液相色譜應用第一頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三高效液相色譜

應用第二頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三高效液相色譜法的

發(fā)展歷史第三頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三

在所有色譜技術中，液相色譜是最早（1903）發(fā)明的。起初，在常壓下操作的液相色譜，分離一個樣品往往長達幾小時至幾十小時，因此工作效率很低。第四頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三

人們曾對這種經(jīng)典液相色譜法試用了柱前加壓或柱后減壓的辦法來提高流速，以縮短分離時間，但是結果失敗了。第五頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三因為，根據(jù)液相色譜理論，隨著載液（流動相）流速的提高，理論塔板高度則增大，所以柱效會明顯降低。第六頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三隨著生產(chǎn)技術的提高，人們制成了細小（<10μm）而高效的填充物，從而使柱效大大提高。但是隨著填充物（固定相）粒度的減小，柱阻力迅速增大。為了獲取一定的流速（1-5ml/min)，必須解決高壓輸液設備。第七頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三隨著工業(yè)技術的發(fā)展，高效固定相、高壓泵和高靈敏度檢測器以及電子技術和計算機技術的應用，逐步實現(xiàn)了液相色譜分析的高效、高速、高靈敏和自動化操作。被稱之為高效液相色譜（HPLC）或現(xiàn)代液相色譜，以區(qū)別于經(jīng)典液相色譜。1969年，第一代商品化儀器誕生。第八頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三高效液相色譜法

與氣相色譜法

的比較第九頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三（l）氣相色譜法分析對象只限于分析氣體和沸點較低的化合物，它們僅占有機物總數(shù)的20％。對于占有機物總數(shù)近80％的那些高沸點、熱穩(wěn)定性差、摩爾質量大的物質，目前主要采用高效液相色譜法進行分離和分析。第十頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三

(2)氣相色譜采用流動相是惰性氣體，它對組分沒有親和力，即不產(chǎn)生相互作用力，僅起運載作用。而高效液相色譜法中流動相可選用不同極性的液體，選擇余地大，它對組分可產(chǎn)生一定親和力，并參與固定相對組分作用的劇烈競爭。因此，流動相對分離起很大作用，相當于增加了一個控制和改進分離條件的參數(shù)，這為選擇最佳分離條件提供了極大方便。第十一頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三HPLC在各領域的主要應用應用領域分析對象舉例環(huán)境常見無機陰陽離子、多環(huán)芳烴、多氯聯(lián)苯、硝基化合物、有害重金屬及其形態(tài)、除草劑、農(nóng)藥、酸沉降成分。農(nóng)業(yè)土壤礦物成分、肥料、飼料添加劑、茶葉等農(nóng)產(chǎn)品中無機和有機成分。石油烴類族組成、石油中微量成分。化工無機化工產(chǎn)品、有機化工產(chǎn)品、合成高分子化合物、表面活性劑、洗滌劑成分、化妝品、染料。材料液晶材料、合成高分子材料。食品無機陰陽離子、有機酸、氨基酸、糖、維生素、脂肪酸、香料、甜味劑、防腐劑、人工色素、病原微生物、霉菌毒素、多核芳烴。生物氨基酸、多肽、蛋白質、核糖核酸、生物胺、多糖、酶、天然高分子化合物。醫(yī)藥人體化學成分、各類合成藥物成分、各種天然植物和動物藥物化學成分。第十二頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三第十三頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三第十四頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三第十五頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三二、液相色的流相

1.流動相特性（1）液相色譜的流動相又稱為：淋洗液，洗脫劑。流動相組成改變，極性改變，可顯著改變組分分離狀況；

第十六頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三（2）親水性固定液常采用疏水性流動相，即流動相的極性小于固定相的極性，稱為正相液液色譜法，極性柱也稱正相柱。第十七頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三（3）若流動相的極性大于固定液的極性，則稱為反相液液色譜，非極性柱也稱為反相柱。組分在兩種類型分離柱上的出峰順序相反。第十八頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三2.流動相類別

按流動相組成分：單組分和多組分；

按極性分：極性、弱極性、非極性；

按使用方式分：固定組成淋洗（等梯度）梯度淋洗。

第十九頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三常用溶劑：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、甲醇、水。采用二元或多元組合溶劑作為流動相可以靈活調(diào)節(jié)流動相的極性或增加選擇性，以改進分離或調(diào)整出峰時間。第二十頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三3.流動相選擇

在選擇溶劑時，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。采用正相液-液分配分離時：首先選擇中等極性溶劑，若組分的保留時間太短，降低溶劑極性，反之增加。也可在低極性溶劑中，逐漸增加其中的極性溶劑，使保留時間縮短。

第二十一頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三常用溶劑的極性順序：水(最大)>甲酰胺>甲醇>乙腈>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六環(huán)>四氫呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>異丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>環(huán)己烷>己烷>煤油(最小)第二十二頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三4.選擇流動相時應注意的幾個問題（1）盡量使用高純度試劑作流動相，防止微量雜質長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。第二十三頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三（2）避免流動相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。

第二十四頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三（3）試樣在流動相中應有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。

