臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)1第一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六前言“工欲善其事，必先利其器”第二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六第一章概述技術(shù)和儀器在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的重要作用

項(xiàng)目、方法和儀器的評(píng)估指標(biāo)

檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)

第三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六第一節(jié)技術(shù)和儀器在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的重要作用技術(shù)和儀器的重要作用：技術(shù)和儀器是實(shí)驗(yàn)室工作人員的主要工具技術(shù)和方法

儀器實(shí)驗(yàn)室工作者臨床檢驗(yàn)診斷第四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六第五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六選擇合適的技術(shù)和項(xiàng)目是實(shí)驗(yàn)室的重要工作：疾病診斷項(xiàng)目檢測(cè)方法選擇:WHY?第六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六HOW?疾病項(xiàng)目方法選擇原則:項(xiàng)目選擇:方法選擇:實(shí)用性與可靠性①利用項(xiàng)目評(píng)估指標(biāo)，了解項(xiàng)目的特性，優(yōu)、缺點(diǎn)；②參考國(guó)內(nèi)外項(xiàng)目應(yīng)用資料，特別注意權(quán)威學(xué)術(shù)團(tuán)體制訂的指南、準(zhǔn)則，如有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)更好；③現(xiàn)有的儀器是否適合該項(xiàng)測(cè)試；④臨床需要。第七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六選擇合適的儀器是確保實(shí)驗(yàn)室水平和質(zhì)量的保證：儀器類型選擇和型號(hào)的選擇首先要收集多方面資料，了解各種相似機(jī)器的特性和原理、應(yīng)用范圍，儀器的敏感性、特異性、重復(fù)性，運(yùn)用速度應(yīng)和實(shí)際工作相適應(yīng)(保留一定的潛在能力，如比當(dāng)前工作能力多20％)；其次從公司和其他用戶處了解故障率，維修工程師的水平和最短維修期，機(jī)器價(jià)格，培訓(xùn)情況，試劑是否開放等第八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六了解實(shí)驗(yàn)室和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的最新發(fā)展動(dòng)態(tài)，使實(shí)驗(yàn)室始終處于先進(jìn)水平實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展:：

l．從技術(shù)角度看實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)發(fā)展的基本趨勢(shì)是能測(cè)定的物質(zhì)越來越多，由宏觀到微觀，由宏量到微量，更準(zhǔn)確、更本質(zhì)地反映生命科學(xué)的規(guī)律。２．從儀器角度看隨著生物物理技術(shù)、光電信號(hào)轉(zhuǎn)化技術(shù)的發(fā)展，特別是計(jì)算機(jī)的運(yùn)用，大量新型儀器進(jìn)入了實(shí)驗(yàn)室，檢測(cè)自動(dòng)化、微量化、多樣化。第九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六自動(dòng)化的優(yōu)點(diǎn):①提高工作效率20％～50％②減少人為的差錯(cuò)③改進(jìn)方法④降低試劑用量、成本⑤加快檢測(cè)周期(TAT)⑥試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化⑦可以使用一些手工方法無法做到的精密試驗(yàn)，如連續(xù)監(jiān)測(cè)法等第十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六第二節(jié)項(xiàng)目、方法和儀器的評(píng)估指標(biāo)評(píng)估指標(biāo)分三個(gè)層次：評(píng)價(jià)項(xiàng)目的指標(biāo)確定項(xiàng)目后選擇具體方法和儀器的指標(biāo)常規(guī)工作的質(zhì)量控制指標(biāo)第十一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六一、項(xiàng)目的評(píng)估指標(biāo):評(píng)估對(duì)象：臨床應(yīng)用價(jià)值，即檢驗(yàn)項(xiàng)目對(duì)臨床某種疾病或臨床異常情況的診斷、病程監(jiān)測(cè)、療效評(píng)估、預(yù)后判斷的能力。1．金標(biāo)準(zhǔn)2．敏感性(sensitivity，靈敏度)3．特異性(specificity)4．預(yù)測(cè)值(predictivevalue，PV)5．準(zhǔn)確度(accuracy6．受試者工作曲線(receiveroperatingcharacteristiccurve，ROC)第十二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六金標(biāo)準(zhǔn)與診斷試驗(yàn)定義:

