PAGE22PAGE21PAGE1實(shí)驗(yàn)五微生物培養(yǎng)物的特征觀察和純培養(yǎng)物的分離純化一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、通過觀察實(shí)驗(yàn)四培養(yǎng)的菌落特征，注意掌握菌落特點(diǎn)的表述（形狀、顏色、大小，數(shù)量等）。2、掌握純培養(yǎng)物分離純化技術(shù)。3、了解土壤、污水和自來水不同取樣處的菌落特征。二、實(shí)驗(yàn)原理微生物的固體培養(yǎng)物的特征，即菌落的形態(tài)、大小、顏色等特征，菌落的特征主要由各種微生物特殊的遺傳特性決定，同時(shí)也與培養(yǎng)基成分及培養(yǎng)條件有關(guān)。當(dāng)固定培養(yǎng)基成分及培養(yǎng)條件相同時(shí)，不同種類微生物形成的菌落特征是固定的，可作為微生物鑒定的重要依據(jù)。而實(shí)驗(yàn)四的稀釋涂布技術(shù)是微生物培養(yǎng)純化的第一個(gè)關(guān)鍵技術(shù)；另外，劃線分離技術(shù)是針對固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)物的分離而言，同樣，劃線分離、純化技術(shù)工作對污染控制也具有特別重要的意義。故本實(shí)驗(yàn)旨在讓同學(xué)們掌握對微生物固體培養(yǎng)特征——菌落的觀察描述；同時(shí)掌握劃線分離純化技術(shù)。三、材料、儀器1、實(shí)驗(yàn)四中培養(yǎng)的平板菌落2、滅菌好平面皿（實(shí)驗(yàn)四已備好）3、10張廢報(bào)紙、紗布、棉花少許，制作瓶塞4、4個(gè)酒精燈；4個(gè)電爐；滅菌好的接種環(huán)10支；無菌水5、培養(yǎng)箱、滅菌移液管等四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）微生物培養(yǎng)物的特征觀察1.首先，拿出培養(yǎng)好(24-48h)的不同稀釋梯度的平板，把所觀察到的平板中的菌落數(shù)記錄下來。2.觀察平面皿中長出菌落的特征，如：大小、形狀、光澤、顏色、質(zhì)地軟硬、透明度、濕潤、粘稠、與基質(zhì)結(jié)合是否松散，是否易被剝離，質(zhì)地是否均勻，各部位顏色是否一致等。做好每個(gè)菌落的記錄（1-2種單菌落）。3.挑取1-2種純種菌落進(jìn)行劃線、分離和純化。（二）細(xì)菌純種分離1．稀釋平板分離法從前面制作的平板上挑取不同的菌落，在無菌條件下，接種于斜面培養(yǎng)基上。30℃培養(yǎng)24h，將每支斜面試管編號并注明日期，存入冰箱，用以觀察分離出來的細(xì)菌的菌落特征及個(gè)體形態(tài)。2．平板劃線分離法（1）取樣用無菌三角瓶取一定量的有代表性的土壤、活性污泥或生物膜樣品，立即送實(shí)驗(yàn)室檢測，否則存入冰箱（不得超過12h）。（2）樣品處理取20g（或適量）樣品放入內(nèi)有玻璃珠的無菌水中，振蕩20min，將團(tuán)粒打碎。（3）制平板將牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基融化，然后至約45℃左右，以無菌操作將肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，其厚度約為0.3cm。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，直徑為9cm的培養(yǎng)皿一般傾注15～20mL培養(yǎng)基為宜。傾注前，應(yīng)先將盛有培養(yǎng)基的容器瓶口或管口于火焰上轉(zhuǎn)一圈。培養(yǎng)基注入后，立即蓋好皿蓋，平放于桌上，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，待凝固后，即成平板。（4）劃線無菌操作，先將接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌，冷卻后，用接種環(huán)（圖18）挑取一環(huán)活性污泥（或土壤懸液等），左手拿培養(yǎng)皿，中指、無名指和小指托住皿底，拇指和食指夾住皿蓋，將培養(yǎng)皿稍傾斜，左手拇指和食指將皿蓋掀半開，右手將接種環(huán)伸入培養(yǎng)皿內(nèi)，在平板上輕輕劃線（切勿劃破培養(yǎng)基），劃線的方式可取圖19中任何一種。劃線完畢后，蓋好皿蓋，倒置，30℃培養(yǎng)24～48h后觀察結(jié)果。圖19平板劃線分離方法五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1、首先取上次實(shí)驗(yàn)涂平板的菌落來觀察，并記錄、描述你所觀察到菌落的特征，編號依次說明？2、繪圖描述分離的1-2個(gè)菌落的特征，必要時(shí)加以文字說明？3、挑取1-2個(gè)單個(gè)菌落，進(jìn)行劃線分離。思考題菌落特征在微生物物種鑒定中的作用？劃線分離時(shí)的注意事項(xiàng)是什么？范例：實(shí)驗(yàn)報(bào)告的主要內(nèi)容（以學(xué)校制訂統(tǒng)一報(bào)告為準(zhǔn)）實(shí)驗(yàn)ХХХХХХХ一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.2.3.………….二、實(shí)驗(yàn)儀器、材料1.2.3.………….三、實(shí)驗(yàn)原理1.2.3.……