實(shí)驗(yàn)6a-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測(cè)第二部分

酶的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.制備固定化a-淀粉酶2.進(jìn)行淀粉水解的測(cè)定1、固定化酶技術(shù)。即將水溶性的酶用物理或化學(xué)的方法固定在某種介質(zhì)上，使之成為不溶于水而又有酶活性的制劑。2、固定化酶技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：（1）使酶既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離；（2）固定在載體上的酶可以被反復(fù)利用。（一）固定化酶3、固定化酶的性質(zhì)：（1）穩(wěn)定性增加，熱穩(wěn)定性、對(duì)蛋白酶的抵抗能力、對(duì)各種試劑的穩(wěn)定性都不同程度增加。（2）PH活性曲線(xiàn)和最適PH的變化，最適PH可能向酸性或堿性移動(dòng)。（3）底物專(zhuān)一性變化，如蛋白酶對(duì)酪蛋白等大分子底物的催化活性降低，但對(duì)小分子底物催化活性差別不大。共價(jià)偶連法3.固定化酶方法吸附法交聯(lián)法包埋法實(shí)驗(yàn)原理：本實(shí)驗(yàn)是用吸附法將a-淀粉酶固定在石英砂上，一定濃度的淀粉溶液經(jīng)過(guò)固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊精，用淀粉指示劑溶液測(cè)試，流出物呈紅色表明水解產(chǎn)物糊精生成淀粉α-淀粉酶糊精β淀粉酶葡萄糖糖化淀粉酶麥芽糖這里使用的是枯草桿菌的a-淀粉酶，其作用的最適溫度為:50~75℃；最適PH為5.5~7.5遇碘顯藍(lán)色遇碘顯紅色遇碘不顯色（二）實(shí)驗(yàn)材料:1.a-淀粉酶的固定化:在燒杯中將5mga-淀粉酶溶于4ml蒸餾水中.由于酶不純,可能有些不溶物.再加入5g石英砂,不時(shí)攪拌,30min后裝入1支下端接有氣門(mén)心并用夾子封住的注射器中(石英砂體積約4ml).用10倍體積的蒸餾水洗滌此注射器以除去未吸附的游離淀粉酶,流速為1ml/min.反應(yīng)柱固定化酶氣門(mén)心夾子5ml注射器2.可溶性淀粉溶液:取50mg可溶性淀粉溶于100ml熱水中,攪拌均勻.3.5mmol/LKI-I2溶液：稱(chēng)取0.127g碘和0.83g碘化鉀。加蒸餾水100ml完全溶解后裝入滴瓶中步驟:1.將灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上,用滴管滴加淀粉溶液,使淀粉溶液以0.3ml/min的流速過(guò)柱.在流出5ml后接收0.5ml流出液,加入1~2滴KI-I2溶液,觀(guān)察顏色.用水稀釋1倍后再觀(guān)察顏色.反應(yīng)柱固定化酶氣門(mén)心夾子5ml注射器淀粉2.實(shí)驗(yàn)后,用10倍柱體積的蒸餾水洗滌此柱,放置在4℃冰箱中,幾天后再重復(fù)上述實(shí)驗(yàn),看是否有相同的結(jié)果.課后思考1.如何證明洗滌固定化酶柱的流出液中沒(méi)有淀粉酶?2.耐高溫的淀粉酶有哪些可能的用途?可在試管中加入1ml可溶性淀粉，再加幾滴淀粉酶柱流出液，保溫幾分鐘后用碘液檢驗(yàn)。如仍顯藍(lán)色，則流出液中沒(méi)有淀粉酶了?？梢栽诟邷叵率辜铀俚矸鬯猓颐覆粫?huì)因高溫而失活，所以可在一些需要高溫加熱同時(shí)又要水解淀粉的反應(yīng)中使用。3.如何測(cè)定木瓜蛋白酶親和柱水解蛋白質(zhì)？蛋白質(zhì)被蛋白酶水解后肽鍵減少，用雙縮脲試劑測(cè)定因肽鍵減少而發(fā)生的顏色變化，即可了解酶的水解作用1、研究認(rèn)為，用固定化酶技術(shù)處理污染物是很有前途的。如將從大腸桿菌得到的磷酸三酯酶固定到尼龍膜上制成制劑，可以用來(lái)降解殘留在土壤中的有機(jī)磷農(nóng)藥，與用微生物降解相比，其作用不需要適宜的（）A、溫度B、PHC、水分D、營(yíng)養(yǎng)D隨堂鞏固2、目前，日用化工廠(chǎng)大量生產(chǎn)的酶制劑，其中的酶大都來(lái)自A、化學(xué)合成B、動(dòng)物體內(nèi)C、植物體內(nèi)D、微生物體內(nèi)D3.酶的固定方法不包括()。A.將酶吸附在固體表面上B．將酶相互連接起來(lái)C．將酶包埋在細(xì)微網(wǎng)格里D．將酶制成固體酶制劑，如加酶洗衣粉中的酶D4.關(guān)于固定化酶的敘述不正確的是()