高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法測定阿托伐他汀

的血藥濃度【摘要】目的成立高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法測定阿托伐他汀血藥濃度的方式。方式采納純乙臘超聲提取，高速離心沉淀蛋白后，以乙月青-乙酸銨緩沖液作為流動(dòng)相，PhenomenexLuna3uC18(2)100A(150Xum)反相色譜柱，在正離子模式下以電噴霧電離串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行測定。結(jié)果血漿中阿托伐他汀的線性范圍為0.1-20ng/mL,定量限為0.1ng/mL。方式回收率為96%?103%，日間、日內(nèi)RSD均小于6%。結(jié)論本方式簡單、靈敏、準(zhǔn)確，適用于阿托伐他汀人體血藥濃度的檢測?！娟P(guān)鍵詞】阿托伐他汀血藥濃度高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)阿托伐他汀鈣片是他汀類血脂調(diào)劑藥，為3-羥基-3-甲基一戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑［1］，它能夠降低血漿膽固醇和脂蛋白水平，減少低密度脂蛋白的生成，臨床上用于家族性高膽固醇血癥、混合性高脂血癥等癥。因其降脂作用強(qiáng)，副作用小，在高脂血癥，專門是高膽固醇血癥的醫(yī)治中取得普遍應(yīng)用［2］。本文成立了高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法測定血漿樣品中的阿托伐他汀，本法專靈敏度高、重現(xiàn)性好，樣品處置方式簡便?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。圖1阿托伐他汀的結(jié)構(gòu)式Fig.1StructureofAtorvastatin1實(shí)驗(yàn)部份1.1材料和試劑阿托伐他汀標(biāo)準(zhǔn)品購自中國藥品生物制品檢定所；前處置所用乙臘為分析純，流動(dòng)相的乙臘為色譜純(德國MERCK)；實(shí)驗(yàn)用水為超純水，由Milli-Q系統(tǒng)制作(美國Millipore公司)。1.2液相色譜條件液相色譜儀器為島津ProminenceUFLC；色譜柱選用PhenomenexLuna3uC18(2)100A(150Xum)；柱溫40°C；流動(dòng)相：乙臘一乙酸銨緩沖液(乙酸銨5mmol/L、甲酸0.5%(v/v))(體積比6：4),等度洗脫；進(jìn)樣量10mL；流速維持在0.3mL/min。1.3質(zhì)譜條件質(zhì)譜儀器為美國AB公司的API4000Q-trap；電離方式：ESI(+)；選擇多重反映監(jiān)(MRM)；電離電壓5500V,輔助加熱溫度500C,氣簾氣30psi,霧化氣3psi，碰撞氣：中等，離子源氣體1：50psi,離子源氣體2：60psi。阿托他汀在ESI(+)[M+H]+的MRM模式下的質(zhì)譜參數(shù)見表1。1.4血漿樣品處置mm濾膜，供LC-MS-MS分析。表1阿托伐他汀在ESI(+)[M+H]+的MRM模式下的質(zhì)譜參數(shù)Table1TestparametersforAtorvastatininMRM大定量離子對(duì)(quantitativeionpair)2結(jié)果與討論2.1方式的線性范圍、相關(guān)性及檢出限實(shí)驗(yàn)以在血漿空白樣品基體中六點(diǎn)添加標(biāo)準(zhǔn)品法制作校正曲線,7點(diǎn)添加水平別離是0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL。按本文方式進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果說明，方式此范圍內(nèi)線性相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=0.9998，當(dāng)信噪比S/NN10時(shí)，定量下限LOQ為0.1ng/mL。2.2方式的周密度和回收率血漿樣品各6份，按1.4步驟處置在同日內(nèi)重復(fù)測定5次，并持續(xù)5天測定，計(jì)算日內(nèi)、日間的周密度。取得的日內(nèi)周密度(RSD%)別離為2.6二、3.1一、1.97,日間周密度別離為3.5五、5.6五、4.98。阿托伐他汀0.2ng/mL、2ng/mL、10ng/mL三個(gè)水平濃度的測定回收率結(jié)果見表2。表2空白血漿阿托伐他汀的添加回收率和周密度(n=6)Table2RecoveriesandprecisionsofAtorvastatinatdifferentfortifiedlevels(n=6)2.3穩(wěn)固性實(shí)驗(yàn)取空白血漿.精準(zhǔn)加入適量的阿托伐他汀標(biāo)準(zhǔn)溶液，別離配制成濃度為0.5ng/mL和2ng/mL血漿溶液，按“”項(xiàng)下血漿處置方式操作，別離于0、二、4、八、10h時(shí)進(jìn)行色譜分析，記錄峰面積。結(jié)果，RSD別離為3.56%和4.14%。說明樣品血漿溶液在10h內(nèi)穩(wěn)固。圖2阿托伐他汀在MRM條件下二種離子的譜圖Fig.2TwoionchromatogramsofAtorvastatininMRM2.4實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化討論實(shí)驗(yàn)中比較了甲醇一乙酸銨緩沖液、乙臘一乙酸銨緩沖液、甲醇一水和乙臘一水[3-6]四種流動(dòng)相體系，結(jié)果說明，以乙臘一乙酸銨緩沖液作為流動(dòng)相取得的峰型最好，出峰時(shí)刻也較穩(wěn)固。這可能由于水相中甲酸提高了待測物在ESI正離子電噴霧中的離子化效率，乙酸銨那么使檢測物出峰時(shí)刻較為穩(wěn)固。因此本文選擇用乙臘一乙酸銨緩沖液作為流動(dòng)相，取得的譜圖峰形的對(duì)稱、出峰時(shí)刻和靈敏度均較理想(見圖2)。參考文獻(xiàn)趙冰.阿托伐他汀的臨床研究進(jìn)展[J].中國藥房，2020,21(24):203-204.PloskerGL ，WagstafAJ.Fluvastatin:areviewofitspharmaeologyanduseinthemanagementoghypereholesterolaemia[J].Drugs,1996,51:433.姜楠，楊永革，許雪廷，等LC-MS-MS法測定人血漿中阿托伐他汀濃度[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志2020,29(1):15-17.胡曉玲，李環(huán)德.UPLC-MS/MS法測定健康人血漿中的阿托伐他汀濃度及藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究[J].中南藥學(xué)，2020，6(4)：400.TatarS,AtmacaS.Determinationofamlo