陳家锃博士/主任信得科技豬病檢測中心2015年4月14日豬圓環(huán)病防控探討探討內(nèi)容一二三四圓環(huán)病及其危害圓環(huán)防控探討試驗案例分享信得圓環(huán)防控方案一、圓環(huán)病及其危害1、圓環(huán)病毒引起的疾??？2、圓環(huán)病毒的間接危害？1、圓環(huán)病毒引起的疾病仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征豬皮炎腎病綜合征豬呼吸系統(tǒng)混合疾病母豬繁殖障礙癥仔豬先天性震顫壞死性淋巴結(jié)炎肉芽腫性腸炎及滲出性表皮炎等-------圓環(huán)病毒引起的疾病進(jìn)行性消瘦，發(fā)育遲緩皮膚出現(xiàn)紅紫色斑點呼吸道綜合征繁殖障礙---流產(chǎn)、母豬返情率高仔豬先天性震顫腹股溝淋巴結(jié)腫大，腎臟水腫間質(zhì)性肺炎和黏液膿性支氣管炎正常對照圓環(huán)病毒感染2、圓環(huán)病毒間接危害---免疫抑制影響抗原識別功能------感染抗原遞呈細(xì)胞（樹突狀細(xì)胞及巨噬細(xì)胞）降低先天性免疫------炎癥反應(yīng)能力受損和細(xì)胞因子合成下降；特異性免疫損傷-------導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞大量減少

感染抗原遞呈細(xì)胞，降低免疫識別干擾其他疫苗的免疫效果降低豬藍(lán)耳弱毒苗的效果

------TanjaOprissnigetal.JournalofVeterinaryDiagnosticInvestigation2007降低豬瘟苗的免疫效果

------司興奎,郭鑫,楊漢春.豬圓環(huán)病毒2型感染對豬瘟疫苗體液免疫應(yīng)答的影響[J].中國獸醫(yī)學(xué)報,2009,29(7):826-829.影響偽狂犬免疫效果……

-----司興奎,張濟(jì)培,陳建紅等.豬圓環(huán)病毒2型感染對偽狂犬疫苗免疫應(yīng)答的影響[C].//中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會學(xué)術(shù)研討會

.2009:61-64.與藍(lán)耳病共感染加重免疫抑制OpriessnigT,MengX,HalburPG,etal.Porcinecircovirustype2associateddisease:updateoncurrentterminology,clinicalmanifestations,pathogenesis,diagnosis,andinterventionstrategies.[J].JournalofVeterinaryDiagnosticInvestigation,2007,19(6):591-615.豬瘟弱毒疫苗免疫前或免疫后感染圓環(huán)病毒2型會影響機(jī)體的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答水平，導(dǎo)致外周血淋巴細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的表達(dá)嚴(yán)重抑制和紊亂干擾豬瘟疫苗的免疫應(yīng)答PRV疫苗免疫圓環(huán)病毒2型實驗感染仔豬的偽狂犬疫苗抗體產(chǎn)生出現(xiàn)延遲，表明圓環(huán)病毒2型可抑制偽狂犬疫苗誘導(dǎo)的體液免疫反應(yīng)抑制偽狂犬疫苗的體液應(yīng)答二、圓環(huán)防控探討1、十年來圓環(huán)流行的特點？2、當(dāng)前防控中存在的問題？3、問題出現(xiàn)的根本性原因？1、十年來圓環(huán)的流行特點（1）2001-2004年以PCV2a為主，2004年以后以PCV2b為主；----袁世山2007----童光志20121、十年來圓環(huán)的流行特點（2）混合感染增加，多與藍(lán)耳及支原體混感加重呼吸道癥狀；----美國富道李祥建2009----上海獸醫(yī)研究所袁世山（3）規(guī)?；R床發(fā)病率減少，陽性豬場增多，大多數(shù)為圓環(huán)免疫場；----童光志20121、十年來圓環(huán)的流行特點豬病檢測中心數(shù)據(jù)2、當(dāng)前防控中存在的問題思考問題：為什么圓環(huán)在豬場中久防不住？2、當(dāng)前防控中存在的問題1、圓環(huán)病毒自身的原因2、體液免疫防控的缺陷1、病毒的原因---耐性強(qiáng)抵抗力較強(qiáng)：耐高溫，耐酸堿；對消毒劑抵抗力強(qiáng)；在豬糞中存活6個月仍具有感染性----豬病學(xué)第十版消毒劑對圓環(huán)效果較差耐酸堿試驗pH3.0pH5.0pH7.0pH9.0pH11.0毒價測定104.3105.0105.5104.7103.0有機(jī)溶劑乙醚處理甲醛處理氯仿處理未處理毒價測定104.5100.0104.3105.5耐熱性試驗-20℃4℃20℃37℃56℃70℃處理時間7d7d7d7d30min30min毒價測定105.5104.7104.5104.3104.7102.7圓環(huán)病毒耐酸堿、耐高溫及有機(jī)溶劑1、病毒的原因---繁殖力強(qiáng)細(xì)胞嗜性多樣：免疫系統(tǒng)------脾臟、淋巴組織呼吸系統(tǒng)------氣管上皮、肺粘膜消化系統(tǒng)------小腸絨毛上皮細(xì)胞繁殖力強(qiáng)+耐性強(qiáng)----圓環(huán)再感染的機(jī)率增大2、體液免疫防控缺陷世界公認(rèn)疫苗是控制圓環(huán)病毒病的有效方法之一；口鼻途徑是圓環(huán)傳播和感染的主要途徑；-----《豬病學(xué)》第十版P419豬圓環(huán)病毒疫苗基因工程疫苗全病毒滅活疫苗嵌合病毒滅活疫苗亞單位疫苗2、防控手段問題市售的疫苗---均是注射用滅活苗公司抗原成分疫苗類型推薦次數(shù)梅里亞滅活PCV2a全病毒滅活苗母豬1胎2次勃林格/英維特/先靈葆雅PCV2a

