ICS

65.020.30CCS

B

44DB11 DB11/T

1809—2020代替

828.1—，DB11/T

—，DB11/T

1459.1—，

—，DB11/T

1459.3—，

—，

1459.5—實(shí)驗(yàn)動物

微生物檢測Laboratory

animal—Microbiological

testing

發(fā)布

實(shí)施北京市市場監(jiān)督管理局 發(fā)

布DB11/T

— 前言.................................................................................

II1

...............................................................................

12

規(guī)范性引用文件.....................................................................

13

術(shù)語和定義.........................................................................

44

...........................................................................

45

...........................................................................

46

..........................................................................

127

..........................................................................

158

..........................................................................

209

..........................................................................

2110

結(jié)論與報告.......................................................................

21附錄

A（規(guī)范性） 貓泛白細(xì)胞減少癥病毒

檢測方法

...................................

23附錄

B（規(guī)范性） 貓杯狀病毒

RT-PCR

檢測方法

..........................................

24附錄

C（規(guī)范性） 貓皰疹病毒

I

型

PCR

檢測方法

.........................................

26附錄

D（規(guī)范性） 貓免疫缺陷病毒熒光

PCR

檢測方法

.....................................

27附錄

E（規(guī)范性） 貓傳染性腹膜炎病毒

RT-PCR

檢測方法

..................................

29附錄

F（規(guī)范性） 貓腸道冠狀病毒

RT-PCR

......................................

31附錄

G（規(guī)范性） 貓白血病病毒熒光

.......................................

33附錄

H（規(guī)范性）巴爾通體熒光

...........................................

35附錄

I（規(guī)范性） 空腸彎曲桿菌

...........................................

36附錄

J（規(guī)范性） 鴿痘病毒熒光

...........................................

37附錄

K（規(guī)范性） 實(shí)驗(yàn)魚

4

種分枝桿菌的區(qū)分鑒定方法

...................................

38附錄

L（規(guī)范性） 實(shí)驗(yàn)魚

PCR

檢測方法

.................................................

39參考文獻(xiàn).............................................................................

40DB11/T

—

微生物檢測1 范圍本文件規(guī)定了的微生物等級分類、、、、檢測規(guī)則、結(jié)果判定、結(jié)論與報告。本文件適用于小型實(shí)驗(yàn)豬、羊、狨猴、長爪沙鼠、實(shí)驗(yàn)雪貂、實(shí)驗(yàn)貓、鵝、實(shí)驗(yàn)鴿、實(shí)驗(yàn)魚（斑馬魚）的微生物檢測。2 規(guī)范性引用文件下列中的通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，所有的修改單）適用于本文件。GB

4789.7 標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)GB

4789.15 標(biāo)準(zhǔn)

