實(shí)驗(yàn)三光合作用的希爾反應(yīng)第一頁(yè)，共十頁(yè)，編輯于2023年，星期二離體葉綠體加到具有適當(dāng)氫受體（A）溶液中，光照后放出氧氣。

2H2O+2A2AH2+O2

實(shí)驗(yàn)中用的氧化劑A是2,6－二氯靛酚（2,6-D），是一種藍(lán)色染料，接受電子和H+后被還原成無(wú)色。在光下，葉綠體將2,6-D還原，從藍(lán)色到無(wú)色。通過(guò)測(cè)定其光密度的變化，可以得出葉綠體的還原能力。光葉綠體【實(shí)驗(yàn)原理】第二頁(yè)，共十頁(yè)，編輯于2023年，星期二Cl2OHClClNHOHClNOHO＋2H2O2＋O2光葉綠體氧化型二氯靛氛（藍(lán)色）還原型二氯靛氛（無(wú)色）第三頁(yè)，共十頁(yè)，編輯于2023年，星期二

DCMU(二氯苯基二甲基脲，dichlorophenyldimethylures,商品名為敵草隆，diuron)等除草劑是作用于光合作用光系統(tǒng)II中質(zhì)體醌QB結(jié)合部位。它們競(jìng)爭(zhēng)性地替換與DI蛋白結(jié)合著的質(zhì)體醌QB，導(dǎo)致電子傳遞受阻，抑制Hill反應(yīng)的發(fā)生。非環(huán)式光合磷酸化與假環(huán)式光合磷酸化均可被DCMU所抑制，而環(huán)式光合磷酸化則不被DCMU抑制。第四頁(yè)，共十頁(yè)，編輯于2023年，星期二菠菜葉片【實(shí)驗(yàn)材料】第五頁(yè)，共十頁(yè)，編輯于2023年，星期二實(shí)驗(yàn)器材：⑴研缽;⑵移液管;⑶離心機(jī);⑷722型分光光度汁;⑸500瓦燈泡實(shí)驗(yàn)試劑：(1)提取液(0.02MTris-HCl緩沖液，含有0.4M蔗糖，0.03MKCl，pH7.5)；(2)DCMu(用0.02MTris-HCI緩沖液配制成5μMDCMU溶液)；(3)2,6-D,即2,6-二氯靛酚(用0.02MTris-HCI緩沖液配制成0.003％2,6-D溶液)；(4)80％丙酮；(5)0.4M蔗糖等【實(shí)驗(yàn)器材與試劑】第六頁(yè)，共十頁(yè)，編輯于2023年，星期二葉綠體的提?、賹?g新鮮葉片去葉脈后剪碎，放于預(yù)冷的研缽，加入4mL預(yù)冷的提取液，研磨成勻漿，再加4mL預(yù)冷的提取液混勻，將所有的勻漿液用4層紗布過(guò)濾，棄去雜質(zhì)。②收集過(guò)濾液于離心管中，4℃1000rpm離心3min，收集上清液于一新的離心管，棄去沉淀。③4℃3000rpm離心5min，棄去上清液，將沉淀懸浮于冷的4mL提取液，即為葉綠體提取液。葉綠素含量的測(cè)定

取0.1ml葉綠體懸浮液于7ml離心管，用4.9ml80％丙酮稀釋到5ml，混勻后，在652nm下測(cè)定吸光度，來(lái)計(jì)算葉綠素含量。

C(mg/mL)=OD652×1/34.5×稀釋倍數(shù)用預(yù)先冷凍的提取液稀釋葉綠體懸浮液，總體積8mL，使葉綠體懸浮液濃度約相當(dāng)于葉綠素濃度為0.04mg/mL?！緦?shí)驗(yàn)步驟】第七頁(yè)，共十頁(yè)，編輯于2023年，星期二Hill反應(yīng)

取9支試管，包好黑紙并編號(hào)1-9，按下表所列試劑分別加入9支試管中。

提取緩沖液做參比，600nm讀取1號(hào)管光密度，分別取0.5mL和1mL葉綠體懸浮液放入2號(hào)和3號(hào)試管中，立即于600nm讀取光密度，再按表中要求加入葉綠體懸浮液于其它試管中，然后把黑紙剝掉,將4號(hào)、6號(hào)和8號(hào)管放在距光源20cm處，把5號(hào)、7號(hào)和9號(hào)管放在距光源60cm處（注意：試管放在盛有水的燒杯中），10分鐘后，立即用黑紙把試管包好放冰浴中，然后于600nm分別讀取光密度。試管號(hào)提取液/mL葉綠體/mLDCMu/mL2.6-D/mL14.0----1.024.50.5----34.01.0----4和53.50.5--1.06和73.01.0--1.08和9--1.03.01.0第八頁(yè)，共十頁(yè)，編輯于2023年，星期二【注意事項(xiàng)】葉綠體提?。?/p>

在冰浴低溫條件下操作，上清液和沉淀的保留與否。希爾反應(yīng):

每管反應(yīng)的總體積相同，且做好標(biāo)記；在反應(yīng)時(shí)，所加溶液為提取液稀釋的葉綠體懸浮液，與測(cè)定葉綠體含量時(shí)用丙酮稀釋不同；光照條件下取放試管時(shí)，千萬(wàn)注意不能將水濺到燈泡上（冷水濺到熱的燈泡上會(huì)引起燈泡爆炸）。

第九頁(yè)，共十頁(yè)，編輯于202