藥學(xué)專業(yè)藥物分析第六章藥物的含量測定第一頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一

主要內(nèi)容容量分析法紫外－可見分光光度法薄層掃描法氣相色譜法高效液相色譜法典型藥物測定實(shí)例第二頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一第六章藥物含量測定

第一節(jié)藥物含量測定方法藥品的含量測定是指準(zhǔn)確測定藥品有效成分或指標(biāo)性成分的含量。含量測定是評價(jià)藥品質(zhì)量、判斷藥物優(yōu)劣和保證藥品療效的重要手段?，F(xiàn)行版藥典收載的3214種藥品中，有1419種涉及到含量測定。常用的含量測定方法有化學(xué)分析法、紫外-可見分光光度法、原子吸收分光光度法、氣相色譜法、薄層掃描法、高效液相色譜法等。第三頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一一、容量分析法容量分析法即滴定分析法，是根據(jù)一種已知濃度的試劑溶液和被測物質(zhì)完全作用時(shí)所消耗的體積，來計(jì)算被測物質(zhì)含量的方法。容量分析通常用于測定較高含量或中含量組分，即被測組分的含量一般在1%以上，有時(shí)也可用于測定微量組分。容量分析比較準(zhǔn)確，測定的相對誤差可達(dá)0.1%。第四頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液和被測物質(zhì)發(fā)生的反應(yīng)類型和介質(zhì)的不同，可將容量分析法分為下列幾類：（一）、酸堿滴定法（二）、沉淀法

(三)、絡(luò)合滴定法

(四)、氧化還原法鈰量法、碘量法、溴酸鉀法、高錳酸鉀法、高碘酸鉀法及亞硝酸鈉法第五頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一(五)、非水溶液滴定法

1.非水堿量法（1）非水堿量法原理某些藥物由于在水液中顯示的堿性較弱，不能進(jìn)行酸堿滴定。而在非水介質(zhì)中，就能顯示出較強(qiáng)的堿性，可以順利地進(jìn)行。多半在冰醋酸或醋酸中進(jìn)行滴定，滴定劑多為高氯酸的冰醋酸溶液。一般應(yīng)用電位法指示終點(diǎn)，2.非水酸量法（1）非水酸量法原理某些藥物如羧酸類、酚類、巴比妥類、磺胺類、烯醇類，由于在水溶液中顯示的酸性較弱，CKa<10-8，不能進(jìn)行酸堿滴定。而在非水介質(zhì)中，就能顯示出較強(qiáng)的酸性，用強(qiáng)堿滴定。多半在無水甲醇中進(jìn)行，滴定劑多為甲醇鈉的苯—甲醇溶液。第六頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一

二、紫外－可見分光光度法1.測定原理定量分析的理論依據(jù)是朗伯-比耳定律。當(dāng)一束平行的單色光垂直照射到待測物質(zhì)的稀溶液時(shí)，光中所含有的一部分能量被待測物吸收，其余光則透過溶液，照在檢測器上。在一定濃度范圍內(nèi)，待測物對這束光的吸收度（A）與該物質(zhì)的濃度（c）和液層的厚度（L）（光路長度，即光程）成正比，其關(guān)系如下：

A=EcLE為吸收系數(shù)，其物理意義是當(dāng)溶液濃度為1%（即1g/100ml），液層厚度為1cm時(shí)的吸收度數(shù)值，通常用表示。E是個(gè)常數(shù)。因此，當(dāng)液層厚度固定不變時(shí)，物質(zhì)的吸收度與其濃度成正比。第七頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一2、定量分析方法（1）對照品比較法對照品比較法按下式計(jì)算供試品中被測溶液的濃度：

cx為供試品溶液的濃度；

Ax為供試品溶液的吸收度；

cR為對照品溶液的濃度；

AR為對照品溶液的吸收度。第八頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一（2）吸收系數(shù)法

A為測得的吸收度；為比吸收系數(shù)；

W為所稱樣品的重量，g。第九頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一三、薄層色譜掃描法薄層色譜掃描法是指用一束一定波長、一定強(qiáng)度的紫外或可見光對薄層板進(jìn)行掃描，測定薄層板上的樣品斑點(diǎn)對光的吸收強(qiáng)度或斑點(diǎn)經(jīng)激發(fā)后所產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度。所得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)可用于藥品含量測定。（一）薄層吸收掃描法測定薄層板上的樣品斑點(diǎn)對光的吸收強(qiáng)度的方法（二）薄層熒光掃描法測定樣品斑點(diǎn)經(jīng)激發(fā)后所產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度的方法