第二十五頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三（4）流動相同時還應滿足檢測器的要求。當使用紫外檢測器時，流動相不應有紫外吸收。第二十六頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三高效液相色譜的

分類第二十七頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三液-固吸附色譜

liquid-solidadsorptionchromatography

第二十八頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三第二十九頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三基本原理：組分在固定相吸附劑上的吸附與解吸；

適用于分離相對分子質量中等的油溶性試樣，對具有官能團的化合物和異構體有較高選擇性；

缺點：非線形等溫吸附常引起峰的拖尾；

第三十頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三液-液分配色譜

liquid-liquidpartitionchromatography

第三十一頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三第三十二頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三流動相：對于親水性固定液，采用疏水性流動相，即流動相的極性小于固定液的極性（正相

normalphase），反之，流動相的極性大于固定液的極性（反相

reversephase）。正相與反相的出峰順序相反；

第三十三頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三固定相：早期涂漬固定液，固定液流失，較少采用；

化學鍵合固定相：（將各種不同基團通過化學反應鍵合到硅膠（擔體）表面的游離羥基上。C-18柱（反相柱）。第三十四頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三

乳酸中的苯甲酸和山梨酸測定

色譜柱：C18柱流動相：甲醇-（0.02M乙酸銨）10-90檢測器：紫外

（236nm）流速：1.0ml/min進樣量：10μl組分：1.乳酸2.苯甲酸3.山梨酸第三十五頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三

聚合級丙烯酰胺中微量雜質的測定

色譜柱：C18柱流動相：乙腈-水25-75流速：1.0ml/min檢測器：示差折光進樣量：10μl組分：1.丙烯醛2.丙烯腈3.丙烯酰胺

第三十六頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三雜醇油HPLC曲線

色譜柱：C18流動相：乙腈-水

（40-60）流速：1.0ml/min進樣量：5μl組分：1.乙醇2..丙醇3.丁醇4.戊醇5.己醇第三十七頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三

特種油脂成分分析

色譜柱：C18柱流動相：乙腈-丙酮30-70流速：1.0ml/min檢測器：示差折光進樣量：10μl組分：1.1，3-二乙酸-2-油酸甘油酯2.1，3二油酸-2-乙酸甘油酯

3.三乙酸甘油脂4.1，3-二乙酸-2-硬酯酸甘油酯

5.1，3二硬酯酸-2-乙酸甘油酯6.三油酸甘油脂

第三十八頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三

水溶性未知混合物色譜柱：（美國）YPW-C18流動相：純水檢測器：示差折光流速：1.0ml/min進樣量：10μl組分：1.甲醇2..乙醇3.硫醇4.異丙醇第三十九頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三

鄰甲苯胺中的甲苯

色譜柱：（美國）NH2

基柱流動相：二氯甲烷-己烷20-80檢測器：紫外

（254nm）流速：1.0ml/min進樣量：10μl組分：1.鄰甲苯胺2..甲苯

第四十頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三

兩種紫外吸收劑的HPLC曲線

對比色譜柱：（美國）CN基柱流動相：環(huán)己烷-異丙醇90-10檢測器：紫外

（230nm）流速：1.0ml/min進樣量：10μl組分：1.黑：

合成樣2..紅：對比樣第四十一頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三離子交換色譜

ion-exchangechromatography第四十二頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三第四十三頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三基本原理：組分在固定相上發(fā)生的反復離子交換反應；組分與離子交換劑之間親和力的大小與離子半徑、電荷、存在形式等有關。親和力大，保留時間長；陽離子交換：R—SO3H+M+=R—SO3M+H+

陰離子交換：R—NR4OH+X-=R—NR4X+OH-

應用：離子及可離解的化合物，氨基酸、核酸等。第四十四頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三

自來水離子色譜圖色譜柱：（美國）PRP-X100陰離子柱流動相：0.4MPHBA（Bis-Tris緩沖體系）檢測器：電導流速：1.0ml/min進樣量：2μl組分：1.系統(tǒng)峰（水）2..氯離子3.硝酸根4.硫酸根

第四十五頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三羥基亞乙基膦酸中甲酸、乙酸的測定色譜柱：（美）PRP－X100陰離子柱流動相：Bis-Tris緩沖液（0.4MPH=8.2）l流速：1.0ml/min檢測器：電導進樣量：2μl組分：1.甲酸2..乙酸3.膦酸第四十六頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三體積排阻色譜凝膠滲透色譜（GPC)

size-exclusionchromatography第四十七頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三第四十八頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三原理：按分子大小分離。小分子可以擴散到凝膠空隙，由其中通過，出峰最慢；中等分子只能通過部分凝膠空隙，中速通過；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰。第四十九頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三

右旋糖酐的GPC曲線

色譜柱：（日Shodex）SB-806MHQGPC柱流動相：Na2SO4(0.7%)流速：1.0ml/min檢測器：示差折光進樣量：10μl

峰序號重均分子量數(shù)均分子量分子量分布相對含量1#1608665902.4495.472#171813741.254.35

第五十頁，共五十九頁，編輯于2023年，星期三

用GPC研究聚合物的共