血凝與血凝抑制第一頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一血凝(HA)與血凝抑制(HI)試驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、?shí)驗(yàn)內(nèi)容三、實(shí)驗(yàn)原理四、實(shí)驗(yàn)材料五、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果判定六、注意事項(xiàng)七、新城疫背景介紹第二頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握血凝和血凝抑制試驗(yàn)的基本原理、操作方法和結(jié)果判定方法2、了解新城疫有關(guān)背景知識(shí)

第三頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、血凝試驗(yàn)(HA)檢測(cè)新城疫抗原2、血凝抑制試驗(yàn)(HI)檢測(cè)新城疫抗體第四頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一三、實(shí)驗(yàn)原理1、血凝試驗(yàn)（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝素能選擇性地使某種動(dòng)物地紅細(xì)胞發(fā)生凝集，這種凝集紅細(xì)胞的現(xiàn)象稱(chēng)為血凝（HA）,也稱(chēng)直接血凝反應(yīng)。病毒顆粒紅細(xì)胞第五頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一2、血凝抑制試驗(yàn)（HI）原理：當(dāng)病毒的懸液中加入特異性抗體，且這種抗體的量足以抑制病毒顆粒或其血凝素時(shí)，則紅細(xì)胞表面的受體就不能與病毒顆粒或血凝素直接接觸。這時(shí)紅細(xì)胞的凝集現(xiàn)象就被抑制，稱(chēng)為紅細(xì)胞凝集抑制（HI）反應(yīng)，也稱(chēng)血凝抑制反應(yīng)。Iamlate！抗體抗原第六頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一四、實(shí)驗(yàn)材料1、血凝板（2人/塊）2、新城疫陽(yáng)性血清3、被檢血清（1份）4、1％紅細(xì)胞懸液5、稀釋液6、移液器（50ul,2人/把）7、槍頭第七頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一五、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果判定血凝試驗(yàn)（HA)1、在血凝板上第一排的1－12孔內(nèi)各加入50ul生理鹽水2、在第1孔內(nèi)加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀釋至第11孔，最后棄50ul3、每孔加入1％雞紅細(xì)胞懸液50ul4、輕輕振蕩均勻，后放于室溫或37℃中靜置30分鐘5、結(jié)果判定第八頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一1234567891011122×4×8×16×32×64×128×256×512×1024×2048×紅細(xì)胞對(duì)照生理鹽水505050505050505050505050抗原5050505050505050505050棄50紅細(xì)胞505050505050505050505050結(jié)果＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－－－－血凝效價(jià)測(cè)定第九頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)1、＋＋＋＋：紅細(xì)胞呈細(xì)沙樣均勻鋪于孔底，即100％凝集；2、＋＋＋：紅細(xì)胞均勻鋪于孔底，當(dāng)邊緣不整齊而稍向孔底集中，即75％凝集；3、＋＋：紅細(xì)胞形成一個(gè)環(huán)狀，四周有凝集塊，即50％凝集；4、＋：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣不夠光滑，四周稍有凝集塊，即25％凝集；5、－：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣光滑整齊，即無(wú)凝集；第十頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一第十一頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一血凝價(jià)的判定以出現(xiàn)＋＋（50％凝集）的抗原最高稀釋倍數(shù)為該抗原的血凝價(jià)（1:128）。50ul1:256稀釋的病毒抗原為該抗原的一個(gè)血凝單位。稀釋倍數(shù)2×4×8×16×32×64×128×256×512×1024×2048×細(xì)胞對(duì)照結(jié)果＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋————第十二頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一血凝抑制試驗(yàn)1、將病毒抗原稀釋成4個(gè)血凝單位（1/128×4=1:32）2、在血凝板上1－12孔內(nèi)各加入50ul生理鹽水；3、在第1孔內(nèi)加入被檢血清50ul，然后倍比稀釋至第11孔，最后棄50ul；4、第1－12孔內(nèi)加入4單位抗原50ul（第12孔為病毒對(duì)照）；5、每孔加入1％雞紅細(xì)胞懸液50ul；6、輕輕振蕩均勻，后放于室溫或37℃中靜置30分鐘6、結(jié)果判定第十三頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一1234567891011122×4×8×16×32×64×128×256×512×1024×2048×病毒對(duì)照生理鹽水505050505050505050505050血清5050505050505050505050棄504單位抗原505050505050505050505050紅細(xì)胞505050505050505050505050結(jié)果－－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－血凝抑制效價(jià)測(cè)定第十四頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)1、＋＋＋＋：紅細(xì)胞呈細(xì)沙樣均勻鋪于孔底，即100％凝集；2、＋＋＋：紅細(xì)胞均勻鋪于孔底，當(dāng)邊緣不整齊而稍向孔底集中，即75％凝集；3、＋＋：紅細(xì)胞形成一個(gè)環(huán)狀，四周有下凝集塊，即50％凝集；4、＋：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣不夠光滑，四周稍有凝集塊，即25％凝集；5、－：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣光滑整齊，即無(wú)凝集。第十五頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一血凝抑制價(jià)的判定以出現(xiàn)完全抑制凝集(即不凝集)的血清最高稀釋倍數(shù)為該血清的血凝抑制價(jià)（1:4）。稀釋倍數(shù)2×4×8×16×32×64×128×256×512×1024×2048×血清對(duì)照結(jié)果——＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋—第十六頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一六、注意事項(xiàng)1、紅細(xì)胞用前請(qǐng)搖勻2、用槍加樣定要準(zhǔn)，盡量不要有氣泡3、結(jié)果判定有耐心4、HA和HI勿相混第十七頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一七、新城疫背景介紹第十八頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一雞新城疫

