注意：標紅文字無需顯示，需要顯示的文字會保留在圖片中或幻燈片中第六章第一部分沉淀試驗大家好！本節(jié)課我要跟大家一起學習的內(nèi)容是沉淀試驗。在前面的授課當中，我們學習了凝集試驗，下面讓我們一起來學習一下什么是沉淀試驗。(在介紹此標紅部分內(nèi)容時插入下面的文字和圖片)沉淀試驗(precipitation)是可溶性抗原與相應抗體在適當電解質(zhì)存在的條件下發(fā)生特異性結(jié)合出現(xiàn)的沉淀現(xiàn)象。沉淀反應(precipitationreaction)是指可溶性抗原與相應抗體在適當條件下發(fā)生特異性結(jié)合而出現(xiàn)的沉淀現(xiàn)象,其特性與經(jīng)典的抗原抗體反應相同?？扇苄訟g+相應Ab2L沉淀早在1897年，Kraus發(fā)現(xiàn)霍亂弧菌、傷寒桿菌、鼠疫桿菌的培養(yǎng)液能與相應抗血清產(chǎn)生沉淀反應。那么，沉淀試驗一般是怎么來做的呢？下面我們以測定抗體效價為例來具體的看看沉淀試驗的操作流程：(在介紹此標紅部分內(nèi)容時插入下面的動畫)首先準備7支試管，在每管中均加入1ml生理鹽水，再在第一支試管中1ml抗體，混勻后，吸出1ml加入到第2支試管中，進行倍比稀釋，直至第6支試管，最后一支試管作為陰性對照。接著，在每支試管中各加入1ml抗原，混勻，37c孵育一定時間，觀察有無絮狀沉淀析出。有沉淀的管，即為陽性管。各管抗原倍比稀釋加入抗血清各管抗原倍比稀釋加入抗血清IN1:41：?1:101:321:()41:128試管內(nèi)絮狀沉淀試驗各管抗體量不變振搖混勻、370試管內(nèi)絮狀沉淀試驗各管抗體量不變振搖混勻、370c典育■沉淀量不同下面我們來對比著凝集試驗看一下沉淀試驗的特點：凝集試驗檢測的是顆粒性抗原或可溶性抗原，沉淀試驗檢測的一定是可溶性抗原，比如蛋白質(zhì)、多糖等；凝集試驗和沉淀試驗的反應過程均包括兩個階段：第一個階段是抗原抗體特異性結(jié)合，在幾秒鐘到幾十秒鐘內(nèi)完成，出現(xiàn)可溶性小分子復合物，該階段的特點是快速、不可見；第二個階段是肉眼可見的階段，約需幾十分鐘到數(shù)小時才能完成，可觀察到免疫復合物的形成，該階段的特點是慢、可見，比如可見到沉淀線。另外，用于免疫沉淀試驗的抗體優(yōu)選多克隆抗體，因為多克隆抗體可與抗原表面多個不同表位結(jié)合，很容易交聯(lián)成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)而發(fā)生沉淀；而單克隆抗體只與抗原的一種表位結(jié)合，不易形成交聯(lián)，故一般不適用于免疫沉淀試驗。但是，如果抗原表面含有兩個以上相同的表位，僅僅針對該表位的單克隆抗體也可用于免疫沉淀試驗。（在介紹此標紅部分內(nèi)容時插入下面的文字）根據(jù)反應介質(zhì)和檢測方法的不同，免疫沉淀試驗可分為兩類：液相免疫沉淀試驗和凝膠內(nèi)免疫沉淀試驗；其中，液相免疫沉淀試驗主要包括絮狀免疫沉淀試驗、透射免疫比濁試驗和散射免疫比濁試驗；凝膠內(nèi)免疫沉淀試驗包括免疫擴散試驗及與電泳相結(jié)合的免疫電泳技術(shù)。/Az液相內(nèi)-免疫沉淀一試驗/Az液相內(nèi)-免疫沉淀一試驗絮狀免疫沉淀試驗透射免疫比濁試驗散射免疫比濁試驗免疫擴散試驗L凝膠內(nèi)一免疫電泳技術(shù)免疫沉淀試驗有如此多的種類，那么它在臨床當中究竟有何應用價值？經(jīng)典的免疫沉淀試驗如絮狀免疫沉淀試驗，單向免疫擴散試驗，雙向免疫擴散試驗等均可用于抗原抗體性質(zhì)、效價、純度及相對分子質(zhì)量和濃度的分析，但因為這些方法有很多缺點無法克服，比如說操作非常的繁瑣、靈敏度很低、精密度比較差、反應時間比較長、無法實現(xiàn)自動化，所以在現(xiàn)在的臨床檢測中，這些方法已經(jīng)不再使用或者很少使用。隨著現(xiàn)代科學技術(shù)的不斷發(fā)展，自動化免疫濁度分析儀的出現(xiàn)，免疫濁度分析在臨床檢測當中得到廣泛應用。目前，免疫濁度法主要用于蛋白質(zhì)的測定，比如說血液中的免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、k鏈、入鏈、補體C3、C4、血漿蛋白、C反應蛋白、類風濕因子以及尿液或者腦脊液當中的微量蛋白的測定等。隨著自動化免疫電泳儀的推出，免疫電泳技術(shù)在臨床上的應用也變得非常的廣泛。目前，對流免疫電泳和火箭免疫電泳技術(shù)因為存在電滲作用，已經(jīng)不再在臨床上推薦使用。免疫電泳可以用于分析純化抗原和抗體的成分，以及正?；蛘呤钱惓５拿庖咔虻鞍椎淖R別與鑒定，免疫電泳擴散時間長，影響因素多，結(jié)果一般比較難分析。免疫固定電泳因為分辨力很強，敏感度很高，結(jié)果易于分析，已有市售的半自動化電泳儀，可以進行血清和尿液M蛋白、免疫球蛋白輕鏈的檢測，并已列入臨床實驗室的常規(guī)檢測工作。傳統(tǒng)的透射免疫比濁試驗存在靈敏度較低的問題，直至開發(fā)出了膠乳增強技術(shù)，大大提高了檢測的靈敏度，這種方法在全自動化生化分析儀中也得到了廣泛應用，目前用生化分析儀檢測免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、補體C3、C4、抗鏈球菌溶血素0、銅藍蛋白、C-反應蛋白、各種載脂蛋白、脂蛋白A、尿微量蛋白、白蛋白等均是利用膠乳增強的透射免疫比濁實驗原理進行的。（在介紹此標紅部分內(nèi)容時插入下面的文字）按照所用的試劑分類有單試劑單波長法、單試劑雙波長法、雙試劑單波長法、雙試劑雙波長法。四種方法的區(qū)別是加試劑的方式和檢測波長不一樣。單試劑是指只加一次試劑，而雙試劑是指試劑分開配制后再分別加入。單波長是指只用一個波長檢測，雙波長是指應用兩個波長檢測。.單波長 「單試劑雙波長 雙試劑其中，膠乳增強的透射免疫比濁應用于自動生化分析儀時，首選雙試劑雙波長法。一方面，有利于保存抗體的效價；另一方面有利于提高結(jié)果的準確性。本次課我們主要學習了沉淀試驗的定義