紫外可見光譜儀操作使用介紹第一頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三基本知識(shí)電磁輻射與紫外光譜光是一種電磁輻射，從波長(zhǎng)極短的宇宙射線至波長(zhǎng)很長(zhǎng)的無(wú)線電構(gòu)成一個(gè)連續(xù)光譜。部分電磁輻射范圍遠(yuǎn)紫外100~200nm近紫外200~400nm可見光400~800nm近紅外800~2500nm遠(yuǎn)紅外2500~3500nm紫外光譜由分子外層電子在不同能級(jí)間躍遷產(chǎn)生。第二頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三朗伯—比爾定律(Lambert-beer)A=吸光度I0=入射光強(qiáng)度I=入射光通過(guò)樣品后的透射強(qiáng)度ε＝摩爾吸光度（cm-1.m-1）C=摩爾濃度(mol)l=光程(cm)第三頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三當(dāng)產(chǎn)生紫外吸收的物質(zhì)為未知物時(shí)，其吸收強(qiáng)度可用表示:A=吸光度

c為100ml溶劑中溶質(zhì)的克數(shù)

l=光程(cm)

第四頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三選取溶劑需注意下列幾點(diǎn)：

1)當(dāng)光的波長(zhǎng)減小到一定數(shù)值時(shí)，溶劑會(huì)對(duì)它產(chǎn)生強(qiáng)烈的吸收(即溶劑不透明)，這即是所謂“端吸收”，樣品的吸收帶應(yīng)處于溶劑的透明范圍。透明范圍的最短波長(zhǎng)稱透明界限。

2)樣品在溶劑中能達(dá)到必要的濃度(此濃度值決定于樣品摩爾吸收系數(shù)的大小)。

3)要考慮溶質(zhì)和溶劑分子之間的作用力。一般溶劑分子的極性強(qiáng)則與溶質(zhì)分子的作用強(qiáng)。因此應(yīng)盡量采用低極性溶劑。

4)為與文獻(xiàn)對(duì)比，宜采用文獻(xiàn)中所使用的溶劑。

5)其它如溶劑的揮發(fā)性、穩(wěn)定性、精制的再現(xiàn)性等。第五頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三第六頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三基本原理電子躍遷產(chǎn)生紫外－可見吸收光譜

分子的總能量是其鍵能(電子能)、振動(dòng)能和轉(zhuǎn)動(dòng)能的總和，當(dāng)分子從輻射的電磁波吸收能量之后，分子會(huì)從低能級(jí)躍遷到較高的能級(jí)。吸收頻率決定于分子的能級(jí)差，其計(jì)算式為：?E=hυ或?E=hC/λ式中?E為分于躍遷前后能級(jí)差；

υ、λ分別為所吸收的電磁波的頻率及波長(zhǎng)

C為光速；

h為普朗克常數(shù)。第七頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三分子的電子狀態(tài)能約為8.38×104~8.38×105(J/mol)(4.19×105相當(dāng)于286nm處發(fā)生紫外吸收)

