動物細胞融合與單克隆抗體優(yōu)秀第一頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五

2002年12月30日，

兩場籌備了10年的“太空婚禮”首次在神舟四號飛船上舉行，植物細胞“新人”—黃花煙草和革新一號煙草葉肉細胞原生質體，動物細胞“新人”是小鼠B淋巴細胞和骨髓瘤細胞，兩批新人同時在“產(chǎn)房”—電融合儀內(nèi)孕育新生命。“太空婚禮”這兩場“太空婚禮”實質是哪兩項細胞工程技術？植物體細胞雜交技術動物細胞融合技術第二頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物體細胞雜交過程示意圖第三頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五A細胞B細胞人工誘導1.1動物細胞融合的概念雜交細胞動物細胞融合（也稱細胞雜交）：是指兩個或多個細胞融合形成一個單核細胞的過程。一、動物細胞融合第四頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五閱讀課本P52及識圖2-23，第五頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五細胞膜的流動性滅活病毒、PEG、電激等融合后的細胞進行有絲分裂，形成完整的雜交細胞誘導的手段？融合后細胞的類型？AB雜種細胞遺傳物質有什么特點？三種AA、AB、BB（A、B）含兩種生物的遺傳物質1.2動物細胞融合過程原理？第六頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五1.2動物細胞融合過程為什么滅活的病毒能作誘導劑？滅活使病毒的感染活性、增殖能力喪失但不破壞病毒的抗原結構。第七頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五想一想1．動物細胞融合完成的標志是什么？【提示】細胞核融合。第八頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五1.3動物細胞融合技術的意義和應用第九頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五比較項目細胞融合的原理細胞融合的方法誘導手段用途植物體細胞雜交細胞膜的流動性纖維素酶、果膠酶去除細胞壁后誘導原生質體融合離心、電刺激、振動、聚乙二醇克服遠源雜交不親和，獲得雜種植株動物細胞融合細胞膜的流動性用胰蛋白酶使細胞分散后誘導細胞融合除應用植物細胞雜交手段外，還有滅活病毒獲得雜種細胞、制備單克隆抗體1.4比較動、植物細胞雜交技術第十頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五【例1】能使動物細胞融合的特有的誘導因子是（）A.離心B.滅活的病毒C.電刺激D.振動【例2】融合后的雜交細胞的遺傳物質有何特點（）具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息B.能無限增殖C.可形成新個體D.培養(yǎng)過程會貼壁【例3】動物細胞融合的作用中最重要的是（）A.克服遠源雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新物種D.生產(chǎn)雜種細胞

BB初試牛刀A第十一頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五互動探究(1)本題中細胞融合手段不同于植物體細胞雜交的是什么？(2)本題中培養(yǎng)液中融合處理后的細胞類型最多有幾種？分別是什么細胞？提示】

(1)動物細胞融合的手段與植物體細胞雜交的區(qū)別是前者通常采用滅活的病毒作為誘導劑。(2)細胞類型通常有5種，即鼠—鼠、人—人、人—鼠、人、鼠單獨的細胞。第十二頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五【易誤警示】

(1)常用的病毒誘導劑有仙臺病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等，其中仙臺病毒最常用。(2)用做誘導劑的病毒必須事先滅活，使病毒的感染活性、增殖能力喪失但不破壞病毒的抗原結構。第十三頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五強調(diào)：效應B淋巴細胞是能夠產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞，下文將其簡稱為B淋巴細胞抗體：能夠與抗原發(fā)生特異性結合的免疫球蛋白。能產(chǎn)生抗體的細胞是漿細胞（即效應B細胞）。溫故知新二、單克隆抗體B淋巴細胞效應B淋巴細胞記憶B淋巴細胞分化第十四頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗原反復注射動物從動物的血清中分離抗體該法制備抗體的缺點：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。如何解決這個問題呢？單克隆抗體！第十五頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五提示1：對B細胞進行細胞培養(yǎng)可行嗎？提示2：我們所學的哪種細胞是可以無限增殖的？問題：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請嘗試設計一個方案。2.2單克隆抗體的制備

