寶日醫(yī)生物技術(shù)（北京）有限公司Clontech

慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹5/15/2023慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹背景簡(jiǎn)介

病毒載體基因傳遞

慢病毒載體容易轉(zhuǎn)染物理方法非病毒載體Clontech

慢病毒相關(guān)產(chǎn)品可以轉(zhuǎn)染非分裂細(xì)胞實(shí)現(xiàn)持久有效表達(dá)

……

逆轉(zhuǎn)錄病毒載體腺病毒載體

……5/15/20232慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹內(nèi)容介紹1

提高慢病毒滴度的策略2提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的方法3

Lenti-X慢病毒包裝系統(tǒng)

15/15/20233慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹Lenti-X慢病毒包裝系統(tǒng)5/15/20234慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹背景簡(jiǎn)介病毒包裝流程示意圖5/15/20235慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹第四代包裝系統(tǒng)—Lenti-X?HTXLenti-XHTX

將Gag-Pro和RT-IN分離，降低產(chǎn)生具有復(fù)制能力病毒的幾率，大大提高生物安全性。創(chuàng)新點(diǎn)I5/15/20236慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹第四代包裝系統(tǒng)—Lenti-X?HTXLenti-XHTX

引入Tet-Off誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)，大大提高病毒滴度！創(chuàng)新點(diǎn)II5/15/20237慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹Lenti-X包裝系統(tǒng)通過流式細(xì)胞儀測(cè)定：Lenti-X包裝系統(tǒng)獲得的病毒滴度高

于108IFU/ml；只需10μl病毒上清即可轉(zhuǎn)導(dǎo)大部

分HeLa細(xì)胞。Lenti-XLenti-X5/15/20238慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹Clontech慢病毒系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)5/15/20239慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹慢病毒載體的種類cDNA載體pLVX-PuroRNAi載體pLVX-shRNA1pLVX-shRNA2ProteoTuner載體pLVX-PTunerpLVX-PtunerGreen誘導(dǎo)表達(dá)載體pLVX-Tet-OnAdvancedpLVX-Tet-OffAdvancedpLVX-Tight-Puro5/15/202310慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹慢病毒載體的種類pLVX-EF1α-IRES-PuropLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1/mCherrypLVX-EF1α-AcGFP1-N1&C1EF1α啟動(dòng)子載體熒光標(biāo)簽載體pLVX-DsRed-Monomer-C1&N1pLVX-AcGFP1-N1&C1雙表達(dá)載體pLVX-DsRed-Monomer-C1&N1pLVX-IRES-ZsGreen15/15/202311慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹慢病毒相關(guān)系統(tǒng)1、慢病毒包裝系統(tǒng)高效，可獲得的病毒滴度高達(dá)5X108IFU/ml具有兩種假型病毒：泛嗜性（VSV-G）和單嗜性（ECO）Lenti-XHTXPackagingSystem(631247/49)Lenti-XHTXEcotropicPackagingSystem(631251)2、慢病毒cDNA表達(dá)系統(tǒng)高效基因傳遞系統(tǒng)，可用于幾乎所有哺乳動(dòng)物細(xì)胞Lenti-XExpressionSystem(632164)Lenti-XBicistronicExpressionSystem(Neo/Hyg/Puro,632181/2/3)3、慢病毒RNAi表達(dá)系統(tǒng)可以獲得高效率的RNAi，可用于幾乎所有哺乳動(dòng)物細(xì)胞Lenti-X

shRNAExpressionSystem(632177)5/15/202312慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹4、慢病毒誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)可以在幾乎所有哺乳動(dòng)物細(xì)胞中精確地誘導(dǎo)基因表達(dá)Lenti-XTet-OnAdvancedInducibleExpressionSystem(632162)Lenti-XTet-OffAdvancedInducibleExpressionSystem(632163)5、慢病毒報(bào)告系統(tǒng)利用熒光或化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法研究啟動(dòng)子活性可用于多種類型細(xì)胞Lenti-XDDCyan/Green/Red

ReporterSystem(631748/51/53)Lenti-XReady-To-GlowSecretedLuciferaseReporterSystem(631746)慢病毒相關(guān)系統(tǒng)5/15/202313慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹提高慢病毒滴度的策略5/15/202314慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹影響慢病毒滴度的因素轉(zhuǎn)染效率轉(zhuǎn)染試劑的類型

轉(zhuǎn)染的DNA量

轉(zhuǎn)染的DNA質(zhì)量

細(xì)胞種類細(xì)胞密度

細(xì)胞狀態(tài)包裝細(xì)胞

測(cè)定滴度時(shí)細(xì)胞

的選擇

測(cè)定方法的選擇測(cè)定滴度5/15/202315慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹Clontech提高慢病毒滴度的策略策略使用的病毒載體中包含改善載體性能和

提高病毒滴度的WPRE、RRE和

cPPT/CTS序列——提供多種病毒載體包裝組分中含有經(jīng)過比例優(yōu)化的5種非病

毒載體——引入Tet-Off誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)配以Tet系統(tǒng)專用的胎牛血清（FBS）使用高品質(zhì)的293T包裝細(xì)胞系——

Lenti-X?293TCellLine使用創(chuàng)新型的轉(zhuǎn)染試劑——Xfect?5/15/202316慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹高品質(zhì)包裝細(xì)胞系—Lenti-X?293TTimeoftransfectionHarvestTime5/15/202317慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹Lenti-X293TVS

293FTClontech的293T包裝細(xì)胞獲得的病毒滴度是293FT的2.6倍

！5/15/202318慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹創(chuàng)新型轉(zhuǎn)染試劑Xfect(631317/8)哺乳動(dòng)物細(xì)胞用創(chuàng)新型轉(zhuǎn)染試劑——Xfect應(yīng)用的細(xì)胞類型廣泛、轉(zhuǎn)染效率高！由可生物降解的、低細(xì)胞毒性的納米顆粒制備而成。操作流程簡(jiǎn)便、兼容血清。5/15/202319慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹創(chuàng)新型轉(zhuǎn)染試劑Xfect(631317/8)高效的Xfect低毒性的Xfect實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證：Xfect轉(zhuǎn)染293T包裝細(xì)胞的效率高達(dá)97%！5/15/202320慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的方法5/15/202321慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹慢病毒濃縮試劑盒Lenti-X?Concentrator(CatNo.631231&631232)操作簡(jiǎn)便，無需超速離心可以純化大體積病毒樣品病毒滴度提高100倍，回收率高達(dá)90%5/15/202322慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹快速滴度測(cè)定Lenti-X?qRT-PCRTitrationKit(CatNo.631235)

基于HIV-1的qRT-PCR法的滴度測(cè)定試劑盒

1天內(nèi)即可完成收獲病毒、測(cè)定滴度和感染靶細(xì)胞

可以獲得精確的病毒滴度，為獲得穩(wěn)定的感染效果奠定基礎(chǔ)5/15/202323慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹快速滴度測(cè)定LentiTM-XGoStixTM(CatNo.631243,631244&631241)陽性結(jié)果：病毒滴度>5x105IFU/ml

30秒內(nèi)即可定性地判斷病毒滴度

可以確定收獲病毒的最佳時(shí)機(jī)操作簡(jiǎn)便5/15/202324慢病毒相關(guān)技術(shù)介紹快速高效轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)產(chǎn)品Lenti-X?Accelerator(CatNo.631256,631257&631254)基于磁珠技術(shù)適用于包括干細(xì)胞在內(nèi)的敏感細(xì)胞類型

操作簡(jiǎn)單快速，只需25min即可完成高效轉(zhuǎn)導(dǎo)NEW!5/15/202325慢病毒