霉菌和酵母計(jì)數(shù)GB/T

實(shí)驗(yàn)動物 沙門菌檢測方法GB/T

實(shí)驗(yàn)動物 耶爾森菌檢測方法GB/T

實(shí)驗(yàn)動物 皮膚病菌檢測方法GB/T

實(shí)驗(yàn)動物多殺巴斯德GB/T

實(shí)驗(yàn)動物 支氣管GB/T

實(shí)驗(yàn)動物 支原體檢測方法GB/T

泰澤病原體檢測方法GB/T

大腸埃希菌

檢測方法GB/T

嗜肺巴斯德GB/T

肺炎克GB/T

金黃色葡萄球菌檢測方法GB/T

肺炎鏈球菌檢測方法GB/T

乙型溶菌檢測方法GB/T

綠膿桿菌檢測方法GB/T

淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒檢測方法GB/T

漢坦病毒檢測方法GB/T

小鼠肝炎病毒檢測方法GB/T

仙臺病毒檢測方法GB/T

小鼠肺炎病毒檢測方法GB/T

呼腸孤

型檢測方法DB11/T

—GB/T

小鼠細(xì)小病毒檢測方法GB/T

鉤端螺旋體檢測方法GB/T

志賀菌檢測方法GB/T

結(jié)核分枝桿菌檢測方法GB/T

空腸彎曲桿菌檢測方法GB/T

狂犬病病毒檢測方法GB/T

犬細(xì)小GB/T

犬瘟熱GB/T

獼猴

I

B

病毒）檢測方法GB/T

猴GB/T

猴

T

淋巴細(xì)胞趨向性病毒

I

型檢測方法GB/T

猴痘病毒檢測方法GB/T

16551豬瘟診斷技術(shù)GB/T

SPF

雞微生物學(xué)監(jiān)測 第

1

部分：SPF

雞

微生物學(xué)監(jiān)測總則GB/T

SPF

雞微生物學(xué)監(jiān)測 第

5

部分：SPF

雞

瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)GB/T

SPF

雞 微生物學(xué)監(jiān)測 第

6

部分：SPF

雞

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)GB/T

18089 藍(lán)舌離、鑒定及血清中和抗體檢測技術(shù)GB/T

18090 豬繁殖與呼吸綜合征GB/T

18637牛病毒性腹瀉/粘膜病診斷技術(shù)規(guī)范GB/T

18638 流行性乙型腦炎技術(shù)GB/T

18641 偽狂犬病方法GB/T

18646 布魯氏菌病技術(shù)GB/T

18652 致病性嗜水氣單GB/T

18653 彎曲桿菌的分離GB/T

18935 口蹄疫診斷技術(shù)GB/T

豬菌

2

型熒光

GB/T

21674 豬圓環(huán)病毒聚合酶鏈反應(yīng)試驗(yàn)方法GB/T

27517 鑒別豬繁殖與呼吸綜合征病性與毒株復(fù)合

方法GB/T

27528 口蹄時

GB/T

27530 敗血病技術(shù)GB/T

27539

A

型

RT-PCR

GB/T

27637 副結(jié)核分枝桿菌實(shí)時

GB/T

27639 結(jié)核原菌實(shí)時

PCR

檢測方法GB/T

27981 牛傳染性管時

PCR

檢測方法GB/T

27982 小反芻獸疫診斷技術(shù)GB/T

34750 副豬嗜血桿菌檢測方法GB/T

36789 病病毒DB11/T

—NY/T

雞和雞白痢診斷技術(shù)NY/T

獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與技術(shù)規(guī)范NY/T

牛流行熱微量中和試驗(yàn)方法NY/T

豬流行瀉診斷技術(shù)NY/T

豬傳染性萎縮性鼻炎診斷技術(shù)NY/T

豬傳染性胃診斷技術(shù)NY/T

動物和產(chǎn)品沙門氏菌檢測方法NY/T

小鵝瘟診斷技術(shù)NY/T

動物炭疽診斷技術(shù)NY/T

動物衣原體病診斷技術(shù)NY/T

禽霍亂（禽巴氏桿菌?。┰\斷技術(shù)NY/T

豬丹毒技術(shù)NY/T

綿羊痘和山羊痘診斷技術(shù)NY/T

豬支原體肺炎診斷技術(shù)NY/T

傳染性膿皰皮炎診斷技術(shù)NY/T

狀內(nèi)皮病技術(shù)NY/T

絲狀支原體山羊亞種檢測方法NY/T

禽結(jié)核病技術(shù)SC/T

魚類細(xì)菌病檢疫技術(shù)規(guī)程 第

2

部分：柱狀嗜菌爛鰓病方法SC/T

魚類細(xì)菌病檢疫技術(shù)規(guī)程 第

3

部分：嗜水氣單胞菌及豚鼠氣單胞菌腸炎病方法SC/T

魚類細(xì)菌病檢疫技術(shù)規(guī)程 第

4

部分：熒光假單胞菌赤皮病方法SN/T

Q

熱技術(shù)規(guī)范SN/T

山羊炎-腦炎和綿羊梅迪-維斯納病檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T

雞白血病檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T

雞病毒性炎檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T

豬痢疾檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T

牛地方流行性白血病檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T

豬傳染性胸膜肺炎檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T

雞法氏囊技術(shù)規(guī)范SN/T

食品中多種致病菌

法SN/T

豬細(xì)小病毒病檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T

魚鰓霉病檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T

乳及乳生微生物學(xué) 第

8

部分：普通變形桿菌和奇異變形桿菌檢驗(yàn)SN/T

豬水泡病檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T

鴨病毒性腸炎檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T

阿留申病檢疫技術(shù)規(guī)范DB11/T

—SN/T

國境口岸萊姆病螺旋體檢驗(yàn)規(guī)程SN/T

鴨病毒性肝炎

I

型檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T

綿羊肺腺瘤病檢疫技術(shù)規(guī)范SN/T

進(jìn)出口食品中幽門螺桿菌的檢驗(yàn)方法SN/T

鴨疫氏菌病檢疫技術(shù)規(guī)范3 術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1實(shí)驗(yàn)動物 laboratory

經(jīng)人工飼育，的微生物和寄生蟲實(shí)行控制，遺傳背景明確或者來源清楚，用于科學(xué)研究、教學(xué)、生產(chǎn)和檢定以及其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)的動物。[來源：GB

14925—，3.1]3.2普通級實(shí)驗(yàn)動物

(CV)

laboratory

animal不攜帶所規(guī)定的人獸共患病病原、動物烈性傳染病病原以及對有重大干擾原的實(shí)驗(yàn)動物。3.2.1無特定抗原抗體普通級實(shí)驗(yàn)動物

&

antibody-free

laboratory

animal普通級實(shí)驗(yàn)動物中未免疫特定的疫苗，且經(jīng)不實(shí)驗(yàn)要求排除的特定病原微生物抗原抗實(shí)驗(yàn)動物。3.3無特定病原體級實(shí)驗(yàn)動物 specific

pathogen

(SPF)

laboratory

除普應(yīng)排除的病原外，不主要感染或條件致對科學(xué)實(shí)驗(yàn)大的病原的實(shí)驗(yàn)動物。3.4無菌級實(shí)驗(yàn)動物

laboratory

無可檢出的一切生命體的實(shí)驗(yàn)動物。4 等級分類根據(jù)對微生物和寄生蟲的程度，實(shí)驗(yàn)動物分為普通級實(shí)驗(yàn)動物、無特原和無菌級實(shí)驗(yàn)。5 檢測要求