Cap蛋白（桿狀病毒）亞單位疫苗（需滅活）1次富道/輝瑞滅活嵌合病毒（PCV2a）嵌合病毒2次上海海利/維科滅活PCV2a（LG株）全病毒滅活苗1次或2次南農(nóng)高科/普萊柯滅活PCV2b（SH株）全病毒滅活苗2次瑞普滅活PCV2b（ZJ/C)全病毒滅活苗1次（可加強(qiáng)免疫一次）科前滅活PCV2b（WH)全病毒滅活苗2次大北農(nóng)/天邦滅活PCV2b（DBN-SX07）全病毒滅活苗2次主要傳播途徑---自鼻液、糞便排出病毒；主要感染途徑---經(jīng)口腔、呼吸道黏膜途徑感染；圓環(huán)病毒先在粘膜系統(tǒng)中繁殖，以此為跳板，進(jìn)入血液循環(huán)，感染其他臟器；

2、體液免疫防控缺陷體液免疫防控圓環(huán)的理論基礎(chǔ)產(chǎn)生中和抗體進(jìn)入血液循環(huán)，阻止病毒經(jīng)血液循環(huán)感染臟器；不能進(jìn)入黏膜系統(tǒng)清除病毒；豬場圓環(huán)病毒循環(huán)感染滅活苗免疫后病毒仍能在黏膜中復(fù)制糞便和口鼻傳播糞便中病毒不易清除，感染新生未免疫仔豬體液免疫不能切斷傳播源，再感染機(jī)率大（1）體液免疫起效遲緩，存在空窗期；（2）難以切斷病毒通過口鼻途徑傳播；切斷病毒傳播必需黏膜免疫機(jī)體50%以上的淋巴組織位于粘膜系統(tǒng)包括消化道、呼吸道、泌尿生殖道黏膜免疫只有口服或滴鼻才能起作用起效快，3天產(chǎn)生抗體，7天建立保護(hù)SIgA是主要的保護(hù)性抗體，SIgA可以進(jìn)入黏膜循環(huán)；四、信得“一針一服”防控圓環(huán)方案根據(jù)圓環(huán)病毒的傳播途徑，提出雙重防護(hù)方案：粘膜免疫：口服表達(dá)CAP蛋白基因工程菌，在呼吸道、消化道產(chǎn)生SIgA,有效抵御圓環(huán)病毒感染;體液免疫：通過注射信圓寧，提高循環(huán)抗體滴度及整齊度，降低血液中圓環(huán)病毒載量通過雙重防護(hù)，切斷病毒傳播途徑，降低豬場循環(huán)感染壓力-------信得方案分析重組乳酸菌圓環(huán)病毒疫苗：益生菌為載體，通過胃腸酸性環(huán)境；密碼子優(yōu)化Cap蛋白；激發(fā)黏膜免疫系統(tǒng)；圓清---表達(dá)CAP蛋白的乳酸工程菌圓清技術(shù)優(yōu)勢無應(yīng)激，應(yīng)答快，封閉圓環(huán)病毒主要傳播途徑注重圓環(huán)的粘膜防護(hù)，口服使用，可拌料；食品級乳酸菌，安全性高，無散毒風(fēng)險天然益生菌，調(diào)節(jié)腸道，減少便秘，促進(jìn)生長圓清田間試驗組別抗體陽性率ELISA抗體滴度病毒血癥陽性率口服圓環(huán)組組100%1.136.67%對照組100%1.4758.2%注：1、豬場為圓環(huán)嚴(yán)重感染場，存在明顯的圓環(huán)感染；2、圓清組增重顯著；結(jié)論：1、對于圓環(huán)陽性場在免疫過程中，抗體陽性率并不具有統(tǒng)計意義；2、試驗結(jié)果表明，圓清陽性豬場使用時能顯著降低病毒血癥，提高仔豬的生長率；

