艾滋病檢測原理和技術(shù)規(guī)范2023/6/91一、艾滋病與艾滋病病毒2023/6/92（有A～E多個亞型）與一種感染灰身白臉猴的猴免疫缺陷病毒（SIV）相似。HIV-1HIV-2Humanimmunodeficiencyvirus

HIV（有A～J，O1～O4多個亞型）與一種感染黑猩猩的猴免疫缺陷病毒（SIV）相似。2023/6/93艾滋病病毒感染后，可嚴重破壞人體的免疫系統(tǒng)，使人體喪失抵御各種疾病的能力，有利于各種病原體的侵入，從而導致各種嚴重的、難以治愈的機會性感染或腫瘤，最終導致死亡，病死率可達100％。2023/6/94HIV-1M組HIV-1O組HIV-2喀麥隆、加蓬HIV型別和亞型的分類進化與地區(qū)分布：西非、印度HIV2023/6/95基因亞型與感染途徑的關(guān)系2023/6/96艾滋病從感染到發(fā)病的一般過程2023/6/97二、艾滋病檢測的原理及方法2023/6/98各種檢測技術(shù)為艾滋病防治工作提供廣泛的技術(shù)支持平臺2023/6/99艾滋病實驗診斷方法2023/6/910各種診斷試劑特性2023/6/911硒標法金標法HIV抗體篩查試驗2023/6/912明膠顆粒凝集試驗（Particleagglutinationtest，PA）

2023/6/913PA的操作和結(jié)果判斷2023/6/9145

450/630nm下測定OD值混勻，加蓋，37℃溫育洗板3

加入底物第二次特異性結(jié)合4

加入終止液1

加入樣品洗板2

加入酶標記物加蓋，37℃溫育加蓋，37℃溫育第一次特異性結(jié)合酶聯(lián)免疫分析ELISA

（雙抗原夾心、兩步法）2023/6/915快速法可否單獨使用？《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》（2004版）：將PA、dot-EIA、膠體硒法納入快速檢測規(guī)范方法，因此可以使用。有研究指出：任何一種快速試劑可以篩查出99%以上的陰性樣本；兩種快速試劑均為陽性時，可以篩查出98%以上的陽性樣本；兩種快速試劑結(jié)果不一致時，可用ELISA復檢；單獨使用或兩種同時使用時，特異性差別無顯著意義。2023/6/916■

針對各種病毒蛋白的特異抗體■

區(qū)分ELISA真陽性與假陽性■

檢測HIV-1和HIV-2HIV抗體確證試驗WesternBlot免疫印跡法2023/6/917HIV的主要基因及其產(chǎn)物

（HIV標志物）2023/6/918ss-RNA2023/6/919全自動免疫印跡儀2023/6/920HIV抗體陽性診斷標準：■2條env（gp160/gp120+gp41）■1條env+p24p55p66p31p51gp120gp160gp41p17p24膜蛋白（env）核蛋白（gag）逆轉(zhuǎn)錄酶（pol）2023/6/921篩查試驗：診斷出陰性樣本，并為陽性/可疑樣本排除非特異條帶。復檢1（試劑A）：對陽性/可疑樣本排除操作誤差。復檢2（試劑B）：對陽性/可疑樣本排除試劑誤差。確證試驗：診斷出陽性樣本。篩查試驗和確證試驗的作用2023/6/922HIV/AIDS

診斷標準

（GB16000-1995）2023/6/9232023/6/924HIV！HIV？HIV感染母親所生嬰兒：分別于12個月、18個月追蹤檢測陰性者為陰性，18個月仍陽性者為陽性。2023/6/925三、艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范2023/6/926主要內(nèi)容：