Japanese

encephalitis

serotype

Food

disease

fever

Highly

virus

Brucella

Leptospira

Erysipelothrix

Porcine

respiratory

Pathogenic

dermal

Japanese

encephalitis

serotype

Food

fever

Highly

virus

Brucella

Leptospira

Erysipelothrix

Pseudorabies

circovirus

parvovirusPorcine

respiratory

Actinobacillus

Mycoplasma

Transmissible

DB11/T

—5.1 外觀檢查對待檢實(shí)驗(yàn)動物的狀態(tài)、行為、被毛、天然孔分泌物進(jìn)行外觀檢查。5.2 微生物檢測項(xiàng)目5.2.1 實(shí)驗(yàn)豬和實(shí)驗(yàn)小型豬各等級病原微生物表

1

的規(guī)定執(zhí)行。表1表1 實(shí)驗(yàn)豬和實(shí)驗(yàn)小型豬各等級病原微生物檢測項(xiàng)目

Food

Brucella

bovis

Bacillus

Leptospira

Borrelia

Coxiella

burnetii

petits

Food

Brucella

bovis

Bacillus

Leptospira

Borrelia

Coxiella

burnetii

Bovine

Infectious

bovine

Mycobacterium

Bovine

leukemia

epidemic

diarrhea

Bordetella

bronchiseptica

Parasuis

Pathogenic

dermal

vesicular

Salmonella

通級實(shí)驗(yàn)免疫表2表2實(shí)驗(yàn)牛和實(shí)驗(yàn)羊各等級病原微生物檢測項(xiàng)目DB11/T

—表

1 實(shí)驗(yàn)豬和實(shí)驗(yàn)小型豬各等級病原微生物檢測項(xiàng)目（續(xù)）5.2.2實(shí)驗(yàn)牛和實(shí)驗(yàn)羊各等級病原微生物表表

1 實(shí)驗(yàn)豬和實(shí)驗(yàn)小型豬各等級病原微生物檢測項(xiàng)目（續(xù)）

Blue

virusBovine

ephemeral

petits

Pseudorabies

Mycoplasma

capricolum

a

b

Caprine

virusa

adenomatosis

a

b

Cercopithecine

Lymphocytic

Salmonella

Pathogenic

dermal

Shigella

Cercopithecine

Lymphocytic

Salmonella

Pathogenic

dermal

Shigella

Sendai

Simian

immunodeficiency

Simian

lymphotropic

type

Simian

Yersinia

enterocoliticaDB11/T

—表

2 實(shí)驗(yàn)牛和實(shí)驗(yàn)羊各等級病原微生物檢測項(xiàng)目（續(xù)）5.2.3 實(shí)驗(yàn)各等級病原微生物檢測項(xiàng)目按照表表

2 實(shí)驗(yàn)牛和實(shí)驗(yàn)羊各等級病原微生物檢測項(xiàng)目（續(xù)）表3實(shí)驗(yàn)狨猴各等級病原微生物檢測項(xiàng)目

Hantavirus

Lymphocytic

Salmonella

Pathogenic

dermal

Hantavirus

Lymphocytic

Salmonella

Pathogenic

dermal

Sendai

Hepatitis

Virus

Mice

Reovirus

type

Minute

of

aeruginosa

Tyzzer

organism

Mycoplasma

Pasteurellamultocida

Bordetellabronchiseptica

Pasteurellapneumotropica

Helicobacter

pylori

Staphylococcus

aureus

pnemoniae

Beta

Corynebacteriumkutscheri

Klebsiellaoxytoca

coli

Klebsiella

pneumoniae

jejuni

mirabillisDB11/T

—表

3實(shí)驗(yàn)狨猴各等級病原微生物檢測項(xiàng)目（續(xù)）5.2.4 實(shí)驗(yàn)各等級病原微生物檢測項(xiàng)目按照表

4

的規(guī)定執(zhí)行。表4 實(shí)驗(yàn)長爪沙鼠各等級病原微生物檢測項(xiàng)目

Salmonella

Pathogenic

dermal

Shigella

Aleutian

Canine

Canine

parvoviurs

Rabies

Salmonella

Pathogenic

dermal

Shigella

Aleutian

Mycoplasma

Beta-hemolytic

Bordetella

bronchiseptica

Klebsiella

pneumoniae

spp.

pneumoniae

mirabilis

Staphylococcus

aureus

aeruginosa

Canine

Canine

parvoviurs

Rabies

Hantavirus

Feline

Feline

Feline

type

DB11/T

—5.2.5 實(shí)驗(yàn)各等級病原微生物檢測項(xiàng)目按照表

5

的規(guī)定執(zhí)行。表5實(shí)驗(yàn)雪貂各等級病原微生物檢測項(xiàng)目5.2.6 實(shí)驗(yàn)貓各等級病原微生物檢測表

6

的規(guī)定執(zhí)行。表6 實(shí)驗(yàn)貓各等級病原微生物檢測項(xiàng)目

Rabies

Salmonella

Pathogenic

dermal

Feline

Feline

Feline

type

Rabies

Salmonella

Pathogenic

dermal

Feline

immunodeficiency

Feline

infectious

Feline

Feline

leukemia

Bordetellabronchiseptica

Pasteurellamultocida

Yersinia

enterocolitica

Bartonella

Campylobaceterjejuni

Helicobacter

hemolytic

Disease

Infection

Virus

Infection

Reovirus

Adenovirus

DB11/T

—表

6實(shí)驗(yàn)貓各等級病原微生物檢測項(xiàng)目（續(xù)）5.2.7 實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)鴿各等級病原微生物檢測項(xiàng)目按照表