分子振動(dòng)能約為4.19×103~2.09×104(J/mol)，分子轉(zhuǎn)動(dòng)能約為419~41.9(J/mol)。雖然每項(xiàng)能量不同,且有一定的變化范圍,但其變化均是量子化的。由上可見,分子從電子基態(tài)躍遷到電子激發(fā)態(tài)的?E遠(yuǎn)大于振動(dòng)能級(jí),轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)的?E。因此,電子躍遷所吸收的電磁波是吸收光譜中頻率最高的,即紫外可見光.第八頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三紫外吸收譜帶的形狀紫外吸收譜帶之所以是較寬,純的形狀,這可通過(guò)下圖加以說(shuō)明。第九頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三以雙原子分子為例位能曲線上的橫線表示振動(dòng)能級(jí)(轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)未表示)。分子吸收電磁波能量后,電子從基態(tài)s0躍遷到激發(fā)態(tài),其同時(shí)伴隨有振動(dòng)能級(jí)的躍遷,躍遷時(shí)核間距離保持不變(Franck-Condon原理)。它們和原能級(jí)(s0，v0)之間的能級(jí)差分別為I、II、III。由于此時(shí)還伴隨著轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)的躍遷,所以圍繞I、II、III,有一系列分立的轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)躍遷譜線(圖a),這種譜只能在稀薄氣態(tài)下測(cè)得,當(dāng)氣態(tài)壓力增大,即濃度增大時(shí),轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)受限制,形成連續(xù)曲線(b)，在低極性溶劑中測(cè)定紫外吸收,還能保留一些紫外吸收的精細(xì)結(jié)構(gòu)(c),在高極性溶劑中作圖,精細(xì)結(jié)構(gòu)完全消失(圖d)。第十頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三多原子分子電子能級(jí)躍遷的種類有機(jī)化合物外層電子為:σ鍵的σ電子;π鍵的π電子;未成鍵的孤電子對(duì)n電子,它們所可能發(fā)生的躍遷,定性地可用下圖表示。第十一頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三基本術(shù)語(yǔ)

a.生色團(tuán)(chromophore)：產(chǎn)生紫外(或可見)吸收的不飽和基團(tuán)，如C＝C、C＝O、NO2等。

b.助色團(tuán)(auxochrome)：其本身是飽和基團(tuán)(常含雜原子)，它連到生色團(tuán)時(shí)，能使后者吸收波長(zhǎng)變長(zhǎng)或吸收強(qiáng)度增加(或同時(shí)兩者兼有)，如：OH、NH2、Cl等。

c.深色位移(bathochromicshift)：由于基團(tuán)取代或溶劑效應(yīng)，最大吸收波長(zhǎng)變長(zhǎng)。深色位移亦稱為紅移(redshift)。第十二頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三d.淺色位移(hypsochromicshift)由于基團(tuán)取代或溶劑效應(yīng)，最大吸收波長(zhǎng)變短。淺色位移亦稱為藍(lán)移(blueshift)。e.增色效應(yīng)(hyperchromiceffect)使吸收強(qiáng)度增加的效應(yīng)。f.減色效應(yīng)(hypochromiceffect)使吸收強(qiáng)度減小的效應(yīng)。第十三頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三各類化合物的紫外吸收

簡(jiǎn)單分子

A.飽和的有機(jī)化合物

a.飽和的碳?xì)浠衔镂ㄒ豢砂l(fā)生的躍遷為σ→σ*

，能級(jí)差很大，紫外吸收的波長(zhǎng)很短，屬遠(yuǎn)紫外范圍。如甲烷、乙烷的最大吸收分別為125nm、135nm。

b.含雜原子的飽和化合物雜原子具有孤電子對(duì)，一般為助色團(tuán)，這樣的化合物有n→σ*躍遷。但大多數(shù)情況，它們住近紫外區(qū)仍無(wú)明顯吸收。硫醚、二硫化物、硫醇、胺、溴化物、碘化物在近紫外有弱吸收，但其大多數(shù)均不明顯。第十四頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三B.含非共軛烯、炔基團(tuán)的化合物這些化合物都含π電子，可以發(fā)生π→π*躍遷，其紫外吸收波長(zhǎng)較σ→σ*為長(zhǎng)，但乙烯吸收在165nm、乙炔吸收在173nm。因此，它們雖名為生色團(tuán)，但若無(wú)助色團(tuán)的作用，在近紫外區(qū)仍無(wú)吸收。C.含不飽和雜原子的化合物在這類化合物中，σ→σ*、π→π*屬遠(yuǎn)紫外吸收，n→σ*亦屬遠(yuǎn)紫外吸收，不便檢測(cè)，但n→π*躍遷的吸收波長(zhǎng)在紫外區(qū)，可以檢測(cè)。雖然n→π*的躍遷為禁阻躍遷，吸收強(qiáng)度低，但畢竟其吸收位置較佳，易于檢測(cè)。因此，在紫外鑒定中是不應(yīng)忽視的。第十五頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三第十六頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三含有共軛體系的分子