圓清免疫攻毒試驗分組數(shù)量免疫程序攻毒評價方法第一組5頭14日齡注射滅活苗，同時口服圓清50億活菌，28日齡加強(qiáng)一次42日齡采血，并通過滴鼻和飼喂兩種方式攻毒；攻毒劑量口服2mL，滴鼻1.5mL病毒液1、攻毒后連續(xù)10d觀察，剖檢；2、檢測抗體尤其是中和抗體；3、采集各臟器組織通過PCR檢測臟器組織的帶毒情況；第二組5頭空白對照第三組5頭14日齡口服圓清50億活菌，28日齡加強(qiáng)一次第四組5頭14日齡注射滅活苗28日齡加強(qiáng)一次免疫后抗體水平免疫后抗體水平分組免疫抗體陽轉(zhuǎn)率ELISA抗體滴度IPMA滴度第一組圓環(huán)滅活＋口服圓清5/51.48524第二組空白對照1/50.5960第三組圓環(huán)口服疫苗5/50.85326第四組圓環(huán)滅活疫苗5/50.96342統(tǒng)計數(shù)據(jù)IPMA結(jié)果(稀釋200倍)一針一服二組對照圓清滅活苗陽性對照陰性對照攻毒后剖檢結(jié)果第一組（滅活加口服）各臟器組織病原檢測第二組（對照組）各臟器組織病原檢測第三組各臟器組織病原檢測第四組（滅活苗）各臟器組織病原檢測組別器官組織腸腎肺肝脾腸系膜淋巴結(jié)腹股溝淋巴結(jié)頜下淋巴結(jié)扁桃體心血清一組（滅活加口服）0/50/50/50/50/50/51/5（+）

1/5（+）

1/5（+）

0/50/5二組(空白對照）3/5（+）

3/5（+）

3/5（+）

4/55/5（++）5/5（++）5/5（++）5/5（++）5/5（+++）2/5（+）4/5（+）三組（口服）0/50/50/50/50/50/51/5（+）2/5（+）2/5（++）0/50/5四組（滅活）1/5（+）1/5（+）1/5（+）1/5（+）1/5（+）2/5（+）2/5（+）1/5（+）2/5（+）1/5（+）1/5（+）判定標(biāo)準(zhǔn)（+）

判定為圓環(huán)弱陽性；（++）判定為圓環(huán)陽性；（+++）判定為圓環(huán)強(qiáng)陽性；統(tǒng)計數(shù)據(jù)熒光定量PCR檢測各臟器中的病毒載量組別器官組織腸腎肺肝脾腸系膜淋巴結(jié)腹股溝淋巴結(jié)頜下淋巴結(jié)扁桃體心血清一組（滅活加口服）101.5<101101.7<101<101102.2102.1102.8102.9<101101.1二組(空白對照）105.6104.0104.9103.8104.1105.8105.9105.1105.5103.8104.9三組（口服）101.8<101102<101<101102.1102.4102.8102.9101.1101.2四組（滅活）103.9102.1104.5103102.4104.2104.3103.8104.1101.6103.0注：病毒載量單位copies/mg分組免疫增重（相對于對照組）第一組圓環(huán)滅活＋口服圓清1.23kg第二組空白對照0kg第三組圓環(huán)口服疫苗1.19kg第四組圓環(huán)滅活疫苗0.56kg增重效果單次口服試驗分組采血流程免疫程序采血流程檢測口服組14日齡，免疫前前腔靜脈采血分離血清14日齡口服圓清45日齡時，前腔靜脈采血分離得到血清采用圓環(huán)抗體檢測試劑盒檢測圓環(huán)抗體空白組14日齡，免疫前前腔靜脈采血分離血清未免疫45日齡時，前腔靜脈采血分離得到血清采用圓環(huán)抗體檢測試劑盒檢測圓環(huán)抗體分組免疫前（14日齡）免疫后（45日齡）抗體滴度平均值抗體陽性數(shù)陽性率抗體滴度平均值抗體陽性數(shù)陽性率口服組1.3775/5100%0.46144/580%空白組1.43225/5100%0.26480/50初步結(jié)論：口服組檢測出陽性，說明口服圓環(huán)能夠促使機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，獲得保護(hù)性的抗體，但是產(chǎn)生的抗體水平普遍偏低，比兩次口服后的效果差；2、信圓寧與競品的對比試驗實驗分組免疫疫苗免疫程序第一組諾倍威圓環(huán)14日齡免疫2mL第二組成都天邦圓環(huán)14日齡免疫1mL，28日齡免疫1mL第三組海利圓環(huán)14日齡免疫1mL第四組信得信圓寧14日齡免疫1mL，28日齡免疫1mL注：1、二免后14天采血；2、所選場為