7

的規(guī)定執(zhí)行。表7 實(shí)驗(yàn)雞、實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝、實(shí)驗(yàn)鴿各等級病原微生物檢測項(xiàng)目10

Fowl

Salmonella

pullorum

paragallinarum

Mycoplasma

Duck

Salmonella

parvovirus

Disease

Infection

Virus

Infection

Reovirus

Adenovirus

Fowl

Salmonella

pullorum

paragallinarumMycoplasma

gallisepticum

Lymphoid

Leukosis

Reticulendotheliosis

Infectious

Encephalomyelitis

Adenovirus

tuberculosis

Mycoplasma

synoviae

Duck

Salmonella

Duck

type

Riemerella

parvovirus

Pigeon

DB11/T

—表

7實(shí)驗(yàn)雞、實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝、實(shí)驗(yàn)鴿各等級病原微生物檢測項(xiàng)目（續(xù)）11

marinum

chelonae

Vibrio

hydrophila

iniae

marinum

chelonae

Vibrio

hydrophila

iniae

Flavobacterium

veronii

jandaei

spp.

spp.

Flavobacterium

branchiophilum

Flavobacterium

spp.

sobria

a

通級實(shí)驗(yàn)免疫DB11/T

—表

7 實(shí)驗(yàn)雞、實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝、實(shí)驗(yàn)鴿各等級病原微生物檢測項(xiàng)目（續(xù)）5.2.8 實(shí)驗(yàn)魚各等級病原微生物檢測表

8

的規(guī)定執(zhí)行。表8 實(shí)驗(yàn)魚病原微生物檢測項(xiàng)目表8 實(shí)驗(yàn)魚病原微生物檢測項(xiàng)目12DB11/T

—6.1 實(shí)驗(yàn)小型牛、實(shí)驗(yàn)羊、實(shí)驗(yàn)狨猴、實(shí)驗(yàn)長爪沙鼠、雪貂、實(shí)驗(yàn)貓、實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)鴿檢測程序6.1.1 實(shí)驗(yàn)小型牛、實(shí)驗(yàn)羊、實(shí)驗(yàn)狨猴、實(shí)驗(yàn)長爪沙鼠、雪貂、實(shí)驗(yàn)貓、雞、實(shí)驗(yàn)鴿檢測程序符合圖

1

的要求。6.1.2 麻醉應(yīng)根據(jù)不同動物種類、采集部位決定是否需要麻醉。需要麻醉時，應(yīng)考慮不同種類實(shí)驗(yàn)動物的耐受劑量，可采用吸入性或注射麻醉，過程中應(yīng)隨時注意實(shí)驗(yàn)動物的反應(yīng)。實(shí)施麻醉人員應(yīng)經(jīng)過相應(yīng)培訓(xùn)并具備相應(yīng)的。6.1.3 釆血以及毛發(fā)、皮屑、鼻咽拭子、子（或新鮮糞便

。6.1.4 需要時可根據(jù)期，進(jìn)一步動物組織或特定樣本檢測。編號外觀檢查麻醉采樣耳后、背部毛發(fā)、羽毛或皮屑

采血

鼻咽拭子、肛拭子（或新鮮糞便）檢測結(jié)果判定判定結(jié)論圖1

實(shí)驗(yàn)動物微生物檢測程序13DB11/T

—6.2 實(shí)驗(yàn)魚檢測程序6.2.1 實(shí)驗(yàn)魚檢測程序符合圖

2

的要求。6.2.2 實(shí)驗(yàn)魚的應(yīng)方便于檢查、采用和滿足動物福利倫理的要求。6.2.3 需要時可根據(jù)期，進(jìn)一步動物組織或特定樣本檢測。編號外觀檢查麻醉體表檢查和取材體內(nèi)微生物學(xué)檢查和取材解剖鏡和顯微鏡檢查微生物分離培養(yǎng)鑒定（必要時取水樣）結(jié)果判定判定結(jié)論圖2 實(shí)驗(yàn)魚微生物檢測程序14GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

14926.46NY/T

GB/T

GB/T

SN/T

1919GB/T

SN/T

1447NY/T

1186SN/T

1207NY/T

NY/T

NY/T

NY/T

GB/T

SN/T

2702GB/T

NY/T

GB/T

GB/T

GB/T

NY/T

GB/T

14926.46DB11/T

—7檢測方法7.1 實(shí)驗(yàn)豬和實(shí)驗(yàn)小型豬病原微生物學(xué)檢測方法實(shí)驗(yàn)豬和實(shí)驗(yàn)小型豬病原微生物學(xué)表9的規(guī)定執(zhí)行。表9 實(shí)驗(yàn)豬和實(shí)驗(yàn)小型豬病原微生物學(xué)檢測方法7.2 實(shí)驗(yàn)牛和實(shí)驗(yàn)羊病原微生物學(xué)檢測方法實(shí)驗(yàn)牛和實(shí)驗(yàn)羊病原微生物學(xué)表10的規(guī)定執(zhí)行。表10 實(shí)驗(yàn)牛和實(shí)驗(yàn)羊病原微生物學(xué)檢測方法15SN/T