第十六頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細胞能無限增殖雜交瘤細胞動物細胞培養(yǎng)技術設計方案：動物細胞融合技術單克隆抗體既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖的細胞1975年英國科學家米爾斯坦和柯勒的實驗第十七頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五①為什么給小鼠注射特定的抗原蛋白？②會有幾種融合方式？③雜交瘤細胞是如何篩選出來的？有何特點？④是否所有的雜交瘤細胞都能產(chǎn)生專一性抗體？⑤如何大規(guī)模進行培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體？第十八頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五BB

、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一選）選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細胞才能存活獲得產(chǎn)生相應抗體的B細胞（二選）：選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細胞√體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)雜交瘤細胞特點：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。第十九頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五想一想2．什么是單克隆抗體？鼠的單克隆抗體能否用于人體疾病的治療？為什么？【提示】單克隆抗體是由單一雜交瘤細胞增殖產(chǎn)生的化學性質單一、特異性強的抗體。不能。因為鼠的B淋巴細胞所產(chǎn)生的抗體與人體B淋巴細胞產(chǎn)生的抗體是不同的。第二十頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五單抗制備過程分哪幾步？請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？

你學會了嗎？第二十一頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五(2012·北京四中高二質檢)1975年科學家首次利用B淋巴細胞雜交瘤技術制備出單克隆抗體。請根據(jù)下圖回答問題：(1)病原體注入小鼠體內(nèi)后，要經(jīng)過________細胞處理后形成抗原—MHC復合體，才能被免疫細胞識別。(2)制備單克隆抗體所用的B淋巴細胞一般從脾中采集，然后以_________________________作誘導劑，使B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合。通過篩選和克隆培養(yǎng)，獲得的雜交瘤細胞具_____________________的特點。(3)單克隆抗體的特點是_________________________________根據(jù)上圖寫出應用雜交瘤技術獲得單克隆抗體的兩種主要方法____________________________________________________________________吞噬(或巨噬)滅活的仙臺病毒或聚乙二醇既能產(chǎn)生特異性抗體，又能無限增殖特異性強，純度高(或：專一性強、靈敏度高)

體外培養(yǎng)法和動物體內(nèi)培養(yǎng)法第二十二頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五變式訓練(2012·西寧五中高二檢測)根據(jù)單克隆抗體制備流程示意圖判斷以下選項中正確的是(

)A．單克隆抗體技術的原理包括細胞增殖、細胞膜的流動性、細胞的全能性等B．根據(jù)培養(yǎng)基的物理性質分類，圖中HAT培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基C．在制備單克隆抗體的過程中有兩次選擇，第一次是選擇雜交瘤細胞，第二次是選擇能夠產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞D．老鼠骨髓瘤細胞染色體數(shù)是40，效應B細胞的染色體數(shù)為46，融合后形成的雜交瘤細胞DNA分子數(shù)為86C第二十三頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五2.3單克隆抗體的應用診斷試劑——最廣泛應用準確、高效、簡易、快速單克隆抗體最主要的優(yōu)點：特異性強，靈敏度高，并能大量制備。第二十四頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五“生物導彈”＝單克隆抗體＋藥物單抗導向，藥物為彈頭治療疾病和運載藥物主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導彈”，準確殺傷癌變細胞。第二十五頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五有性生殖的生物產(chǎn)生后代需進行受精作用，植物體細胞雜交要進行原生質體的融合，單克隆抗體的制備需進行動物細胞融合，可見細胞的融合技術有著廣泛的應用。下列為細胞融合的簡略過程，據(jù)圖回答相關問題：例31)若a、b分別是基因型為Hhrr、hhRr兩個煙草品種的花粉，且這兩對基因分別位于兩對同源染色體上。由于一對隱性純合基因(rr或hh)的作用，在光照強度大于800lx時都不能生長。要想從融合細胞的培養(yǎng)液中分離出基因型為HhRr的雜種細胞，較為簡便的篩選方法是__________________________________________________________________________給予大于800lx的光照第二十六頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五(2)若a、b表示兩種植物體細胞，則由d細胞形成雜種植株的原理是_________________________________________________。這種育種方法的優(yōu)點是__________________________________________________(3)若a、b分別為骨髓瘤細胞和B淋巴細胞，則d細胞的特點是__________________________________________。由d細胞產(chǎn)生的抗體與普通血清抗體相比較，具有__________________________的特點。一般不能通過直接培養(yǎng)B淋巴細胞的方法生產(chǎn)單克隆抗體的主要原因是_________________________________________________________。植物細胞的全能性克服了遠緣雜交的障礙既能無限增殖，又能產(chǎn)生特定的抗體特異性強、靈敏度高、可大量制備B淋巴細胞高度分化，不能增殖第二十七頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五【例4】科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（）A.經(jīng)過免疫的B淋巴細胞C.經(jīng)過免疫的T淋巴細胞B.不經(jīng)過免疫的T淋巴細胞D.不經(jīng)過免疫的B淋巴細胞【例5】單克隆抗體是由下列哪種細胞產(chǎn)生的（）B淋巴細胞B．T淋巴細胞C．骨髓瘤細胞D．雜交瘤細胞A初試牛刀D第二十八頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五【例6】用動物細胞工程技術獲取單克隆抗體，下列實驗步驟中錯誤的是（）A．將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞B．用纖維素酶處理B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞C．用聚乙二醇作誘導劑，促使能產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合D．篩選雜交細胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體B初試牛刀×第二十九頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五變式訓練下列關于細胞工程的敘述，錯誤的是(