第十頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一其中掃描方式有以下幾種：（1）反射法與透射法反射法是指測定樣品斑點(diǎn)對照射光的反射情況進(jìn)行測定的方法透射法則是測定照射光穿透樣品斑點(diǎn)后光的吸收情況。（2）單波長和雙波長單波長薄層掃描適合于分離度好，背景干擾小的薄層色譜。雙波長薄層掃描時(shí)用測定波長和參比波長分別掃描薄層板，測定樣品斑點(diǎn)在兩波長下的吸收度之差。（3）線性掃描和鋸齒掃描線性掃描一般采用一束比待測斑點(diǎn)略寬的狹窄光帶沿展開方向做單向等速掃描，它適于形狀較規(guī)則斑點(diǎn)的掃描。鋸齒掃描是使用微小正方形光束沿展開方向掃描的同時(shí)，在垂直于展開方向進(jìn)行往復(fù)式掃描.第十一頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一四、氣相色譜法（一）概述1.載氣鋼瓶（N2）；2.氫氣鋼瓶；3.空氣鋼瓶；4.減壓閥；5.干燥器；6.穩(wěn)壓閥；7.壓力表；8.針形閥；9.轉(zhuǎn)子流量計(jì)；10.進(jìn)樣器及汽化室；11.色譜柱（虛線表示恒溫室）；12.氫火焰離子化檢測器（虛線表示恒溫室）；13.微電流放大器，14.記錄器第十二頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一（二）定量分析方法

1.外標(biāo)法精密稱取對照品和供試品，配制成溶液，分別精密量取一定量，注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品和供試品中待測成分的峰面積（或峰高），按下式計(jì)算含量：

cx為待測成分的濃度；

Ax為待測成分的峰面積（或峰高）；

cR為對照品的濃度；

AR為對照品的峰面積（或峰高）。第十三頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一

2.內(nèi)標(biāo)法加校正因子精密稱取對照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，分別配成溶液，精密量取各溶液，配成測定校正因子所用的對照溶液，取一定量注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積（或峰高），按下式計(jì)算校正因子f：

AS為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積（或峰高）；

AR為對照品的峰面積（或峰高）；

cS為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度；

cR為對照品的濃度。第十四頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一

再取含內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，注入儀器，記錄色譜圖，測量供試品中待測成分（或雜質(zhì)）和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積（或峰高），按下式計(jì)算含量：

f為校正因子；

Ax為供試品中待測成分的峰面積（或峰高）；

AS為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積（或峰高）；

cx為供試品中待測成分的濃度；

cS為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度。第十五頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一3.面積歸一化法。取一定量注入氣相色譜儀，記錄相當(dāng)于主成分峰保留時(shí)間數(shù)倍的色譜圖，計(jì)算各成分峰面積及其總和以及被測組分峰面積總和所占的百分比。用本法測定時(shí)，溶劑峰不計(jì)算在總面積中。被測組分％＝（∑Ai／∑A）×100％式中，∑Ai為被測組分峰面積之和；∑A為全部峰面積之和。第十六頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一五、高效液相色譜法

（一）概述第十七頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一HPLC常用的流動(dòng)相：其主要成分是水、甲醇、乙腈、醋酸銨溶液、磷酸溶液、磷酸二氫銨溶液等。固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠（應(yīng)用最廣泛），常簡稱為ODS柱或C18柱。除C18外，藥典中還用到了苯基硅烷鍵合硅膠、辛烷基硅烷鍵合硅膠等。第十八頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一正相色譜是指以親水性的填料做固定相、以疏水性溶劑或混溶的溶劑做流動(dòng)相的HPLC類型。反相色譜是指以強(qiáng)疏水性的填料做固定相、以可以和水混溶的有機(jī)溶劑做流動(dòng)相的HPLC類型。反相色譜最常用的固定相是ODS柱，最常用的流動(dòng)相是水、甲醇、乙腈等。這一模式在HPLC中應(yīng)用極廣，類似于一種通用型的液相色譜方法。第十九頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一（二）定量分析方法高效液相色譜法的定量分析方法同氣相色譜法。第二十頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一第二節(jié)藥物含量測定示例一、碘量法《中國藥典》（2005年版）收載的用直接碘量法測定含量的原料藥和制劑有維生素C及其制劑、二巰丙醇、二巰丙磺鈉及其注射劑、安乃近及其制劑等。第二十一頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一例6-1《中國藥典》（2005年版）中維生素C的含量測定。