3392SN/T

1087GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

SN/T

1315NY/T

GB/T

NT/T

GB/T

NY/T

GB/T

NY/T

1468NY/T

1244SN/T

1171SN/T

1171SN/T

3484GB/T

GB/T

GB/T

14926.47GB/T

14926.48GB/T

GB/T

14926.49SN/T

2552.8

aGB/14926.60

aGB/14926.23

aGB/14926.18

aGB/T

14926.62

aGB/T

14926.63

aGB/T

14926.64a

IgGDB11/T

—表

10實(shí)驗(yàn)牛和實(shí)驗(yàn)羊病原微生物學(xué)檢測方法（續(xù)）7.3 實(shí)驗(yàn)狨猴病原微生物學(xué)檢測方法實(shí)驗(yàn)病原檢測方法按照表11的規(guī)定執(zhí)行。表11 實(shí)驗(yàn)狨猴病原微生物學(xué)檢測方法16GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

14926.10GB/T

14926.11GB/T

14926.12GB/T

14926.13GB/T

14926.14GB/T

14926.15GB/T

14926.16GB/T

14926.17GB/T

14926.18GB/T

14926.19GB/T

14926.22GB/T

14926.23GB/T

14926.28

GB/T

14926.25GB/T

14926.24GB/T

GB/T

GB/T

14926.47GB/T

GB/T

14926.16GB/T

GB/T

14926.13GB/T

14926.49GB/T

DB11/T

—7.4實(shí)驗(yàn)長爪沙鼠病原微生物學(xué)檢測方法實(shí)驗(yàn)病原檢測方法按照表12的規(guī)定執(zhí)行。表12 實(shí)驗(yàn)長爪沙鼠病原微生物學(xué)檢測方法7.5實(shí)驗(yàn)雪貂病原微生物學(xué)檢測方法按照表

的規(guī)定執(zhí)行。表13 實(shí)驗(yàn)雪貂病原微生物學(xué)檢測方法17

GB/T

NY/T

GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

NY/T

SN/T

3724GB/T

14926.16GB/T

14926.15SN/T

2552.8GB/T

14926.14GB/T

14926.17SN/T

2847GB/T

14926.59GB/T

14926.57GB/T

14926.56

GB/T

GB/T

14926.19DB11/T

—表

13 （續(xù)）7.6 實(shí)驗(yàn)貓病原微生物學(xué)檢測方法實(shí)驗(yàn)貓病原微生物學(xué)檢測方法按照表14的規(guī)定執(zhí)行。表14 實(shí)驗(yàn)貓病原微生物學(xué)檢測方法7.7 實(shí)驗(yàn)雞、實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝、實(shí)驗(yàn)鴿病原微生物檢測方法實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)鴿病原檢測方法按照表15的規(guī)定執(zhí)行。18GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

GB/T

SN/T

1554SN/T

1173

GB/T

GB/T

NY/T

GB/T

GB/T

SN/T

1172NY/T

1247GB/T

GB/T

GB/T

NY/T

3072GB/T

NY/T

SN/T

2744GB/T

NY/T

SN/T

3464SN/T

4556NY/T

ZIRCZIRCZIRCGB

4789.7DB11/T

—表15實(shí)驗(yàn)雞、實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝、實(shí)驗(yàn)鴿病原微生物檢測方法7.8 實(shí)驗(yàn)魚病原微生物學(xué)檢測方法7.8.1實(shí)驗(yàn)魚細(xì)真菌檢測方法實(shí)驗(yàn)魚細(xì)菌和真菌的檢測方法按照表16的規(guī)定執(zhí)行。表16 實(shí)驗(yàn)魚細(xì)真菌檢測方法19GB/T

14926.15GB/T

14926.15

14926.16SC/T

7201.3SC/T

7201.2SC/T

7201.2SC/T

7201.2SC/T

7201.4GB/T

GB/T

ZIRCZIRCGB

SN/T

2439GB/T

ZIRC(ZIRC

Health

ServicesZebrafish

J.M.

Spitsbergen,

J.M.

K.N.

M.

Westerfield)DB11/T

—表

16 實(shí)驗(yàn)魚細(xì)真菌檢測方法（續(xù)）7.8.2 實(shí)驗(yàn)魚

4

K

的規(guī)定執(zhí)行。7.8.3 實(shí)驗(yàn)魚聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（

Chain

Reaction，PCR）檢測方法按照附錄

L

的規(guī)定執(zhí)行。8 檢測規(guī)則8.1 檢測每3個月至少應(yīng)檢測1次。8.2 抽樣8.2.1 抽樣方式按微生物和寄生蟲聯(lián)合取樣，隨機(jī)抽樣。抽樣按表17的規(guī)定執(zhí)行。表17表17 實(shí)驗(yàn)動物