（NewcastleDiseaseND）第十九頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一1、概述ND是由ND病毒（NewcastlediseaseVirus,NDV）引起的高度接觸性和高度毀滅性的急性敗血性傳染病。1926年首先發(fā)生于印尼，同年發(fā)現(xiàn)于英國(guó)新城我國(guó)1928年有該病記載是當(dāng)今全球范圍內(nèi)最嚴(yán)重的家禽傳染病之一被國(guó)際獸疫局（OIE)列為A類(lèi)傳染病

第二十頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一別名：新城疫、亞洲雞溫、偽雞瘟雞瘟：

禽流感、歐洲雞溫、真性雞溫第二十一頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一新城疫病毒，屬副粘病毒科，副粘病毒屬。病毒顆粒表面具有血凝素蛋白，可以刺激機(jī)體產(chǎn)生血凝抑制抗體，2、病原體第二十二頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一第二十三頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一根據(jù)臨診表現(xiàn)和病程長(zhǎng)短分為：（1）最急性型：突然發(fā)病，病變不明顯，見(jiàn)于雛雞及本病流行初期。急性型：（典型新城疫）亞急性型（非典型ND)慢性型（非典型ND）3、病狀及病理變化第二十四頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一（2）、急性型：侵害消化系統(tǒng)為主，也稱(chēng)嗜內(nèi)臟速發(fā)型。病狀特點(diǎn)：a.食欲減退，飲水增加，離群呆立，眼睛半開(kāi)半閉，翅膀下垂，冠、肉髯呈紫黑色。第二十五頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一b.嗉囊積液、體溫升高、呼吸困難。鼻腔內(nèi)有大量分泌物，嚴(yán)重拉稀糞便呈黃綠色或褐色，有時(shí)混有血。第二十六頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一c.死亡率高,非免疫雞感染后可以80-100%死亡。d.部分患雞出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，頭頸歪向一側(cè)而咀向上，母雞產(chǎn)蛋下降。第二十七頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一第二十八頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一病變特點(diǎn)：全身的粘膜和漿膜出血，突出病變?cè)谙?。A.腺胃粘膜水腫，粘膜上的乳頭及其周?chē)谐鲅c(diǎn)，間有潰瘍。B.腺胃與肌胃、腺胃與食道交界處粘膜可見(jiàn)到出血點(diǎn)或出血帶。第二十九頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一C.小腸、直腸、泄殖腔粘膜充血、出血或有壞死，D.盲腸扁桃體出血。第三十頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一第三十一頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一皮下脂肪出血第三十二頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一腦膜充血出血卵黃性腹膜炎第三十三頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一有的病雞表現(xiàn)眼結(jié)膜炎第三十四頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一

（3）、亞急性型（非典型ND，以侵害呼吸道為主）也稱(chēng)肺腦炎型：其主要的特點(diǎn)：是癥狀及病變不典型。癥狀：多見(jiàn)4-35日齡雞，25日齡前后最常發(fā)病。呼吸困難，精神沉郁，繼而較早地出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，此時(shí)出現(xiàn)歪頭，扭頸，角弓反張，倒地不能起立。第三十五頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一病變：喉頭及氣管粘膜水腫，出血、充血、并有大量粘液，肺呈紫黑色（肺出血性炎癥）。硬腦膜下樹(shù)枝狀充血，并有出血點(diǎn)。心冠、脂肪有出血點(diǎn)。發(fā)病率高，死亡率較低。第三十六頁(yè)，共三十八頁(yè)，編輯于2023年，星期一（4）、慢性型（非典型ND）母雞：輕者只表現(xiàn)產(chǎn)蛋率下降（約10-30%）