一.操作準備二.儀器組成三.操作過程四.注意事項目錄By孫毅目前一頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點1.1流動相的配制一.操作準備By孫毅用高純度的試劑配制流動相，必要時照紫外分光光度法進行溶劑檢查，應(yīng)符合要求；水為新鮮制備的高純水，可用超級純水器制得或用重蒸餾水。對規(guī)定pH值的流動相，應(yīng)使用精密pH計進行調(diào)節(jié)。配制好的流動相應(yīng)通過0.45μm適宜的濾膜濾過，用前脫氣。應(yīng)配制足量的流動相及時待用。目前二頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點一.操作準備1.2樣品溶液的配制樣品用規(guī)定溶劑配制成供試溶液。供試溶液在注入色譜儀前，一般應(yīng)經(jīng)0.45μm或適宜的濾膜濾過。必要時，在配制供試溶液前，樣品需經(jīng)提取凈化，以免對色譜系統(tǒng)產(chǎn)生污染。

By孫毅目前三頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點一.操作準備1.3檢查儀器狀態(tài)檢查色譜柱是否適用于本次試驗，色譜柱進出口位置是否與流動相的流向一致，原保存溶劑與現(xiàn)用流動相能否互溶，流動相的pH值與該色譜柱是否相適應(yīng)，儀器是否完好，儀器的各開關(guān)位置是否處于關(guān)斷的位置。By孫毅目前四頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點LC-15C液相色譜泵、SPD-15C紫外-可見檢測器、LCsolution

15c色譜工作站。

儀器組成二.儀器組成By孫毅目前五頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點3.1接通電源三.操作過程將各儀器電源插頭插入插座內(nèi)，按power鍵打開泵和檢測器電源，打開泵（該儀器除梯度外可用單泵也可同時用雙泵，用單泵可僅開一個泵，用雙泵需兩個泵同時打開，雙泵操作與單泵操作基本一致）。By孫毅目前六頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點3.2泵的操作三.操作過程打開泵和檢測器電源，儀器由紅燈轉(zhuǎn)換為綠燈，更換所需的流動相，然后將排液閥旋鈕逆時針旋轉(zhuǎn)180°以打開排液閥。

按“purge”鍵運行，開始沖洗。如果排液閥旋鈕旋轉(zhuǎn)的度數(shù)超過180°，任何排出的流動相都可能包含氣泡。這是正?，F(xiàn)象。

By孫毅目前七頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點3.2泵的操作三.操作過程等綠燈不再閃爍時代表清洗完成，以順時針方向盡量旋轉(zhuǎn)排液閥旋鈕，關(guān)閉排液閥。按“pump”鍵，開始泵的運行。

By孫毅目前八頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點3.3工作站的使用三.操作過程雙擊桌面Lcsolution

15c】圖標，確認已經(jīng)開啟LC系統(tǒng)后，啟動【LC實時分析”工作站。啟動【LC實時分析】工作站后，確保分析儀器的所有單元（泵、柱溫箱和檢測器）都已連至系統(tǒng)控制器。確保所有單元上都沒有顯示任何錯誤消息。By孫毅目前九頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點3.3工作站的使用三.操作過程設(shè)置系統(tǒng)配置，以便該系統(tǒng)與儀器的實際配置相匹配。僅當(dāng)?shù)谝淮螌Csolution

15c連接到分析儀器，或儀器的配置發(fā)生變化時，才需要下列設(shè)置。如果儀器的配置沒有任何變化，點擊“視圖”里的助手欄，點系統(tǒng)配置用單泵或雙泵進行運行。By孫毅目前十頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點3.4儀器參數(shù)設(shè)置三.操作過程點【文件】項下【新建方法文件】，單擊“儀器參數(shù)視圖”下【正常】選項，可以在其中輸入分析條件，例如LC停止時間、泵A流速、檢測器A波長通道

等。確保為每一檢測器設(shè)置了【LC停止時間】【結(jié)束時間】。

【LC停止時間】是控制儀器的持續(xù)時間。如果時間程序或餾分收集時間程序都沒有設(shè)置，則將其保留為0.01min。By孫毅目前十一頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點3.4儀器參數(shù)設(shè)置三.操作過程如用單泵運行，泵【模式】鉤選“等濃度洗脫”（雙泵運行勾選“二元高壓梯度洗脫”），點【高級】選項卡中“泵”選項，設(shè)置泵A流速（一般為1.000ml/min）和壓力限制最大值、最小值。如需雙泵（如梯度洗脫等），點【LC時間程序】設(shè)置梯度洗脫表，單擊“下載”將設(shè)置傳輸?shù)絻x器，使用新名稱保存方法文件。By孫毅目前十二頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點進樣設(shè)置三.操作過程確保顯示【就緒】，且【色譜圖視圖】中的基線穩(wěn)定后（一般約需15～30分鐘）。單擊【LC實時分析】窗口助手欄上的“單次運行”圖標，出現(xiàn)“單次運行”屏幕，設(shè)置樣品名、樣品ID、數(shù)據(jù)文件、數(shù)據(jù)描述、進樣體積等，然后單擊【確定】。By孫毅目前十三頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點檢測器調(diào)零三.操作過程檢測器調(diào)零：點擊“檢測器A零點”圖標，使檢測器數(shù)值調(diào)零。By孫毅目前十四頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點3.5進樣三.操作過程吸取不少于20μl的樣品，放在進樣口，向左打開進樣閥，將樣品全部打入進樣口，再向右打下進樣閥，系統(tǒng)即自動開始采集數(shù)據(jù)。單次分析開始，并且【LC實時分析】窗口中的狀態(tài)從【就緒】變?yōu)椤具\行】。By孫毅目前十五頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點3.5進樣三.操作過程當(dāng)達到【儀器參數(shù)視圖】中指定的檢測器的【結(jié)束時間】時，自動終止數(shù)據(jù)采集。如設(shè)定的【結(jié)束時間】要修改，可以單擊【采集】助手欄中的【停止】圖標，也可以在【數(shù)據(jù)采集】菜單的【更改分析時間】項目中，在數(shù)據(jù)采集過程更改結(jié)束時間。一旦開始數(shù)據(jù)采集，【儀器參數(shù)視圖】設(shè)置變?yōu)橹蛔x，并且不能在【儀器參數(shù)視圖】中更改結(jié)束時間。By孫毅目前十六頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點3.6