1001001050015DB11/T

—表

17表

17（續(xù)）抽樣

的規(guī)定。8.2.3 抽樣數(shù)量實(shí)驗(yàn)魚抽樣數(shù)量：同一水環(huán)境實(shí)驗(yàn)魚數(shù)量少于100尾，則抽樣5尾；大于等于尾，5%比例抽取，最大抽樣量為30尾。其他抽樣數(shù)量按表18的規(guī)定執(zhí)行。表18 實(shí)驗(yàn)動物8.3送檢要求樣品和送檢單一同檢測能力的實(shí)驗(yàn)室，送檢單應(yīng)寫明檢品名稱、品系、、數(shù)量及項(xiàng)目等內(nèi)容。9 結(jié)果判定9.1 抗體檢查經(jīng)檢測，的群體免疫合格率不低于，判為合格。經(jīng)檢測，非免疫項(xiàng)目，血清抗體陰為合格。9.2 抗原和核酸檢查經(jīng)檢測，未見陽性結(jié)果判為合格。10 結(jié)論與報告21DB11/T

—10.1 結(jié)論按照檢測規(guī)則，檢測指標(biāo)均合格，依據(jù)表1～表8，判為符合相應(yīng)等級的實(shí)驗(yàn)動物。按照檢測規(guī)則，若檢測指標(biāo)有1項(xiàng)（含）以上不合格，依據(jù)表1～表8，判為不符合相應(yīng)等級的實(shí)驗(yàn)動物。10.2 報告根據(jù)出具。22DB11/T

—AA附

錄 A（規(guī)范性）貓泛白細(xì)胞減少癥病毒

檢測方法A.1 待測將樣本按照DNA提取試劑盒的操作說明提取DNA，凍存于

℃冰箱備用。A.2 對照從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取陰性的同類樣品作為陰性對照?？瞻讓φ眨涸跀U(kuò)增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。A.3 PCR根據(jù)

2

基因序列（GenBank：AF015223）設(shè)計(jì)：上游引物序列（5′′）：AGTTCAACAAGATAAAAGAC下游引物序列（5′′）：TCCTGTATCTTGATGTGCTAA.4 PCR體系及條件A.4.1 PCR體系20

μL體系10×PCR

（含）2

μL，（2.5

）1.6

μL，上下游引物（10

μM）各1

μL，Taq酶（5

U/μL）0.5

μL，模板DNA

2

μL，最后用滅菌水補(bǔ)至20

μL。A.4.2 PCR反應(yīng)條件94

℃

5

；94

℃

30

s，55

℃

30

s，72

℃

1

，35個循環(huán)；72

℃延伸10

。A.5 PCR產(chǎn)物大小301

bp。A.6 結(jié)果判定陽性對照出現(xiàn)

bp的目的片段，陰性對照無條帶，實(shí)驗(yàn)成立；待檢樣品出現(xiàn)301

bp目的時，判定貓泛白細(xì)胞減少癥病毒陽性；未出現(xiàn)301

bp目的片段時，判定貓泛白細(xì)胞減少癥病毒陰性。23DB11/T

—BB附

錄 B（規(guī)范性）貓杯狀病毒

RT-PCR

B,1 待測樣本的提取與保存將樣

提取試劑盒的操作說明提取

RNA，凍存于

℃冰箱備用。B.2 對照設(shè)立從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取陰性的同類樣品作為陰性對照。空白對照：在擴(kuò)增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。B.3 逆轉(zhuǎn)錄B.3.1 逆轉(zhuǎn)錄體系25

μL體系5×

buffer

5

μL，（2.5

）4

μL，隨機(jī)引物（

μg/mL）1

μL，AMV（U/μL）0.5

μL，模板

8

μL，最后用滅菌雙蒸水補(bǔ)至25

μL。B.3.2 件37

℃

90

，72

℃

15

，4

℃

5

，各1個循環(huán)。B.4

及探針根據(jù)衣殼蛋白序列（GenBank：AY560117）設(shè)計(jì)：上游引物序列（5′′）：AACCTGCGCTAACGTGCTT下游引物序列（5′′）：CAGTGACAATACACCCAGAAB.5

體系及條件B.5.1PCR反應(yīng)體系25

μL體系10×PCR

（含Mg）2.5

μL，（2.5

）2.5

μL，上下游引物（10

μM）各1.5

μL，Taq酶（5

U/μL）1.0

μL，模板cDNA

2

μL，最后用滅菌水補(bǔ)至

μL。B.5.2 PCR反應(yīng)條件94

℃

5

；94

℃

1

，55

℃

1

，72

℃

1

，35個循環(huán)；72

℃延伸10

。24DB11/T

—B.6

產(chǎn)物大小

bp。B.7 結(jié)果判定陽性對照出現(xiàn)

bp的目的片段，陰性對照無條帶，實(shí)驗(yàn)成立；待檢樣品出現(xiàn)926

bp目的時，判定貓杯狀病毒陽性；未出現(xiàn)

bp目的片段時，判定貓杯狀病毒陰性。25DB11/T

—CC附

錄 C（規(guī)范性）貓皰疹病毒

I

型

PCR

檢測方法C.1 待測將樣本按照DNA提取試劑盒的操作說明提取DNA，凍存于

℃冰箱備用。C.2 對照從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取陰性的同類樣品作為陰性對照。空白對照：在擴(kuò)增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。C.3 PCR根據(jù)

序列（GenBank：）設(shè)計(jì)：上游引物序列（5′′）：ATACTGTCCGCATTTACATAGA下游引物序列（5′′）：CGGTTCTTGAGCGTCCCC.4 PCR體系及條件C.4.1 PCR體系20

