4-實驗五--化學(xué)(huàxué)因素對微生物生長的影響第一頁，共14頁。一、實驗?zāi)康牧私饣瘜W(xué)藥劑的殺菌和消毒作用(zuòyòng)，掌握消毒劑的濃度和使用方法。二、實驗(shíyàn)原理一些化學(xué)藥劑對微生物的生長有抑制或殺死作用。因此，在實驗(shíyàn)室內(nèi)和生產(chǎn)生活中常利用某些藥劑進行殺菌或消毒。不同的藥劑或同一藥劑對不同微生物的殺菌能力不同。此外，藥劑濃度、作用時間及環(huán)境條件不同，其效果也不同。第二頁，共14頁。常用的化學(xué)藥劑有重金屬及其鹽類、有機溶劑〔醇、酚、醛等〕、鹵族(lǔzú)元素及其化合物、染料和外表活性劑等。重金屬離子——汞、銅、銀等機制(jīzhì)：與菌體蛋白質(zhì)結(jié)合使之變性某些酶蛋白的巰基相結(jié)合而使酶失活，蛋白質(zhì)沉淀鰲合作用第三頁，共14頁。有機溶劑——酚、醇、醛機制(jīzhì)：可使蛋白質(zhì)或核酸變性，也可破壞細胞膜通透性使內(nèi)含物外溢鹵族元素——碘可與蛋白質(zhì)酪氨酸殘基不可逆結(jié)合而使蛋白質(zhì)失活，氯氣與水發(fā)生反響產(chǎn)生的強氧化劑也具有殺菌作用染料在低濃度條件下可抑制細菌生長，革蘭氏陽性菌比革蘭氏陰性菌更敏感外表活性劑能降低溶液外表張力，可改變微生物細胞膜的通透性，也能使蛋白質(zhì)變性第四頁，共14頁。實驗器材菌種：大腸桿菌〔〕、枯草桿菌〔Bvacillussubtilis〕。培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基溶液(róngyè)或試劑：2.5%碘酒、5%石炭酸、75%乙醇、100%乙醇、0.005%龍膽紫、0.05%龍膽紫、％AgNO3。第五頁，共14頁。實驗步驟1、制平板：取無菌平皿4個，將已熔化(rónghuà)并冷卻至50℃左右的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基按無菌操作法倒入平皿中，水平放置待凝固。2、制備菌懸液：取無菌水試管2支，用接種環(huán)分別取大腸桿菌、枯草桿菌各1～2環(huán)接入無菌水中，充分混勻，制成菌懸液。3、接種：用微量移液器分別吸取已制好的菌懸液接種于平板上，用無菌玻璃涂布棒涂均勻。第六頁，共14頁。4、加藥劑：將已涂布好的平板底皿劃分為4～6等份，每一等份注明一種消毒劑的名稱。用無菌打孔器打孔，注入10微升抑菌劑。用微量移液器參加等量(děnɡliànɡ)消毒劑。平板中間小孔加無菌水為作對照。5、培養(yǎng)：將平皿倒置放入37℃培養(yǎng)箱中，24h后取出觀察抑〔殺〕菌圈的大小。第七頁，共14頁。第八頁，共14頁。第九頁，共14頁。實驗(shíyàn)結(jié)果和實驗(shíyàn)報告測量、記錄抑菌圈直徑大小(dàxiǎo)。比較分析不同消毒劑的殺菌能力，三種菌對同種消毒劑的耐受力完成思考題1、2。第十頁，共14頁。消毒劑抑（殺）菌圈直徑（mm）消毒劑抑（殺）菌圈直徑（mm）2.5%碘酒

0.25%新潔爾滅

5%石炭酸

0.005%龍膽紫

75%乙醇

0.05%龍膽紫

100%乙醇

0.1％AgNO3

測量(cèliáng)、記錄抑菌圈直徑大小。比較分析不同消毒劑的殺菌能力(nénglì)，三種菌對同種消毒劑的耐受力完成思考題1、2。實驗(shíyàn)結(jié)果和實驗(shíyàn)報告第十一頁，共14頁。預(yù)備(yùbèi)下周實驗每組包扎1ml、10ml移液管各1支，100ml量筒(liángtǒng)一個，滅菌每組配制三倍乳糖膽鹽蛋白胨培養(yǎng)基200ml，分裝2個50ml錐形瓶，10支5ml試管〔加倒置的