A.共軛體系的形成使吸收移向長(zhǎng)波方向右圖顯示了從乙烯變成共軛丁二烯時(shí)的電子能級(jí)的變化。原烯基的兩個(gè)能級(jí)各自分裂為兩個(gè)新的能級(jí)，在原有π→π*躍遷的長(zhǎng)波方向出現(xiàn)新的吸收。一般把共軛體系的吸收帶稱為K帶(源于德文konjugierte)。K帶對(duì)近紫外吸收是重要的，因其出現(xiàn)在近紫外范圍，且摩爾吸收系數(shù)也高，一般ε＞10000。第十七頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三共軛烯吸收的計(jì)算值第十八頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三第十九頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三注意：用上述規(guī)則進(jìn)行計(jì)算時(shí)，有計(jì)算誤差較大的例外情況。當(dāng)存在環(huán)張力或兩個(gè)烯鍵不處于同一平面而影響共扼體系的形成時(shí)，計(jì)算值都偏離實(shí)測(cè)，菠烯即是一例：因兩個(gè)環(huán)的張力，提高了電子基態(tài)的能量。第二十頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三共軛醛、酮紫外吸收(K帶)的計(jì)算第二十一頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三第二十二頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三第二十三頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三α，β－不飽和酸、酯第二十四頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三一些共軛羧酸的UV吸收：化合物實(shí)測(cè)值（ε×104）計(jì)算值CH2=CHCO2H200（1.0）CH3CH=CHCO2H205（1.4）

=CHCO2H220（1.4）222（217＋5）CH3(CH=CH)2CO2H254（2.5）256（30＋18＋208）CH3(CH=CH)3CO2H294（3.7）286（60＋18＋208）CH3(CH=CH)4CO2H332（4.9）316（90＋18＋208）第二十五頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三芳香族化合物苯苯環(huán)顯示三個(gè)吸收帶，它們均起源于苯環(huán)π→π*

的躍遷，如下表所示。其中II、III為禁戒躍遷。第二十六頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三烷基苯烷基無(wú)孤電子對(duì)，但它的超共軛效應(yīng)使苯環(huán)B吸收帶略有深色位移，對(duì)E吸收帶效應(yīng)不明顯。苯環(huán)上有－CH2OH、－(CH2)nOH、－CH2NH2等取代時(shí)，助色團(tuán)被一個(gè)或多個(gè)CH2與苯環(huán)隔離開了，因此它們的紫外吸收光譜與甲苯相近。苯環(huán)上有－CH2ph、－CH2CHO、－CH2CH=CH2等取代基時(shí)，生色團(tuán)被CH2隔開而不能和苯環(huán)形成共軛體系，因此紫外吸收不發(fā)生紅移。CH2的這種作用稱為“隔離效應(yīng)”。第二十七頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三助色團(tuán)在苯環(huán)上取代的衍生物助色團(tuán)有孤電子對(duì)，它能與苯環(huán)電子共軛，所以助色團(tuán)在苯環(huán)上的取代使B帶、E帶均移向長(zhǎng)波方向，B帶被強(qiáng)化，同時(shí)精細(xì)結(jié)構(gòu)常消失。第二十八頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三第二十九頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三生色團(tuán)在苯環(huán)上取代的衍生物生色團(tuán)在苯環(huán)上取代后，苯環(huán)的大π鍵和生色團(tuán)的鍵相連產(chǎn)生更大的共扼體系，這使B帶產(chǎn)生強(qiáng)烈的深色位移且在200－250nm之間出現(xiàn)一個(gè)K帶(ε＞10000)，有時(shí)B帶淹沒在K帶之中。若按對(duì)E2帶深色位移的大小，生色團(tuán)排列的順序?yàn)椋?/p>