μL體系10×PCR

（含）2

μL，（2.5

）1.6

μL，上下游引物（10

μM）各1

μL，Taq酶（5

U/μL）0.5

μL，模板DNA

2

μL，最后用滅菌水補(bǔ)至20

μL。C.4.2 PCR反應(yīng)條件94

℃

5

；94

℃

s，

℃

30

s，

℃

1

，35個循環(huán)；72

℃延伸5

。C.5 PCR產(chǎn)物大小531

bp。C.6 結(jié)果判定陽性對照出現(xiàn)

bp的目的片段，陰性對照無條帶，實(shí)驗(yàn)成立；待檢樣品出現(xiàn)531

bp目的時，判定貓皰疹病毒I型陽性；未出現(xiàn)531

bp目的時，判定貓皰疹病毒I型陰性。26DB11/T

—附

錄 D（規(guī)范性）貓免疫缺陷病

PCR

檢測方法D.1 待測將樣

提取試劑盒的操作說明提取

RNA，凍存于

℃冰箱備用。D.2對照從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取陰性的同類樣品作為陰性對照。空白對照：在擴(kuò)增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。D.3 逆轉(zhuǎn)錄D.3.1 逆轉(zhuǎn)錄體系25

μL體系5×

buffer

5

μL，（2.5

）4

μL，隨機(jī)引物（

μg/mL）1

μL，AMV（U/μL）0.5

μL，模板

8

μL，最后用滅菌雙蒸水補(bǔ)至25

μL。D.3.2 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件37℃

，72℃

15

，4℃

5

，各1個循環(huán)。D.4 熒光及探針上游引物序列（5′′）：AGAACCTGGTGATATACCAGAGAC下游引物序列（5′′）：TTGGGTCAAGTGCTACATATTG探針（5′′）：（）TATGCCTGTGGAGGGCCTTCCT（）D.5 熒光體系及條件D.5.1 熒光體系50

μL體系包括2×Mix

25

μL，上下游引物（10

μM）各

μL，探針（

μM）0.5

μL，模板cDNA

10

μL，最后用滅菌雙蒸水補(bǔ)至50

μL。D.5.2 熒光反應(yīng)條件27DB11/T

—95℃預(yù)變性

3

；95℃

s，℃

30

s，共5個循環(huán)；

℃

30

s，64℃

1

（信號），共40個循環(huán)。D.6 結(jié)果判定陽性對照Ct值≤35，有明顯的熒光擴(kuò)增曲線，陰性對照無Ct值，并且無熒光擴(kuò)增曲線，試驗(yàn)有效；待檢樣品有熒光擴(kuò)增曲線，且Ct值≤35，判定貓免疫缺陷病毒陽性；待檢樣品無熒光擴(kuò)增曲線，或Ct值＞35，判定貓免疫缺陷病毒陰性。28DB11/T

—附

錄 E（規(guī)范性）貓傳染性腹膜炎病毒

E.1 待測將樣

提取試劑盒的操作說明提取

RNA，凍存于

℃冰箱備用。E.2 對照從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取陰性的同類樣品作為陰性對照?？瞻讓φ眨涸跀U(kuò)增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。E.3 逆轉(zhuǎn)錄E.3.1 逆轉(zhuǎn)錄體系25

μL體系5×

buffer

5

μL，（2.5

）4

μL，隨機(jī)引物（

μg/mL）1

μL，AMV（U/μL）0.5

μL，模板

8

μL，最后用滅菌雙蒸水補(bǔ)至25

μL。E.3.2 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件37

℃

90

，72

℃

15

，4

℃

5

，各1個循環(huán)。E.4 PCR及探針根據(jù)

3'UTR

序列（GenBank：NC_002306）設(shè)計(jì)：上游引物序列（5′′）：GGCAACCCGATGTTTAAAACTGG下游引物序列（5′′）：CACTAGATCCAGACGTTAGCTCE.5 PCR體系及條件E.5.1 PCR體系25

μL體系10×PCR

（含Mg）2.5

μL，（2.5

）2.5

μL，上下游引物（10

μM）各1.5

μL，Taq酶（5

U/μL）1.0

μL，模板cDNA

2

μL，最后用滅菌水補(bǔ)至

μL。E.5.2 PCR反應(yīng)條件94

℃

5

；95

℃

s，

℃

30

s，

℃

30

s，35個循環(huán)；72

℃延伸7

。29DB11/T

—E.6PCR產(chǎn)物大小223

bp。E.7 結(jié)果判定陽性對照出現(xiàn)

bp的目的片段，陰性對照無條帶，實(shí)驗(yàn)成立；待檢樣品出現(xiàn)223

bp目的時，判定貓傳染性腹膜炎病毒陽性；未出現(xiàn)

bp目的片段時，判定貓傳染性腹膜炎病毒陰性。30DB11/T

—附

錄 F（規(guī)范性）貓腸道冠狀病毒

RT-PCR

檢測方法F.1 待測將樣本按照提取試劑盒的操作說明提取RNA，凍存于

℃冰箱備用。F.2 對照從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取陰性的同類樣品作為陰性對照?？瞻讓φ眨涸跀U(kuò)增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。F.3 逆轉(zhuǎn)錄F.3.1 逆轉(zhuǎn)錄體系25