1.測定原理：維生素C具有強(qiáng)還原性，在酸性溶液中可被弱氧化劑碘氧化為去氫維生素C，當(dāng)維生素C被I2氧化后，微過量的I2可使淀粉指示劑變藍(lán)色，以溶液顯藍(lán)色并持續(xù)30s不褪為終點(diǎn)。

2.測定方法：取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液顯藍(lán)色在30s內(nèi)不褪，即得。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6。第二十二頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一3.數(shù)據(jù)處理：維生素C的百分含量為

c為滴定時(shí)碘滴定液的實(shí)際濃度，mol/L；V為所消耗碘滴定液的體積，ml；W為樣品的重量，g。若為維生素C片劑時(shí)，則維生素C的百分標(biāo)示含量為為平均片重，g；第二十三頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一二、亞硝酸鈉法例6-2《中國藥典》（2005年版）中鹽酸普魯卡因的含量測定。1.測定原理。在鹽酸酸性條件下，亞硝酸鈉液與鹽酸普魯卡因的芳伯氨基定量發(fā)生重氮化反應(yīng)，反應(yīng)式為：

用永停滴定法指示終點(diǎn)，由消耗亞硝酸鈉滴定液的用量計(jì)算鹽酸普魯卡因的含量。第二十四頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一2.測定方法。取本品約0.6g，精密稱定，照永停滴定法（2005年版附錄ⅦA），在15～25℃，用亞硝酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml的亞硝酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于27.28mg的C13H20N2O2·HCl。3.數(shù)據(jù)處理。

c為亞硝酸鈉滴定液的實(shí)際濃度，mol/L；

V為消耗亞硝酸鈉滴定液的體積，ml；

W為所稱樣品的重量，g。第二十五頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一三、銀量法例6-3《中國藥典》（2005年版）中氯化鈉的含量測定。1.測定原理以AgNO3為滴定液，用熒光黃作為吸附指示劑，測定NaCl的含量。2．測定方法取本品約0.12g，精密稱定，加水50ml溶解后，加糊精溶液(1→50)5ml與熒光黃指示液5～8滴，用AgNO3液(0.1mol/L)滴定，即得。每1mlAgNO3液(0.1mol/L)相當(dāng)于5.844mg的NaCl。數(shù)據(jù)處理

c為硝酸銀滴定液的濃度，mol/L；

V為測定時(shí)消耗硝酸銀滴定液的體積，ml；

W為所稱樣品的重量，g。第二十六頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一四、酸堿滴定法 例6-9《中國獸藥典》（2005年版）中乙酰水楊酸（阿司匹林）的含量測定。1.測定原理。將本品溶于中性乙醇后，以酚酞為指示劑，用0.1mol/L氫氧化鈉液直接滴定。滴定反應(yīng)式如下：

2.測定方法。取本品約0.4g，精密稱定，加中性乙醇(對酚酞指示液顯中性)20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氫氧化鈉液(0.1mol/L)滴定。每1ml氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于18.02mg的C9H8O4。第二十七頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一3.數(shù)據(jù)處理。

c為氫氧化鈉滴定液的實(shí)際濃度，mol/L；

V為消耗氫氧化鈉滴定液的體積，ml；

W為所稱供試品的重量，g。第二十八頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一五、非水滴定法

《中國藥典》（2005年版）中采用此法測定的藥物有：癸氟奮乃靜及其注射劑、鹽酸乙胺丁醇及其片劑和膠囊劑、鹽酸乙基嗎啡、鹽酸二甲雙胍、鹽酸二氧丙嗪、鹽酸丁卡因、鹽酸三氟拉嗪、鹽酸馬普替林、鹽酸去氯羥嗪、鹽酸可卡因、鹽酸可樂定、鹽酸丙米嗪、鹽酸布比卡因及其注射劑、鹽酸布桂嗪、鹽酸卡替洛爾、鹽酸甲氧明、鹽酸甲氯芬酯、鹽酸尼卡地平、鹽酸地芬尼多等。第二十九頁，共三十二頁，編輯于2023年，星期一例6-5《中國藥典》（2005年版）氫氯噻嗪的含量測定。（1）測定原理。氫氯噻嗪含有兩個(gè)磺酰胺基，聯(lián)結(jié)在N上的氫原子較活潑，具弱