數(shù)據(jù)處理三.操作過程方法1單擊“Lcsolution

15c”中的“再解析”，“LC再解析”開始。

選擇【文件】菜單中的“選擇項目文件夾”，然后選擇預(yù)測定的數(shù)據(jù)文件，數(shù)據(jù)文件即打開。

By孫毅目前十七頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點3.6

數(shù)據(jù)處理三.操作過程單擊助手欄中的【向?qū)А繄D標，單擊“program”點擊【下一步】，設(shè)置正確的積分參數(shù)。

記錄要識別的峰的保留時間，單擊【下一步】輸入所需峰的詳細內(nèi)容，然后單擊【完成】。單擊化合物表右上角【視圖】按鈕，查看【結(jié)果】。

單擊【LC數(shù)據(jù)】助手欄中的【應(yīng)用到方法】圖標，出現(xiàn)屏幕，提示指定方法文件名。命名方法文件并單擊【保存】。

重復(fù)以上操作進行下一次測定，直到檢驗結(jié)束。By孫毅目前十八頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點3.6

數(shù)據(jù)處理三.操作過程方法2除上述辦法分析數(shù)據(jù)外，可以直接找到存儲數(shù)據(jù)文件的文件夾，打開文件，單擊【數(shù)據(jù)】然后點擊【峰表】，在峰表中查看并記錄所需的保留時間，峰高，峰面積等信息。By孫毅目前十九頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點3.7打印報告三.操作過程打印報告：在【LC數(shù)據(jù)分析】點擊左下角的【報告格式】出現(xiàn)“操作人”名，選定“操作人”雙擊。然后點擊左下角【數(shù)據(jù)】，從【數(shù)據(jù)】中拖動【數(shù)據(jù)文件】進行打印報告。By孫毅目前二十頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點3.8清洗和關(guān)機三.操作過程分析完畢后，先關(guān)色譜工作站和檢測器，再用適當(dāng)經(jīng)濾過和脫氣的溶劑清洗色譜系統(tǒng)，一般用先用25～30%甲醇沖洗，然后用純甲醇沖洗，25～30%甲醇一般沖洗

15～30分鐘，純甲醇沖洗不得少于30分鐘，特殊情況應(yīng)延長沖洗時間。關(guān)斷電源，作好使用登記，內(nèi)容包括日期，檢品，儀器完好狀態(tài)等。By孫毅目前二十一頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點注意事項四.注意事項1.色譜柱與進樣器及其出口端與檢測器之間應(yīng)為無死體積連接，以免試樣擴散影響分離。2.新柱或被污染柱用適當(dāng)溶劑沖洗時，應(yīng)將其出口端與檢測器脫開，避免污染。3.壓力表無壓力顯示或壓力波動時不能進行分析，應(yīng)檢查泵中氣泡是否已排除，各連接處有無漏液，排除故障后方能進行操作。如壓力升高，甚至自動停泵，應(yīng)檢查柱端有無污染堵塞。By孫毅目前二十二頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點注意事項四.注意事項4.發(fā)現(xiàn)記錄基線波動，出現(xiàn)毛刺等現(xiàn)象，首先應(yīng)檢查檢測器流通池是否有氣泡或污染，如不是流通池引起，儀器穩(wěn)定后方能進行操作。5.進樣時，色譜柱應(yīng)用流動相充分沖洗平衡，如系統(tǒng)適用性并不符合規(guī)定，或填充劑已損壞，則應(yīng)更換新的同類色譜柱進行分析。如果同類色譜柱依法操作達不到預(yù)定的分離時，可更換另一牌號的同類色譜柱進行試驗。By孫毅目前二十三頁\總數(shù)二十六頁\編于二十二點注意事項四.注意事項6.以硅膠作載體的化學(xué)鍵合相填充劑，其穩(wěn)定性受pH值影響很大。所以流動相一般pH應(yīng)為2.5～7.5。如果使用高pH值流動相時，可在泵與進樣器之間連接一硅膠短柱，以飽和流動相，保護分析柱，并盡可能縮短在高pH值下的使用時間，用后立即沖洗。7.色譜儀管路系統(tǒng)，從泵、進樣器、色譜柱至檢測器流通池，在分析完畢后，均應(yīng)按要求充分沖洗，特別是用過含鹽流動相的，更應(yīng)注意先用水沖洗數(shù)分鐘