金標(biāo)準(zhǔn)：通過活檢、尸檢、外科手術(shù)、隨訪等所作出的決定性診斷，公認(rèn)最可靠，即確診試驗(yàn)。診斷試驗(yàn)：指一般臨床實(shí)驗(yàn)檢查方法，費(fèi)用低、操作簡(jiǎn)單，對(duì)病人無損害，快速等優(yōu)點(diǎn)。

第十三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六診斷試驗(yàn)和金標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用：診斷試驗(yàn)金標(biāo)準(zhǔn)臨床上診斷：提供病人患病或不患病的可能性金標(biāo)準(zhǔn)診斷試驗(yàn)診斷結(jié)果為患者和非患者診斷試驗(yàn)的性能評(píng)價(jià)：診斷結(jié)果為患者和非患者測(cè)得其陰性或陽性結(jié)果拿不準(zhǔn)進(jìn)行各種分析第十四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六第十五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六第十六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六ROC的作用:

1．用于確定醫(yī)學(xué)決定值

2．比較項(xiàng)目的優(yōu)劣，ROC的右側(cè)面積越大，該標(biāo)志診斷價(jià)值越大第十七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六二、方法、儀器和試劑的評(píng)估指標(biāo)評(píng)估對(duì)象：方法（儀器和試劑）本身穩(wěn)定性和可靠性1．精密度2．準(zhǔn)確度3．分析靈敏度(最低檢測(cè)限)4．分析范圍5．分析干擾(方法的特異性)6．受試者工作曲線和醫(yī)學(xué)決定值7．性價(jià)比第十八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六1．精密度定義：通過重復(fù)性試驗(yàn)計(jì)算測(cè)定結(jié)果間的一致性，強(qiáng)調(diào)的是隨機(jī)誤差1、按正態(tài)分布的計(jì)量資料的不精密度通常用標(biāo)準(zhǔn)差(s)和變異系數(shù)(CV％)來表示2、計(jì)數(shù)資料的精密度往往用觀察符合率和卡帕(Kappa)值來表示表示：第十九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六2(ad－bc)(a＋b)(b＋d)＋(a＋c)(c＋b)Kappa指數(shù)＝

真陽性＋真陰性符合率＝————————————————×100%

真陽性＋假陽性＋真陰性＋假陰性計(jì)量資料計(jì)數(shù)資料第二十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六批內(nèi)是將評(píng)價(jià)樣品隨機(jī)插入患者標(biāo)本中被檢測(cè)，在一批內(nèi)連做20次；收集試驗(yàn)數(shù)據(jù)，計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。批間是每天做一次評(píng)價(jià)樣品，累積20次結(jié)果。收集試驗(yàn)數(shù)據(jù)，計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。測(cè)定：第二十一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六2．準(zhǔn)確度定義：待測(cè)物的測(cè)定值與其真值的一致性程度，強(qiáng)調(diào)的也是誤差不準(zhǔn)確度＝總誤差＝分析過程的隨機(jī)誤差＋分析過程的系統(tǒng)誤差

表示（實(shí)際工作中）：不精密度不正確度第二十二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六測(cè)定：

對(duì)一分析物重復(fù)多次測(cè)定，所得均值與其真值或參考靶值之間的差異亦即偏倚即為測(cè)定的不正確度．回收試驗(yàn)、干擾試驗(yàn)、線性范圍試驗(yàn)系統(tǒng)誤差：總誤差：對(duì)比試驗(yàn)第二十三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六3．分析靈敏度(最低檢測(cè)限)靈敏度（sensitivity，S）定義：是指檢測(cè)信號(hào)變化量（Δy）與被測(cè)物變化量（Δx）的比值，又稱為敏感度檢測(cè)限（DL、D或LOD）定義：在給定的置信水平上能夠檢出被測(cè)物的最小濃度或最小質(zhì)量，又稱檢出限、檢測(cè)低限、檢出低限。第二十四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六4．分析范圍分析測(cè)量范圍(AMR)，分析方法能直接測(cè)定樣本中的待測(cè)物質(zhì)而不需稀釋或濃縮或其他的預(yù)處理臨床可報(bào)告范圍(CRR)，樣本可通過稀釋或濃縮或其他的預(yù)處理，以擴(kuò)展其準(zhǔn)確測(cè)定的范圍5．分析干擾(方法的特異性)干擾試驗(yàn)第二十五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六干擾試驗(yàn)實(shí)例原理：

