月亮縣中醫(yī)院項 目文件編號：YCXZYYJYKSOP15頁碼：第-1-頁，共3頁檢驗科臨床微生物項目SOP手冊版本：第3版，第1次修訂生效日期：20180101SOP_15-10糞便培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序一、 糞便培養(yǎng)標(biāo)本采集和運送見本手冊《病原微生物標(biāo)本的采集運送和處原則》。二、 標(biāo)本驗收1?申請單驗收：要求申請單除患者的基本信息以外還應(yīng)包括標(biāo)本收集時間、收集方式、是否已使用抗生素等，驗收時應(yīng)檢查申請單是否填寫完整。2?標(biāo)本驗收：（1） 檢查標(biāo)本標(biāo)識是否與申請單相符；（2） 檢查送檢時間是否超過規(guī)定的標(biāo)本保存時間。3.不合格標(biāo)本處理：（1） 對申請單信息不全者應(yīng)設(shè)法與臨床醫(yī)師取得聯(lián)系；（2） 對標(biāo)識不符、送檢容器不合格，送檢時間超過規(guī)定時間的標(biāo)本應(yīng)注明原因，退回，要求重新留取標(biāo)本，并做記錄。三、 實驗室檢查1、 涂片檢查當(dāng)檢查霍亂弧菌以及菌群失調(diào)優(yōu)勢菌時需作直接涂片檢查。（1） 檢查霍亂弧菌落染色檢查：取新鮮送檢標(biāo)本涂片，干燥后革蘭氏染色，油鏡下觀察有無革蘭陰性呈魚群排列的弧菌。懸液檢查：取患者糞便，制成懸滴標(biāo)本，檢查細(xì)菌的動力，霍亂弧菌呈穿梭狀活潑的運動，在懸滴涂下加O1群霍亂弧菌診斷血清后，在顯微鏡下觀察，若原運動的現(xiàn)象停止，為制動試驗陽性?？沙醪酵茢酁橐伤芆1群霍亂弧菌。（2） 酵母菌涂片檢查：涂片染色在油鏡下觀察，是否有卵形的芽生孢子及假菌絲，即報告檢出酵母樣菌。（3） 糞便中優(yōu)勢菌：涂片革蘭氏染色油鏡下觀察：染色性、細(xì)菌形態(tài)、排列、各自在涂下中所見到的相對比例、推定主要優(yōu)勢菌，并及時報告結(jié)果。2、 培養(yǎng)及結(jié)果觀察（1）沙門-志賀菌：接種SS（或HE）及MAC（或中國蘭），35°C、18-24h后檢查平板，如未發(fā)現(xiàn)沙門菌或志賀菌的可疑菌落，48h重復(fù)檢查一次。如未發(fā)現(xiàn)可疑菌落，可報告：“未檢出沙門/志賀菌”；如有疑似菌落，做推斷性生化試驗，初步生化反應(yīng)符合兩屬生物學(xué)定義，并與志賀菌診斷血清中之一發(fā)生明顯凝集者，可報告“檢出**志賀菌”；與沙門菌多編寫者：張二二審核者：李四四批準(zhǔn)者：李四四時間：20180101時間：20180101時間：20180101月亮縣中醫(yī)院項 目文件編號：YCXZYYJYKSOP15頁碼：第-2-頁，共3頁檢驗科臨床微生物項目SOP手冊版本：第3版，第1次修訂生效日期：20180101價及群因子診斷血清凝集者，只能報告“檢出*群沙門菌”。沙門/志賀菌的選擇性增菌培養(yǎng)基，此類培養(yǎng)能抑制革蘭陽性菌及暫時性抑制大腸埃希氏菌和變形桿菌生長，并促進(jìn)沙門/志賀菌的生長?；魜y弧菌培養(yǎng)：取疑似患者糞便接種于堿性胨水中，進(jìn)行增菌，同時劃線接種4號瓊脂/TCBS平板及血平板，孵育于35°C。