μL體系5×

buffer

5

μL，（2.5

）4

μL，隨機(jī)引物（

μg/mL）1

μL，AMV（U/μL）0.5

μL，模板

8

μL，最后用滅菌雙蒸水補(bǔ)至25

μL。F.3.2 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件37

℃

90

，72

℃

15

，4

℃

5

，各1個循環(huán)。F.4 PCR及探針根據(jù)

S

序列（GenBank：X80799）設(shè)計(jì)：上游引物序列（5′′）：TGCTATTAGTAAGTGGGGCC下游引物序列（5′′）：F.5 PCR體系及條件F.5.1 PCR體系50

μL體系包括10×PCR

（含Mg）5.0

μL，（2.5

）1.0

μL，上下游引物（50

μM）各1.0

μL，酶（4

U/μL）0.5

μL，模板cDNA1.0

μL，最后用滅菌雙蒸水50

μL。F.5.2 PCR反應(yīng)條件94

℃

5

；94

℃

s，

℃

45

s，

℃

90

s，30個循環(huán)；72

℃延伸

。31DB11/T

—F.6PCR產(chǎn)物大小366

bp。F.7 結(jié)果判定陽性對照出現(xiàn)

bp的目的片段，陰性對照無條帶，實(shí)驗(yàn)成立；待檢樣品出現(xiàn)366

bp目的時，判定貓腸道冠狀病毒陽性；未出現(xiàn)

bp目的片段時，判定貓腸道冠狀病毒陰性。32DB11/T

—附

錄 G（規(guī)范性）貓白血病病毒熒光

檢測方法G.1 待測將樣本按照提取試劑盒的操作說明提取RNA，凍存于

℃冰箱備用。G.2 對照從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取陰性的同類樣品作為陰性對照?？瞻讓φ眨涸跀U(kuò)增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。G.3 逆轉(zhuǎn)錄G.3.1 逆轉(zhuǎn)錄體系25

μL體系5×

buffer

5

μL，（2.5

）4

μL，隨機(jī)引物（

μg/mL）1

μL，AMV（U/μL）0.5

μL，模板

8

μL，最后用滅菌雙蒸水補(bǔ)至25

μL。G.3.2 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件37

℃

90

，72

℃

15

，4

℃

5

，各1個循環(huán)。G.4 熒光及探針上游引物序列（5′′）：下游引物序列（5′′）：MGB（5′′）：（）（）G.5 熒光體系及條件G.5.1 熒光體系20

μL體系2×Mix

10

μL，上下游引物（10

μM）各

μL，探針（

μM）0.2

μL，模板cDNA1

μL，最后用滅菌雙蒸水補(bǔ)至20

μL。G.5.2 熒光反應(yīng)條件50

℃

2

；95

℃預(yù)變性

；95

℃

15

s，

℃

1

（采集熒光信號），共個循環(huán)。33DB11/T

—G.6 結(jié)果判定G.7 結(jié)果判定陽性對照Ct值≤35，有明顯的熒光擴(kuò)增曲線，陰性對照無Ct值，并且無熒光擴(kuò)增曲線，試驗(yàn)有效；待檢樣品有熒光擴(kuò)增曲線，且Ct值≤35，判定貓白血病病毒陽性；待檢樣品無熒光擴(kuò)增曲線，或Ct值＞35，判定貓白血病病毒陰性。34DB11/T

—附

錄H（規(guī)范性）巴爾

H.1待測將樣本按照DNA提取試劑盒的操作說明提取DNA，凍存于

℃冰箱備用。H.2 對照從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取陰性的同類樣品作為陰性對照。空白對照：在擴(kuò)增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。H.3 熒光及探針上游引物序列（5′′）：下游引物序列（5′′）：MGB（5′′）：H.4 熒光體系及條件H.4.1 熒光體系20

μL體系2×Mix

10

μL，上下游引物（10

μM）各

μL，探針（

μM）0.2

μL，模板DNA2

μL，最后用滅菌水20

μL。H.4.2 熒光反應(yīng)條件50

℃

2

；95

℃預(yù)變性

；95

℃

15

s，

℃

1

（采集熒光信號），共個循環(huán)。H.5 結(jié)果判定H.6 結(jié)果判定陽性對照Ct值≤35，有明顯的熒光擴(kuò)增曲線，陰性對照無Ct值，并且無熒光擴(kuò)增曲線，試驗(yàn)有效；待檢樣品有熒光擴(kuò)增曲線，且Ct值≤35，判定巴爾通體陽性；待檢樣品無熒光擴(kuò)增曲線，或Ct值＞35，判定巴爾通體陰性。35DB11/T

—附

錄 I（規(guī)范性）空腸彎曲桿菌

I.1待測將樣本按照DNA提取試劑盒的操作說明提取DNA，凍存于

℃冰箱備用。I.2 對照從樣品處理開始應(yīng)設(shè)置陽性對照、陰性對照。陽性對照：取已知陽性的同類樣品作為陽性對照，也可將適量滅活病原體或質(zhì)粒添加到已知陰性樣品中作為陽性對照樣品。陰性對照：取陰性的同類樣品作為陰性對照。空白對照：在擴(kuò)增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙蒸水作為模板設(shè)置空白對照。I.3 PCR及探針根據(jù)

HIPO

基因序列（GenBank