免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第1頁

第一節(jié)免疫標(biāo)識技術(shù)基礎(chǔ)概念一、免疫標(biāo)識與標(biāo)識免疫概念二、常見免疫標(biāo)識物質(zhì)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第2頁

免疫標(biāo)識與標(biāo)識免疫免疫標(biāo)識技術(shù)：標(biāo)識物與免疫活性物質(zhì)聯(lián)接技術(shù)標(biāo)識免疫技術(shù)：以標(biāo)識免疫物質(zhì)檢測對應(yīng)靶物質(zhì)技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第3頁常見免疫標(biāo)識物質(zhì)類別標(biāo)識物用途熒光素FITC、RB200、TRITC免疫組化鑭系元素螯合物免疫分析測定放射性核素

3H、14C、32P、57Gr免疫分析測定

125I、131I酶HRP、AP免疫組化免疫分析測定化學(xué)發(fā)光物L(fēng)uminol、lucigenin免疫分析測定金屬顆粒膠體金、鐵蛋白免疫組化免疫分析測定

免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第4頁

第二節(jié)酶標(biāo)識技術(shù)一、常見標(biāo)識方法二、標(biāo)識免疫物分離與判定免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第5頁常見標(biāo)識方法1、常見酶辣根過氧化物酶（HRP）堿性磷酸酶（AP）2、標(biāo)識方法戊二醛交聯(lián)法過碘酸鹽氧化法免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第6頁戊二醛交聯(lián)法(一步法）抗體-NH2+COH-（CH2）3-COH+NH2-酶抗體-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶抗體-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-抗體酶-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第7頁戊二醛交聯(lián)法（二步法）COH-（CH2）3-COH+NH2-酶抗體-NH2+CHO-（CH2）3-CH=NH2-酶抗體-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第8頁過碘酸鹽氧化法OOOOOONaIO4OOOHOOOHOH+NH2抗體OOONN抗體抗體H2ON抗體NaBH4Schiff堿酶-五炭糖環(huán)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第9頁標(biāo)識免疫物分離與判定1、分離目標(biāo)：去除游離酶方法：鹽析、柱層析2、判定抗體活性酶活性標(biāo)識物純度免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第10頁

第三節(jié)熒光標(biāo)識技術(shù)一、常見標(biāo)識方法二、標(biāo)識免疫物分離與純化免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第11頁常見標(biāo)識方法1、熒光素概念2、生物標(biāo)識熒光素要求3、常見熒光素標(biāo)識原理與方法免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第12頁生物標(biāo)識熒光素要求1、含有與蛋白質(zhì)共價結(jié)合能力2、熒光效率高3、能與背景物質(zhì)形成鮮明對比4、不影響蛋白質(zhì)生物、免疫活性5、標(biāo)識方法安全、簡便6、標(biāo)識物穩(wěn)定，易保留免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第13頁FITC標(biāo)識原理與方法熒光素-N=C=S+NH2-抗體熒光素-N-C-N-抗體HSH免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第14頁RB200標(biāo)識原理與方法熒光素-SO3Na+PCl5熒光素-SO2Cl

+

PCl3+NaCl熒光素-SO2Cl+NH2-抗體熒光素-SO2-NH-抗體+HCl免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第15頁標(biāo)識免疫物分離與判定1、分離目標(biāo)：去除游離熒光素方法：柱層析2、判定抗體活性標(biāo)識物結(jié)合度