樣品采集和處理

檢測方法（HIV抗體、病毒核酸、病毒載量、CD4、HIV抗原檢測）

安全防護、職業(yè)暴露質(zhì)量管理（質(zhì)量保證、質(zhì)量控制、質(zhì)量評價）實驗室質(zhì)量考評

HIV診斷試劑質(zhì)量評估2023/6/927篩查試驗（試劑A）陽性／可疑均陰性均陽性陰性重復檢測（試劑A+B）陰性陽性確證試驗篩查實驗室一陰一陽確證實驗室復核檢測（試劑A/B/C）陽性／可疑陰性篩查報告（陰性）確認報告（陰性）確認報告（陽性）2023/6/928HIV抗體檢測結(jié)果處理規(guī)范2023/6/929HIV待確證樣品HIV陽性確證報告原件感染者確認報告原件確認報告復印件備案篩查實驗室所在單位篩查實驗室所在單位確證實驗室篩查實驗室艾滋病樣本確證、報告流程：2023/6/930認真填寫各類表格（最好能打?。?，及時上報。2023/6/931各篩查實驗室每月5日前上報上月檢測數(shù)據(jù)：2023/6/932四、艾滋病檢測的質(zhì)量控制2023/6/933

行政支持

重視、投入、理解

實驗室規(guī)范化建設(shè)

規(guī)范、制度、程序

人員要求

資質(zhì)條件、培訓和輪訓質(zhì)量保證（QA）質(zhì)量控制（QC）

室內(nèi)質(zhì)控

質(zhì)控圖的建立和應用

檢驗期間核查

試劑對照、外部質(zhì)控品對照、平行雙樣結(jié)果關(guān)聯(lián)性（不同方法、不同實驗室結(jié)果、人群特征等）可實時校驗：樣品、試劑、儀器、操作等環(huán)節(jié)。質(zhì)量評價（EQA）

實驗室室間質(zhì)量考評2023/6/934■

建立各項規(guī)章制度和操作程序，定期檢查；■人員定期接受培訓和復訓，培養(yǎng)良好的業(yè)務素質(zhì)；對HIV實驗室的10項基本要求2023/6/935■儀器設(shè)備運作正常，定期檢定和校準，妥善維護；■樣品流轉(zhuǎn)有序，記錄詳細，保存規(guī)范；■采用合格試劑，經(jīng)常核查試劑質(zhì)量，正確保存和使用；■環(huán)境條件符合要求，有監(jiān)控有記錄；■嚴格按照規(guī)范和試劑說明書操作；■建立各類質(zhì)量記錄表格，資料保存完整，溯源性強；■堅持開展室內(nèi)質(zhì)控，參加室間比對和能力驗證；■安全防護、廢物處理措施落實，建立人員健康監(jiān)護檔案。2023/6/936■每個實驗室必須配備至少2種不同原理/不同廠家的試劑，其中一種必須是ELISA（第三代、雙抗原夾心、兩步法）?！龅谝淮魏Y查試驗推薦使用高敏感性的ELISA法，快速法可用于應急試驗或復核試驗。■按政府招標目錄采購，保存供應商的資質(zhì)證明文件，試劑批批檢報告?！龅怯浽噭┎少徍褪褂们闆r，注意保存條件并實行監(jiān)控?！鲈噭┖蜆悠窇珠_存放，過期試劑必須及時處理?！霾煌放啤⒉煌柕脑噭┎荒芑煊茫ò栃詫φ眨?。使用診斷試劑注意事項2023/6/937■嚴格按照說明書操作和判斷?！?/p>

實驗室環(huán)境條件（溫度、濕度）的控制。■

試劑使用前室溫平衡的重要性?！?/p>

正確使用恒溫設(shè)備（校準溫度、放置方式、放置位置）?！?/p>

固定樣品排列方式，固定對照品位置?！?/p>

統(tǒng)一加樣的方式方法（加樣器使用習慣、樣品加樣順序）?！?/p>

加樣過程避免污染（氣溶膠、加樣器移動路線）。■

按加樣順序加入各種試劑，加入質(zhì)控對照前必須搖勻?！?/p>

嚴格控制反應溫度和時間。實驗操作注意事項2023/6/938■每次實驗必須設(shè)立內(nèi)部質(zhì)控對照和外部質(zhì)控對照。■內(nèi)部對照質(zhì)控血清必須使用同批號試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清，其數(shù)量和結(jié)果控制范圍，按該試劑盒說明書的要求設(shè)立和