NO2>CHO>COCH3>CO2H>COO->CN

上述生色團(tuán)都是苯環(huán)的間位定位取代基。第三十頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三第三十一頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三多取代苯環(huán)a.對(duì)位取代當(dāng)兩個(gè)取代基屬相同類型時(shí)，雙取代的最長(zhǎng)吸收波長(zhǎng)近似為兩者單取代時(shí)的最長(zhǎng)波長(zhǎng)。當(dāng)兩個(gè)取代基類型不同時(shí)(即一個(gè)是間位定位取代基，另一個(gè)是鄰、對(duì)位定位取代基)，兩個(gè)取代所產(chǎn)生的深色位移大于單個(gè)取代基產(chǎn)生的深色位移之和。這種現(xiàn)象可用共振效應(yīng)來(lái)解釋：第三十二頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三鄰位或間位取代此時(shí)兩個(gè)基團(tuán)產(chǎn)生的深色位移近似等于它們單取代時(shí)產(chǎn)生的深色位移之和。第三十三頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三第三十四頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三雜芳環(huán)化合物五員雜芳環(huán)按照呋喃、吡咯、噻吩的順序增強(qiáng)芳香性，其紫外吸收也沿此順序逐漸接近于苯的吸收。在上述三種雜芳環(huán)中，硫的電子較氮、氧能更好地和二烯的π電子共軛，因此噻吩的紫外吸收在最長(zhǎng)波長(zhǎng)。生色團(tuán)、助色團(tuán)的取代，導(dǎo)致五員雜芳環(huán)的紫外吸收發(fā)生較大的變化(深色位移和增色效應(yīng))。吡啶的共軛體系和苯環(huán)相類似，故吡啶的紫外吸收類似于苯的紫外吸收，吡啶在251nm處的吸收強(qiáng)，ε＝2000，也顯示精細(xì)結(jié)構(gòu)。第三十五頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三第三十六頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三紫外譜圖的解析隔離效應(yīng)與加和規(guī)律設(shè)A為生色團(tuán)，B為生色團(tuán)或助色團(tuán)。當(dāng)A與B相連生成A－B時(shí)，若B為生色團(tuán)，二者形成更大的共軛體系；若B為助色團(tuán)，助色團(tuán)的孤電子對(duì)與A形成p、π共軛，相比于A，A－B出現(xiàn)新的吸收(一般均為強(qiáng)化了的吸收)。設(shè)C為不含雜原子的飽和基團(tuán)，在A－C－B結(jié)構(gòu)中，C阻止了A與B之間的共軛作用，亦即C具有隔離效應(yīng)。從另一方面來(lái)看，A－C－B的紫外吸收就是A、B紫外吸收之加和。這稱為“加和規(guī)律”。第三十七頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三紫外譜圖提供的結(jié)構(gòu)信息紫外譜圖提供的主要信息是有關(guān)該化合物的共軛體系或某些碳基等的存在的信息?？梢源致缘貧w納為下述幾點(diǎn)：①化合物在220－800nm內(nèi)無(wú)紫外吸收，說(shuō)明該化合物是脂肪烴、脂環(huán)烴或它們的簡(jiǎn)單衍生物(氯化物、醇、醚、羧酸等)，甚至可能是非共軛的烯。②220－250nm內(nèi)顯示強(qiáng)的吸收(ε近10000或更大)，這表明K帶的存在。即存在共扼的兩個(gè)不飽和鍵(共軛二烯或α，β－不飽和醛、酮)。第三十八頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三③250－290nm內(nèi)顯示中等強(qiáng)度吸收，且常顯示不同程度的精細(xì)結(jié)構(gòu)，說(shuō)明苯環(huán)或某些雜芳環(huán)的存在。④250－350nm內(nèi)顯示中、低強(qiáng)度的吸收，說(shuō)明碳基或共軛羰基的存在。⑤300nm以上的高強(qiáng)度吸收，說(shuō)明該化合物具有較大的共軛體系。若高強(qiáng)度吸收具有明顯的精細(xì)結(jié)構(gòu)。說(shuō)明稠環(huán)芳烴、稠環(huán)雜芳烴或其衍生物的存在。第三十九頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三解析紫外譜圖方法及有關(guān)注意事項(xiàng)a.紫外光譜也是吸收光譜，解析譜圖時(shí)，應(yīng)同時(shí)顧及吸收帶的位置、強(qiáng)度和峰的形狀三個(gè)方面：從吸收帶位置可估計(jì)產(chǎn)生該吸收的共軛體系的大??；吸收強(qiáng)度有助于K帶、B帶和R帶的識(shí)別；從吸收帶形狀可幫助判斷產(chǎn)生紫外吸收的基團(tuán)。如某些芳環(huán)衍生物，在峰形上顯示一定程度的精細(xì)結(jié)構(gòu)。第四十頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三b.立體位阻的作用常使一些共軛體系的吸收帶發(fā)生明顯的藍(lán)移。這是由于共軛體系的共平面性受到破壞所致。第四十一頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三C.介質(zhì)的影響在進(jìn)行紫外測(cè)定時(shí)，介質(zhì)常有較重要的影響?？偟恼f(shuō)來(lái)，相對(duì)于該化合物蒸汽的紫外吸收，低極性溶劑的溶液其紫外吸收變化小，高極性溶劑的溶液其紫外吸收變化大，且精細(xì)結(jié)構(gòu)消失。因此一般應(yīng)盡量采用低極性溶劑。第四十二頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三①n→π*躍遷，當(dāng)溶劑極性增強(qiáng)時(shí)，有明顯的藍(lán)移，其原因?yàn)榛衔锘鶓B(tài)較激發(fā)態(tài)極性強(qiáng)，它和極性溶劑形成較強(qiáng)烈的氫鍵，從而增加了躍遷的能量，導(dǎo)致藍(lán)移。