將可能引起干擾的物質(zhì)配成一系列濃度的溶液加到病人樣品中成為若干個(gè)干擾樣本，在原樣品中加入相同量的無干擾物質(zhì)的溶劑作為基礎(chǔ)樣品，均用候選方法測(cè)定，各干擾樣本與基礎(chǔ)樣品結(jié)果之差表示一定濃度下該干擾物質(zhì)產(chǎn)生的干擾值（偏差）。

第二十六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六試劑：

1.樣品收集無肝炎病毒污染、無溶血、無脂濁的人（或動(dòng)物）血清，采用候選方法測(cè)定其濃度，并用生理鹽水稀釋至3.0mmol/L2.尿酸校準(zhǔn)液

濃度為：4.5mmol/L和9.0mmol/L。3.其他試劑

GOD-POD法測(cè)定血糖試劑

第二十七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六操作步驟：1.樣本制備：原樣品：混合血清基礎(chǔ)樣品：混合血清0.9ml+蒸餾水0.1ml

干擾樣本1：混合血清0.9ml+4.5mmol/L尿酸0.1ml

干擾樣本2：混合血清0.9ml+9.0mmol/L尿酸0.1ml2.血糖濃度測(cè)定對(duì)以上各樣品按GOD-POD法雙份測(cè)定，結(jié)果取平均吸光度值、平均濃度值。第二十八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六計(jì)算：第二十九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六干擾試驗(yàn)習(xí)題某血糖測(cè)定樣本濃度為6.5mmol/L，通過干擾試驗(yàn)求得每mmol/L的尿酸的平均干擾值為-0.7，求當(dāng)尿酸濃度為0.4mmol/L時(shí)，該法測(cè)得的恒定系統(tǒng)誤差值以及血糖標(biāo)本的實(shí)際濃度。第三十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六回收試驗(yàn)?zāi)康模河脕砜疾旌蜻x方法對(duì)加入到常規(guī)分析樣品中的純分析物含量進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定的能力，其目的是檢測(cè)候選方法的比例系統(tǒng)誤差（PE），以恒量該方法的準(zhǔn)確度。意義：測(cè)得的比例系統(tǒng)誤差（PE）值隨被測(cè)物濃度的增加而增加。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容第三十一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六原理：

將濃度已知的含被測(cè)物的各校準(zhǔn)液加入至病人樣品（原樣品）中成為一系列分析樣品（回收樣品），在原樣品中加入相同體積的無被測(cè)物的溶劑作為基礎(chǔ)樣品，用候選方法對(duì)這些樣品進(jìn)行同步測(cè)定，計(jì)算回收率、平均回收率，考察候選方法的比例系統(tǒng)誤差。一般項(xiàng)目的平均回收率應(yīng)在95％～105％之間。第三十二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六試劑：

1.樣品收集無肝炎病毒污染、無溶血、無脂濁的人（或動(dòng)物）血清，采用候選方法測(cè)定其濃度，并用生理鹽水稀釋至3.0mmol/L。2.葡萄糖校準(zhǔn)液濃度分別為：36.0mmol/L、70.0mmol/L。3.其他試劑GOD-POD法測(cè)定血糖試劑第三十三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六操作步驟：1.樣品制備：原樣品：混合血清基礎(chǔ)樣品：混合血清0.9ml+蒸餾水0.1ml

回收樣品1：混合血清0.9ml+36.0mmol/L葡萄糖校準(zhǔn)液0.1ml

回收樣品2：混合血清0.9ml+70.0mmol/L葡萄糖校準(zhǔn)液0.1ml2.血糖濃度測(cè)定按照GOD-POD法對(duì)以上各樣品進(jìn)行雙份檢測(cè)，結(jié)果取平均吸光度值、平均濃度值。第三十四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六計(jì)算：1.計(jì)算公式：第三十五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六如果某回收率為98％，原樣本的測(cè)定值為10.0mmol/L，求該法的比例系統(tǒng)誤差，比例系統(tǒng)誤差值，用該法測(cè)得原樣本的準(zhǔn)確值。