)A．電刺激可誘導植物原生質體融合或動物細胞融合B．去除植物細胞的細胞壁和將動物組織分散成單個細胞均需酶處理C．小鼠骨髓瘤細胞和經(jīng)抗原免疫小鼠的B淋巴細胞融合可制備單克隆抗體D．某種植物甲乙兩品種的體細胞雜種與甲乙兩品種雜交后代的染色體數(shù)目相同D第三十頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五兩個過程動物細胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導細胞融合的新方法－－滅活病毒一個新細胞－－雜交瘤細胞一個優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢本節(jié)小結重點第三十一頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五謝謝第三十二頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五(1)若A細胞是小鼠骨髓瘤細胞，則B細胞是取自小鼠體內(nèi)的

細胞，從小鼠體內(nèi)提取分離該細胞之前，應給小鼠注射_____________類物質。（2）d過程是一個_____________過程，該過程的進行常用_____________或_____________的誘導。(3)假設僅考慮某兩個細胞的融合，則可形成

種類型的C細胞，因此需用__________培養(yǎng)基篩選出D細胞用于培養(yǎng)，D細胞的名稱是

，其特點是_________________________________________。效應B

抗原

細胞融合

聚乙二醇滅活的病毒

選擇性3既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體

雜交瘤細胞第三十三頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五(4)在培養(yǎng)時通過________分裂方式大量繁殖。D細胞體外培養(yǎng)需要注意的條件是（要求答5項）__________________________________。（5）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預防方面，與常規(guī)抗體相比，其特點是_________________。特異性強、靈敏度高

有絲無菌、無毒的環(huán)境；充足的營養(yǎng)；適宜的溫度和pH；適宜的氣體環(huán)境

第三十四頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五15、（1）單克隆抗體是指

。（2）制備單克隆抗體的步驟：①將__________注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟中獲得淋巴細胞，其中至少1個淋巴細胞帶有抗該抗原的抗體。②將步驟①獲得的B淋巴細胞與步驟②培養(yǎng)的骨髓瘤細胞在_________________的誘導下融合。③將誘導后產(chǎn)生的多種細胞，放在_______培養(yǎng)基的多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，篩選。④這樣獲得的雜交瘤細胞既具有B淋巴細胞_____________的能力，又具有________________的本領。⑤檢測和分離帶有抗X抗體的陽性細胞，培養(yǎng)板中每孔放一個細胞進行培養(yǎng)。⑥將陽性細胞進行增殖，從而制備出大量抗該抗原的單克隆抗體?；瘜W性質單一，特異性強的抗體

抗原

聚乙二醇選擇性

無限增殖

產(chǎn)生專一抗體第三十五頁，共三十八頁，編輯于2023年，星期五（3）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：①體外培養(yǎng)法，可獲得10μg/mL的抗體；②動物體內(nèi)誘生法可獲得