第四十三頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三②π→π*躍遷，當(dāng)溶劑極性增強(qiáng)時(shí)，常有紅移(不如n→π*躍遷溶劑極性增加時(shí)的藍(lán)移明顯)。其原因?yàn)榧ぐl(fā)態(tài)極性較基態(tài)大，當(dāng)溶劑極性增加時(shí)，激發(fā)態(tài)因生成較強(qiáng)的氫鍵，能量降低較多，因而有紅移。第四十四頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三③苯環(huán)E2帶(204nm)的溶劑效應(yīng)需視衍生物個(gè)取代基的性質(zhì)而定。取代基為鄰、對(duì)位取代基時(shí)，溶劑效應(yīng)很??；取代基為間位取代基時(shí)，隨溶劑極性的增加而產(chǎn)生紅移。第四十五頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三④對(duì)具有酸堿性的一些有機(jī)物，如：酚、苯胺等，溶液的PH值對(duì)其吸收位置有很明顯的影響。⑤最常用的標(biāo)推譜圖仍為薩特勒(Sadtler)紫外譜圖，因它同時(shí)有核磁共振氫譜、核磁共振碳譜、紅外譜，且有上述譜圖的綜合索引，因此查閱薩特勒譜圖是十分方便的，其查閱方式和查薩特勒紅外譜相似。第四十六頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三紫外光譜應(yīng)用舉例紫外光譜在決定一系列維生素、抗菌素及一些天然物結(jié)構(gòu)曾起過(guò)重要作用，如維生素A1、A2、B12、B1、青霉素、鏈霉素、土霉素、螢火蟲尾部的發(fā)光物質(zhì)等。例如：CS2＋CH3CHOC5H10N2S2