F/P比值應(yīng)用意義免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第16頁

第四節(jié)放射性核素標(biāo)識技術(shù)一、常見標(biāo)識方法二、標(biāo)識免疫物分離與純化免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第17頁常見標(biāo)識方法1、常見放射性核素2、125I標(biāo)識方法直接法（氯胺T法）間接法（連接法）免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第18頁直接法（氯胺T法）OH-NHCHONH-CH2OH-NHCHONH-CH2Na125I4。C125I氯胺T免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第19頁間接法（連接法）CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2HOO=C-C-CH2CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2HOO=C-C-CH2+Na125I氯胺T125INSHPP免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第20頁間接法（連接法）CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2HOO=C-C-CH2CH2OHH-C-C-N-蛋白質(zhì)HOH+NH2-蛋白質(zhì)125I125I免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第21頁標(biāo)識免疫物分離與判定1、分離目標(biāo)：去除游離放射性核素方法：柱層析2、判定游離放射性核素含量免疫活性比放射性（mCi/mg）應(yīng)用意義免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第22頁本章小結(jié)1、免疫標(biāo)識技術(shù)概念2、常見免疫標(biāo)識物質(zhì)及其標(biāo)識方法3、標(biāo)識免疫物質(zhì)分離與判定免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第23頁思索題1、何謂免疫標(biāo)識技術(shù)？2、常見免疫標(biāo)識物質(zhì)有哪些？3、酶標(biāo)識主要方法有哪些？4、F/P比值實用意義怎樣？5、何謂比放射性？有何意義？免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第24頁標(biāo)識免疫技術(shù)應(yīng)用免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第25頁

第一節(jié)標(biāo)識免疫技術(shù)分類一、按指示標(biāo)識物質(zhì)劃分類型二、按測定方式劃分類型三、按測定用途劃分類型免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第26頁1、酶免疫技術(shù)2、熒光免疫技術(shù)3、放射免疫技術(shù)4、發(fā)光免疫技術(shù)5、金免疫技術(shù)按指示標(biāo)識物質(zhì)劃分類型免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第27頁1、均相型（homogenous）2、非均相型（heterogeneous）按測定方式劃分類型免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第28頁均相型（homogenous）非均相型（heterogeneous）免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第29頁雙標(biāo)識均相熒光免疫測定免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第30頁酶擴充免疫測定技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第31頁1、免疫測定技術(shù)2、免疫組化技術(shù)按測定用途劃分類型免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第32頁

第二節(jié)酶聯(lián)免疫吸附試驗一、ELISA技術(shù)原理與方法二、ELISA技術(shù)操作注意關(guān)鍵點免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第33頁ELISA技術(shù)原理與方法間接法

夾心法

競爭法免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第34頁間接法免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第35頁夾心法免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第36頁競爭法免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第37頁酶標(biāo)儀免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第38頁酶標(biāo)儀免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第39頁ELISA技術(shù)操作注意關(guān)鍵點試劑器材操作步驟

適當(dāng)工作濃度免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第40頁

第三節(jié)熒光抗體技術(shù)一、熒光抗體技術(shù)原理與方法二、熒光抗體技術(shù)操作注意關(guān)鍵點免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第41頁熒光抗體技術(shù)原理與方法直接法間接法補體法雙標(biāo)識法

免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第42頁直接法間接法補體法雙標(biāo)識法免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第43頁熒光抗體技術(shù)操作注意關(guān)鍵點標(biāo)本處理染色操作

結(jié)果觀察免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第44頁熒光顯微鏡免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第45頁熒光顯微鏡使用原理激發(fā)濾片（BG）吸收濾片（OG）標(biāo)本FITC吸收光峰值：490-495nmFITC發(fā)射光峰值：520-530nmBG：325-500OG：410-650免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第46頁激發(fā)濾片吸收濾片熒光濾鏡使用原理免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第47頁

第四節(jié)放射免疫測定技術(shù)一、放射免疫測定技術(shù)原理與方法二、放射免疫測定技術(shù)操作注意關(guān)鍵點免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第48頁結(jié)合相游離相放射免疫分析法原理與方法免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第49頁12510205010040302010未標(biāo)識抗原含量結(jié)合、游離相放射性含量比值免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第50頁β液閃儀免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第51頁γ計數(shù)器免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第52頁放射免疫測定技術(shù)操作注意關(guān)鍵點反應(yīng)溫度與時間結(jié)合相與游離相分離免疫標(biāo)記技術(shù)的基本概念第53頁免疫標(biāo)識技術(shù)比較FIAELISARIA敏感性較低高高特異性高高