增菌培養(yǎng)6h后，取表面菌膜移種于上述平板，進(jìn)行分離培養(yǎng)，并同時作涂片，懸滴標(biāo)本，檢查形態(tài)及活力。各種分離培養(yǎng)的平板在孵育18-24h后觀察菌落，挑取可疑菌落，先與生理鹽水混勻，觀察有無自凝現(xiàn)象。用O1和O139群霍亂多價血清作玻片凝集試驗，立即出現(xiàn)明顯凝集的為陽性。如在選擇性培養(yǎng)其上生長典型，活動活潑呈穿梭狀，氧化酶陽性的革蘭陰性弧菌并且霍亂多價血清凝集者，可判定這O1/0139群霍亂弧菌。在霍亂流行期間即5-10月，根據(jù)并結(jié)合臨床即可對病人作出霍亂病的早期診斷。關(guān)立即向當(dāng)?shù)丶部夭块T報告信息。副溶血性弧菌培養(yǎng)：取糞便接種于弧菌增菌液中，同時劃線分離弧菌的選擇性培養(yǎng)基和SS平板上，35C孵育18-24h后，觀察菌落。生長在弧菌培養(yǎng)基上的菌落特性:直徑1-2.5mm，微隆起，混濁，無黏性，無色，濕潤，菌落中心灰暗綠色較深；在SS平板上的菌落直徑為1-2mm，扁平，中間隆起如蠟滴，無色透明，菌落黏稠，往往不易挑起。挑選菌落移種于含鹽的KIA、MIU有作無鹽、高鹽試驗，進(jìn)行鑒定。致病性大腸埃希菌的培養(yǎng)：包括產(chǎn)腸毒素性大腸埃希菌(ETEC)、致病性大腸埃希菌(EPEC)、侵襲性大腸埃希菌(EIEC)、出血性大腸埃希菌(EHEC)。取液體狀、膿血、糊狀糞便或肛拭子劃線接種于：麥康凱等弱選擇性培養(yǎng)基；大腸埃希菌了發(fā)酵乳糖，在MAC上呈桃紅色不透明菌落。山梨醇麥康凱，腸出血性大腸埃希菌及某些腸致病性大腸埃希菌遲緩發(fā)酵山梨醇。血平板，用于觀察腸致病性大埃希菌的溶血及與其他菌落的鑒另U。標(biāo)本接種培養(yǎng)基后，37C培養(yǎng)18-24h觀察結(jié)果。初步鑒定：挑取可疑菌落作生化及大腸埃希菌多價血清作玻片凝集試驗，陽性者作進(jìn)一步鑒定。疑似葡萄球菌培養(yǎng)：取綠色、海水樣或糊狀糞便劃線，接種于甘露醇高鹽平板或血平板，35C孵育過夜，觀察菌落。挑取菌落涂片，革蘭染色，鏡檢。如見革蘭陽性球菌，呈葡萄狀排列，則需做凝固酶、DNA酶及甘露醇發(fā)酵等試驗加以鑒定。真菌培養(yǎng)：真菌性腹瀉多繼發(fā)于抗生素治療后，常見有白色念珠菌，光滑念珠拉菌。將標(biāo)本接種于含氯霉素的沙氏瓊脂及血平板，置25-30C和35C孵育24-48h，根據(jù)菌落形態(tài)及涂片革蘭染所見結(jié)果，決定鑒定方法。輪狀病毒檢測:可直接用ELISA法檢測糞便標(biāo)本中輪狀病毒(RV)抗原，或從糞便中提取RVRNA做聚丙烯酰胺凝膠電泳質(zhì)人6成,根據(jù)輪狀病毒特有的RNA基因片斷大小及其排列特編寫者：張二二審核者：李四四批準(zhǔn)者：李四四時間：20180101時間：20180101時間：20180101

月亮縣中醫(yī)院項 目文件編號：YCXZYYJYKSOP15頁碼：第-3-頁，共3頁檢驗科臨床微生物項目SOP手冊版本：第3版，第1次修訂生效日期：20180101點，判斷結(jié)果。四、結(jié)果報告