有兩種可能結(jié)構(gòu)，利用UV譜進(jìn)行判斷。NH3第四十七頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三(A)(B)解：先選取兩個(gè)模型化合物λmax：276（2.1×104）

246（8×103）λmax：217（8000）實(shí)測(cè)未知物（A或B）的UV數(shù)據(jù)為：由此推測(cè)為化合物A。λmax：288（1.28×104）

243（8000）第四十八頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三松香酸235～248nm左旋海松酸260～283nm紫外吸收光譜用來(lái)決定雙鍵的位置，既簡(jiǎn)單又有效，例如：第四十九頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三又如：α紫羅蘭酮β紫羅蘭酮β紫羅蘭酮由于雙鍵共軛，其紫外吸收波長(zhǎng)較α紫羅蘭酮明顯地到了長(zhǎng)波方向。第五十頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三UV-1201紫外可見分光光度計(jì)的使用一、整機(jī)結(jié)構(gòu)UV----1201紫外可見分光光度計(jì)分光光度計(jì)主機(jī)由光源、單色器、樣品室、檢測(cè)系統(tǒng)、電機(jī)驅(qū)動(dòng)、計(jì)算機(jī)接口，電源等部分組成。第五十一頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三軟件的啟動(dòng)：?jiǎn)?dòng)UV----1201紫外可見分光光度計(jì)應(yīng)用程序，軟件將自動(dòng)進(jìn)入到自檢畫面，自檢前請(qǐng)先將儀器預(yù)熱至少10分鐘。

第五十二頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三基本操作：設(shè)置換燈點(diǎn)：（1）在“設(shè)置---儀器”菜單欄中可以設(shè)置換燈點(diǎn)，建議除特殊測(cè)量（如氘燈譜線）外不要更改。（2）開關(guān)氘燈和鎢燈：如果長(zhǎng)時(shí)間不用氘燈或鎢燈，可以在自檢后點(diǎn)擊““設(shè)置---儀器”菜單下的氘燈或鎢燈鍵將其關(guān)閉以節(jié)省燈的壽命。但在關(guān)閉之后需間隔最少1分鐘才能重新開啟，并需要預(yù)熱最少10分鐘才能使儀器達(dá)到最佳的測(cè)量效果。第五十三頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三光譜掃描光譜掃描測(cè)量方式可用于樣品的定性分析，它如實(shí)地顯示樣品的全波長(zhǎng)圖譜，或打印出來(lái)，是化學(xué)分析工作者的常規(guī)分析手段。（1）啟動(dòng)光譜掃描功能點(diǎn)擊工具欄上的“光譜“項(xiàng)，再點(diǎn)擊“參數(shù)”進(jìn)入?yún)?shù)頁(yè)面；參數(shù)有兩種類型：選擇型和輸入型。選擇型：用戶將鼠標(biāo)指點(diǎn)到相應(yīng)的選項(xiàng)單擊即可。如測(cè)量方式、取樣間隔、光譜帶寬。輸入型：需輸入數(shù)字量。如：波長(zhǎng)范圍、光度范圍第五十四頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三以下幾個(gè)參數(shù)在使用中應(yīng)注意：A、光度范圍：此參數(shù)與測(cè)量無(wú)關(guān)。如選擇不當(dāng)，顯示的圖譜會(huì)失真或根本看不見，但測(cè)量結(jié)束或測(cè)量過(guò)程中可重新將其調(diào)到合適的范圍。B、取樣間隔：光譜峰谷尖銳的應(yīng)選取較小的取樣間隔，但間隔越小測(cè)量所需的時(shí)間越長(zhǎng)。同時(shí)掃描點(diǎn)數(shù)（波長(zhǎng)范圍除以取樣間隔）不應(yīng)超過(guò)10000點(diǎn)。C、掃描速度：掃描速度的選擇取決于所需要的測(cè)量精度，速度越慢測(cè)量精度越高，但測(cè)量的時(shí)間也越長(zhǎng)，一般測(cè)量快速即可。第五十五頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三（2）測(cè)量運(yùn)行