回收試驗(yàn)習(xí)題第三十六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六6．受試者工作曲線和醫(yī)學(xué)決定值醫(yī)學(xué)決定水平，就是臨床按照不同病情給予不同處理的指標(biāo)閾值醫(yī)學(xué)決定值,根據(jù)不同的目的，研究健康(或稱非病理的)與病理的分界水平受試者工作曲線第三十七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六三、常規(guī)工作中的質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo)質(zhì)量監(jiān)控的目的：

質(zhì)量控制方法的核心：由檢出隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差的質(zhì)量控制規(guī)則組成為了監(jiān)測(cè)和評(píng)估實(shí)驗(yàn)室的工作質(zhì)量，排除檢測(cè)過程中導(dǎo)致不滿意的原因質(zhì)量監(jiān)控的內(nèi)容：

分析前、分析中、分析后質(zhì)量控制第三十八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六

圖全面質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)保證體系分析后質(zhì)量評(píng)估分析中質(zhì)量控制

病人準(zhǔn)備檢查病人申請(qǐng)檢驗(yàn)標(biāo)本采集標(biāo)本運(yùn)送標(biāo)本處理人員素質(zhì)工作環(huán)境實(shí)驗(yàn)用水實(shí)驗(yàn)室管理儀器質(zhì)量保證方法選擇與評(píng)價(jià)試劑選擇與評(píng)價(jià)建立操作規(guī)程室內(nèi)質(zhì)控及分析標(biāo)本分析測(cè)定臨床醫(yī)師反饋信息室內(nèi)復(fù)查保留標(biāo)本隨時(shí)復(fù)查運(yùn)送報(bào)告病人投訴室間質(zhì)評(píng)登記填發(fā)報(bào)告分析前質(zhì)量保證分析中質(zhì)量控制第三十九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六1．室內(nèi)質(zhì)控指標(biāo)(Internalqualifycontrol，IQC)由實(shí)驗(yàn)室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)室工作的可靠性程度，監(jiān)測(cè)和控制本室常規(guī)工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗(yàn)的一致性。首先，選擇好質(zhì)控物其次，室內(nèi)質(zhì)控要求每天至少檢測(cè)一次質(zhì)控物，然后把結(jié)果繪制在質(zhì)控圖上。最后,根據(jù)質(zhì)控規(guī)則判斷分析結(jié)果在控或失控Ｌevey-Ｊennings質(zhì)控Westgard多規(guī)則質(zhì)控法第四十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六Ｌevey-Ｊennings質(zhì)控d均數(shù)+2S-2S+3S-3S正常分布Ｌevey-Ｊennings質(zhì)控圖第四十一頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六趨勢(shì)性變化漂移精度變化-S質(zhì)控圖的常見的幾種常見的失控表現(xiàn)-3S+3S+2S-2Sd均數(shù)第四十二頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六Westgard多規(guī)則質(zhì)控①12S警告規(guī)則：當(dāng)同一批兩個(gè)水平的質(zhì)控血清中的任意1份測(cè)定值超出±2S范圍，為“警報(bào)”信號(hào)。②13S失控規(guī)則：當(dāng)同一批兩個(gè)水平的質(zhì)控血清中的任意1份測(cè)定值超過±3S界限，為“失控”。提示存在隨機(jī)誤差。③22S失控規(guī)則：同一批兩個(gè)水平的質(zhì)控品結(jié)果同方向超出±2S限值，或同一質(zhì)控品連續(xù)兩次質(zhì)控結(jié)果超出±2S限值為“失控”，多由系統(tǒng)誤差造成。④R4S失控規(guī)則：同一批中兩個(gè)水平的質(zhì)控結(jié)果之差超出4S范圍，其中一個(gè)超出＋2S限值，另一個(gè)超出－2S限值，為“失控”，屬隨機(jī)誤差過大。⑤41S規(guī)則：當(dāng)1份質(zhì)控血清的測(cè)定結(jié)果連續(xù)4次同方向超過＋1S或－1S界限，或同一批兩個(gè)水平的質(zhì)控血清的測(cè)定結(jié)果同時(shí)連續(xù)2次同方向超過＋1S或－1S界限時(shí)，為“失控”，一般由系統(tǒng)誤差所至。⑥10規(guī)則：當(dāng)1份質(zhì)控血清測(cè)定結(jié)果連續(xù)10次偏于均值一側(cè)時(shí)，或同一批兩個(gè)水平的質(zhì)控血清的測(cè)定結(jié)果同時(shí)連續(xù)5次偏于一側(cè)時(shí)，為“失控”，是系統(tǒng)誤差所至。第四十三頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六第四十四頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六3．注意臨床反饋意見2．室間質(zhì)控(exmnalqualifyassessment，EQA)由第三方機(jī)構(gòu)，采取一定的方法，連續(xù)、客觀地評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室本身不易發(fā)現(xiàn)的不準(zhǔn)確性，了解各實(shí)驗(yàn)室之間結(jié)果的差異，幫助其校正，使其結(jié)果具有可比性。PT方案VIS評(píng)分法第四十五頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六第三節(jié)檢驗(yàn)技術(shù)基本知識(shí)化學(xué)物質(zhì)的基本要求標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)驗(yàn)室基本用品第四十六頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六一、化學(xué)物質(zhì)的基本要求1、純水天然水自來水實(shí)驗(yàn)用純水經(jīng)簡(jiǎn)單的物理、化學(xué)方法處理，除去懸浮物質(zhì)和部分無機(jī)鹽經(jīng)蒸餾、離子交換、活性炭吸附、超濾等處理，除去雜質(zhì)(懸浮物,膠體物質(zhì),溶解物質(zhì))第四十七頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六表2-1美國(guó)NCCLS等級(jí)純水的規(guī)定及用途(1985)級(jí)別Ⅰ級(jí)Ⅱ級(jí)Ⅲ級(jí)pH未定未定5.0～8.0電阻率(MΩ·cm,25℃,最大量)102.01.0硅(mgSiO2/L,最大量)0.050.11.0微生物含量（每毫升最大菌落數(shù)）10103未定硅（mgSiO2/L，最大量）0.050.11.0微粒0.2μm微孔膜過濾未定未定有機(jī)物質(zhì)活性碳過濾未定未定用途原子吸收，火焰光度，熒光，電解質(zhì)，酶，高效層析，電泳，參比液，緩沖液。一般實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，器皿沖洗。器皿洗滌，要求不高的定性試驗(yàn)。第四十八頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六2．試劑的純度要求第四十九頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六

