貨號：MS2606 規(guī)格：100管/48樣海藻糖酶（Trehalase,THL）試劑盒說明書微量法正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：THL（EC3.2.1.28）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中。海藻糖酶主要功能在于生物體分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供應(yīng)。測定原理：采用3,5-二硝基水楊酸法測定THL催化海藻糖產(chǎn)生的還原糖的含量。還原糖與3,5一二硝基水楊酸共熱生成棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量和反應(yīng)液的顏色深度成正比，由此判斷THL活性的高低。自備實驗用品及儀器：可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制：提取液：液體100mLX1瓶，4°C保存；試劑一：液體7mLX1瓶,4C保存；試劑二：粉劑X1支，4C保存，用時加入1mL試劑一，充分溶解待用；用不完的試劑4C保存；試劑三：液體10mLX1瓶，4C保存；試劑四：液體10mLX1瓶，常溫避光保存；樣品測定的準備：1、 細菌或細胞的處理：收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20%或200W，超聲3S，間隔10S，重復(fù)30次）；8000g，4C離心10min，取上清，置冰上待測。2、 組織的處理：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），冰浴中勻漿。8000g，4C離心10min，取上清，置冰上待測。3、 血清（漿）的處理：按照血清（漿）體積（mL）:提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議取0.1mL血清（漿）加入1mL提取液），冰浴中勻漿。8000g，4C離心10min，取上清，置冰上待測。測定步驟：1、 分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至550nm，蒸餾水調(diào)零。2、 調(diào)節(jié)水浴鍋至95度。3、 加樣表（在EP管中依次加入下列試劑）：試劑名稱（mL）對照管測定管樣本4040試劑一7050物)或25C(其它物種)水浴，準確反應(yīng)10min試劑三9595試劑四9595試劑二20試劑二207°C(哺乳動混勻，95C水浴5min(蓋緊，以防止水分散失)，冷卻后，取200pL至微量石英比色皿或96孔板中分別測定550nm處測定管和對照管吸光值。計算△A=A測定管-A對照管。每個測定管需設(shè)一個對照管。THL活力計算：用微量石英比色皿測定的計算公式如下1、 標準條件下測定回歸方程為y=1.311x-0.6264；x為標準品濃度(mg/mL)，y為吸光值。2、 按照蛋白濃度計算單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生川g葡萄糖定義為一個酶活力單位。THL活力(pg/min/mgprot)=[1000X(△A+0.6264)：1.311XV1]：(V1XCpr)：T=76X(△A+0.6264):Cpr。3、 按樣本鮮重計算單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1pg葡萄糖定義為一個酶活力單位。THL活力(pg/min/g鮮重)=[1000X(△A+0.6264)-F1.311XV1]^(WXV1：V2)-FT=76X(AA+0.6264)：W。4、 按細菌或細胞密度計算單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1pg葡萄糖定義為一個酶活力單位。THL活力(pg/min/104cell)=[1000X(△A+0.6264)：1.311XV1]：(500XV1：V2)-FT=0.152X(AA+0.6264)5、 按血清(漿)體積計算單位的定義：每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1pg葡萄糖定義為一個酶活力單位。THL活力(pg/min/mL)=[1000X(△A+0.6264)：1.311XV1]：(V3XV1：V2)-FT=760X(AA+0.6264)。1000：1mg/mL=1000Pg/mL；V1：加入樣本體積：0.04mL；V2：加入提取液體積，1mL；V3：加入血清(漿)體積，0.1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬；T：反應(yīng)時間，10min；用96孔板測定的計算公式如下1、 標準條件下測定回歸方程為y=0.6555x-0.6264；x為標準品濃度(mg/mL)，y為吸光值。2、 按照蛋白濃度計算單位的定義：每mg組織蛋白在每分鐘催化產(chǎn)生1pg葡萄糖定義為一個酶活力單位。THL 活 力 (pg/min/mgprot)=[1000X(△A+0.6264)-F0.6555XV1]:(V1XCpr)-FT=152X(AA+0.6264):Cpr。3、 按樣本鮮重計算單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1pg葡萄糖定義為一個酶活力單位。THL活力(pg/min/g鮮重)=[1000X(△A+0.6264)：0.6555XV1]：(WXV1：V2):T=152X(AA+0.6264)：W。4、 按細菌或細胞密度計算單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生川g葡萄糖定義為一個酶活力單位。THL活力(^g/min/104cell)=[1OOOX(△A+0.6264)-F0.6555XV1]^(500XV1^V2):T=0.304X(AA+0.6264)5、按血清(漿)體積計算單位的定義：每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生川g葡萄糖定義為一個酶活力單位。THL活力⑴g/min/mL)=[1000X(△A+0.6264)：0.6555XV1]：(V3XV1：V2)：T=1520X(AA+0.6264)。1000：1m