a設(shè)置好參數(shù)后，將參比和樣品分別放入樣池的參比位和樣品位，蓋好樣品室蓋。按下“測(cè)量”按鈕，選擇好樣品所在樣池，便可進(jìn)行測(cè)量。早測(cè)量中途若需中斷，可單擊“停止”按鈕，或直接關(guān)閉此頁(yè)面（畫面右上角第二排“關(guān)閉”欄）。B如果在參數(shù)設(shè)置的“參比測(cè)量”項(xiàng)中選擇了“單次”，則在波長(zhǎng)范圍和取樣間隔都不改變的情況下，下一次測(cè)量將直接測(cè)量樣品；如果選擇“重復(fù)”，則每次測(cè)量都會(huì)重新測(cè)量參比。第五十六頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三（3）波長(zhǎng)掃描功能下的圖譜處理

單擊“數(shù)據(jù)處理“下的圖譜處理菜單功能項(xiàng)，便可進(jìn)行圖譜處理。A、標(biāo)尺查數(shù)：選擇工具欄上“標(biāo)尺”鈕或菜單數(shù)據(jù)處理---標(biāo)尺查數(shù)“選項(xiàng)可顯示標(biāo)尺（在按隱藏），左右挪動(dòng)鼠標(biāo)或按鍵盤方向鍵，可使標(biāo)尺移動(dòng)到要觀察的圖譜點(diǎn)，當(dāng)前標(biāo)尺所在點(diǎn)的數(shù)據(jù)將顯示在右方的導(dǎo)航器中。第五十七頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三b峰谷檢測(cè)：峰谷檢測(cè)靈敏度是進(jìn)行峰谷判斷的唯一標(biāo)準(zhǔn)，靈敏度的選擇應(yīng)根據(jù)用戶需要進(jìn)行，靈敏度值過(guò)小會(huì)導(dǎo)致峰谷過(guò)多，不好判斷。靈敏度值過(guò)則可能檢測(cè)不到需要的峰谷。峰谷檢測(cè)最多顯示100個(gè)檢測(cè)數(shù)據(jù)。單擊“峰谷檢測(cè)”按鈕，根據(jù)需要在彈出的對(duì)話框中輸入峰谷檢測(cè)靈敏度數(shù)值，單擊“確定”按鈕便可檢測(cè)出當(dāng)前圖譜的峰谷，綠“+”為峰，紅“+”為谷，同時(shí)顯示檢測(cè)的峰谷數(shù)值，數(shù)據(jù)后面的P代表峰值，V代表谷值。第五十八頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三光度測(cè)量此測(cè)量方法可用于多個(gè)波長(zhǎng)的定點(diǎn)測(cè)量，最大波長(zhǎng)點(diǎn)數(shù)10個(gè)。啟動(dòng)光度測(cè)量功能單擊工具欄上“光度”按鈕，再點(diǎn)“參數(shù)”進(jìn)行參數(shù)設(shè)置：測(cè)量是依次進(jìn)行，輸入時(shí)若按波長(zhǎng)從大到小排列可以加快測(cè)量速度。第五十九頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三測(cè)量運(yùn)行如果選擇了“比色皿校正”功能，在測(cè)量前必須進(jìn)行比色皿配對(duì)測(cè)量。設(shè)置好參數(shù)后，在參比池和樣品池中都加入?yún)⒈热芤?，蓋好樣品室蓋；按下“校正”按鈕，儀器自動(dòng)進(jìn)行校準(zhǔn)。校正完成后即可進(jìn)行正式的樣品測(cè)量（使用同一比色皿時(shí)可多次測(cè)量而不需要重新校正）。如果沒有選擇“比色皿校正”功能，則直接放入?yún)⒈群蜆悠?，單擊“測(cè)量”按鈕進(jìn)行測(cè)量。第六十頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三時(shí)間測(cè)量用此測(cè)量方法可以觀察樣品隨時(shí)間的變化情況、計(jì)算樣品的活性值，還可以用此功能考察儀器的穩(wěn)定性及噪聲。