1.一級(jí)優(yōu)級(jí)純（G.R）又稱保證試劑，綠色標(biāo)簽，該級(jí)別純度最高、雜質(zhì)含量最低，適用于科研和配制校準(zhǔn)溶液

.

2.二級(jí)分析純（A.R）又稱分析試劑，紅色標(biāo)簽，該級(jí)別純度較高、雜質(zhì)含量較低，適用于定性和定量分析.

3.三級(jí)化學(xué)純（C.P），藍(lán)色標(biāo)簽，該級(jí)別質(zhì)量略低于二級(jí)品，適用于一般定量分析和定性試驗(yàn)

.4.四級(jí)實(shí)驗(yàn)試劑（L.R），黃色標(biāo)簽，該級(jí)別試劑質(zhì)量較低、但比工業(yè)用高，適用于一般定性實(shí)驗(yàn)

.普通生化檢驗(yàn)準(zhǔn)確的定量分析或配制校準(zhǔn)溶液

第五十頁，共六十二頁，編輯于2023年，星期六二、標(biāo)準(zhǔn)品1．原始參考品是一種可以直接稱量、檢測(cè)、配制成任何濃度溶液的物質(zhì)，可用以定標(biāo)，國(guó)際理論應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)(IntematlonalUnionofPureandAppliedChemistry，IUPAC)認(rèn)為其純度達(dá)99．98％2．二級(jí)參考品由原始標(biāo)準(zhǔn)品在特定的方法下標(biāo)定的物質(zhì)，由于物質(zhì)純度，只能以標(biāo)準(zhǔn)物溶液形式存在3．標(biāo)準(zhǔn)參考品由美國(guó)國(guó)立標(biāo)準(zhǔn)化和技術(shù)學(xué)院(NationalIstituteofS