>50micronmax.10particles/100ml Metalparticles=>100micronmax.1/100mlChemicals mustmeetrequirementsofPharmacopoeaforWFI

無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第69頁70NitrogenFrequencyoftesting:1xpermonth

Testingpoints Limits

Microbiological Alertlevel:10cfu/m3;actionlevel:100cfu/m3

Compressedair

Frequencyoftesting:1xpermonth

Testingpoints Limits

Microbiological Alertlevel:10cfu/m3;actionlevel:100cfu/m3

無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第70頁71WaterinautoclaveFrequencyoftesting:Microbialcount1xperweek;endotoxinsevery2weeks;conductivitycontinuously

Testingpoints Limits

Microbialcount Alertlevel:5cfu/100ml;actionlevel:10cfu/100ml AbsenceofE.coli,coliformsandP.aeruginosa

Endotoxins Alertlevel:0.12EU/ml;actionlevel:0.25EU/ml

Conductivity max.15microS/cm

無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第71頁724.2

WatermonitoringControlofthemicrobialqualityofwaterisofgreatimportanceinthepharmaceuticalmanufacturingfacilitysinceitmaybeusedforformulatingproduct,aswellasforvariouswashingandrinsingprocesses.Thesourceorfeedwatershouldmeettherequirementsofdrinkingwaterstandard.Theserequirementsensuretheabsenceofcoliforms.Ifusepointsareroutinelyflushedpriortouse,itisappropriateforsamplestobecollectedwiththesameflushcycle.Samplethroughhosesandnotdirectlyfromthetapifmanufacturingpracticesrequiretheuseofhoses.Startmicrobiologicalexaminationofwaterpromptlyaftercollection.Ifimmediateprocessingisnotpossible,refrigeratesamplesat2-8°Cuponreceiptinthelaboratory.Timeelapsingbetweencollectionandexaminationgenerallyshouldnotexceed24hours.無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第72頁73Purifiedwater

Testingpoints Limits

Microbialcount Alertlevel:50cfu/ml;actionlevel:100cfu/ml AbsenceofE.coli,coliformsandP.aeruginosa

Endotoxins Alertlevel:0.12EU/ml;actionlevel:0.25EU/ml

Conductivity Alertlevel:1.0microS/cm;actionlevel:1.5microS/cm(continuously)TOC Alertlevel:250ppb;actionlevel:500ppb(continuously)

無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第73頁74WaterforinjectionsFrequencyoftesting:daily;particlesmonthly

Testingpoints Limits

Microbialcount Alertlevel:5cfu/100ml;actionlevel:10cfu/100ml AbsenceofE.coli,coliformsandP.aeruginosa

Endotoxins Alertlevel:0.12EU/ml;actionlevel:0.25EU/ml

Conductivity Alertlevel:1.0microS/cm;actionlevel:1.5microS/cm(continuously)

TOC Alertlevel:250ppb;actionlevel:500ppb

Particles HIAC: =>10micronmax.500particles/100ml =>25micronmax.20particles/100ml MF: =>25micronmax.100particles/100ml =>50micronmax.10particles/100ml Metalparticles=>100micronmax.1/100ml

無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第74頁754.3

CompressedgasmonitoringThefollowingpointsshouldbeconsidered:a)Compressedgasesusedtopressurizeorblanketproductinsterileholdingtanksshouldbeintroducedviahydrophobicventfiltersandmonitoredatafrequencythatassuresthatthegasdoesnotchallengethebacterialretentionofthefilter.b)Compressedair/gasthatisusedasepticenvironmentsshouldbefilteredthroughsterilizing-gradefiltersandtestedonafrequencythatassuresthattheair/gasdoesnotadverselyeffecttheenvironment.c)Allcompressedairconnectionswhichdonotaffecttheairtotheworkspaceshouldbemonitoredwithlessfrequency.無菌產(chǎn)品動態(tài)環(huán)境監(jiān)測拜耳制藥第75頁764.4

Airmonitoring

Environmentalmonitoringprogramshouldinc