啟動(dòng)時(shí)間測(cè)量功能單擊工具欄上“時(shí)間”按鈕。第六十一頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三進(jìn)行參數(shù)設(shè)置選擇測(cè)量方式：系光度（Abs）、透過(guò)率（T%）并輸入顯示光度范圍、測(cè)量時(shí)間、測(cè)量波長(zhǎng)和取樣間隔。測(cè)量運(yùn)行如果選擇了“比色皿校正”功能，在測(cè)量前必須進(jìn)行比色皿配對(duì)測(cè)量，設(shè)置好參數(shù)后，在參比池和樣品池中都加入?yún)⒈热芤海w好樣品室蓋；按下“校正”按鈕，儀器自動(dòng)進(jìn)行校準(zhǔn)。校正完成后即可進(jìn)行正式的樣品測(cè)量（使用同一比色皿時(shí)可多次測(cè)量而不需要重新校正）。如果沒有選擇“比色皿校正”功能，則直接放入?yún)⒈群蜆悠?，單擊“測(cè)量”按鈕進(jìn)行測(cè)量。第六十二頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三定量分析定量分析有多中測(cè)量方式：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)系數(shù)法、雙波長(zhǎng)等吸收點(diǎn)法、雙波長(zhǎng)系數(shù)倍率法、三波長(zhǎng)法。關(guān)于雙波長(zhǎng)法與三波長(zhǎng)法的理論與應(yīng)用請(qǐng)參看有關(guān)資料。啟動(dòng)定量分析功能單擊工具欄上“定量”按鈕第六十三頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三單波長(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)系數(shù)法進(jìn)入定量分析功能后，點(diǎn)擊“參數(shù)“按鈕，進(jìn)入?yún)?shù)頁(yè)面，如下圖：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)系數(shù)法有兩種測(cè)量方式：濃度和系數(shù)。如果已知回歸函數(shù)的系數(shù)，則采用系數(shù)法，如果用已知標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液來(lái)建立曲線來(lái)測(cè)量，則采用濃度法。曲線擬合方式有兩種：線性擬合和2次擬合。在測(cè)量前首先確定測(cè)定波長(zhǎng)值，選擇好擬合方式，確定是否需要將零點(diǎn)作為擬合的有效點(diǎn)（僅對(duì)濃度法有效，即已知標(biāo)樣在寧德為零時(shí)的吸光度值也為零，所以直接將零點(diǎn)加入數(shù)據(jù)中參與最小二乘法的擬合）。第六十四頁(yè)，共六十九頁(yè)，編輯于2023年，星期三濃度法在定量分析參數(shù)設(shè)置對(duì)話框中，輸入測(cè)量波長(zhǎng)值，選擇擬合方式，選擇是否插入零點(diǎn)，輸入標(biāo)樣濃度個(gè)數(shù)，同時(shí)在濃度標(biāo)樣中輸入對(duì)應(yīng)的濃度值。設(shè)置完畢后，按下“確定“按鈕，進(jìn)入測(cè)量界面。如果用戶已經(jīng)知道標(biāo)樣的吸光度，也可直接雙擊標(biāo)樣測(cè)量界面下對(duì)應(yīng)的吸光度欄，以輸入法來(lái)快速的建立曲線（這時(shí)可跳過(guò)a2、a3和a4步驟）。如果選擇了“比色皿校正”功能，在測(cè)量前必須進(jìn)行比色皿配對(duì)測(cè)量，設(shè)置好參數(shù)后，在參比池和樣品池中都加入?yún)⒈热芤?，蓋好樣品室蓋；按下