項(xiàng)目四：香菇多糖的生產(chǎn)

任務(wù)1：香菇多糖制備方案的制定

目錄香菇多糖的概述1實(shí)訓(xùn)原理2實(shí)訓(xùn)器材與試劑3實(shí)訓(xùn)步驟4香菇多糖的概述1實(shí)訓(xùn)原理2一、香菇多糖的概述1. 香菇多糖（簡(jiǎn)稱LNT），存在于香菇中，分子量為100萬(wàn)，是從香菇中分離純化的一種葡聚糖，是以增強(qiáng)T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞功能為主的免疫增強(qiáng)劑。與化療或放療聯(lián)用可發(fā)揮增效減毒作用。2. 性質(zhì)：（1）外觀：白色或棕黃色粉末狀固體（2）穩(wěn)定性：對(duì)光和熱穩(wěn)定（3）溶解性：能溶于水，水溶液為中性，水中最大溶解度為3mg/ml,溶解度隨分子質(zhì)量增大而降低：帶有硫酸根或乙酰基團(tuán)的香菇多糖，其水溶性大大提高，不溶于甲醇、丙酮、高濃度乙醇等（4） 旋光性：在不同的NaOH溶液中有不同的旋光度（5） 其他：香菇的主要成分是多糖類和不飽和脂肪酸，經(jīng)熱水提取的香菇多糖可調(diào)節(jié)人休內(nèi)有免疫功能的T細(xì)胞活性，可降低甲基膽蒽誘發(fā)腫瘤的能力。3.藥理作用：具有免疫增強(qiáng)作用，其機(jī)制在體內(nèi)雖無(wú)直接殺傷腫瘤細(xì)胞作用，但可通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能而發(fā)揮抗腫瘤活性。在體內(nèi)能使脾臟和腹腔的NK細(xì)胞活性增強(qiáng)，誘生干擾素與本品劑量相關(guān)，其活性與白細(xì)胞介素類或干擾素誘導(dǎo)劑有協(xié)同作用。另有證明，在體外本品可增強(qiáng)脫氧胸腺嘧啶核苷的抗艾滋病毒的活性。香菇多糖通過(guò)激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)抗體依賴性細(xì)胞誘導(dǎo)的細(xì)胞毒（ADDC），發(fā)揮抗腫瘤活性；此外，香菇多糖還能使腫瘤部位的血管擴(kuò)張和出血，導(dǎo)致腫瘤出血壞死和完全退化。4.生物活性（1）香菇多糖的抗腫瘤活性（2）香菇多糖的免疫調(diào)節(jié)（3）香菇多糖的抗病毒活性（4）香菇多糖抗感染作用二、實(shí)訓(xùn)原理

1.在組織中，多糖多與蛋白質(zhì)以共價(jià)相結(jié)合，所以在生化產(chǎn)品制備工藝中，往往第一步多用酶降解蛋白質(zhì)部分或用堿使多糖—蛋白質(zhì)間的鍵裂開(kāi)，以促進(jìn)多糖在提取時(shí)的溶解。堿性提取可避免多糖中硫酸基團(tuán)水解而破壞?，F(xiàn)多采用堿性提取的同時(shí)用蛋白質(zhì)水解酶處理組織。提取液中存在的蛋白質(zhì)可用普通蛋白質(zhì)沉淀劑使之沉淀，也可用其他方法使變性沉淀，如適當(dāng)調(diào)pH和加熱等。

2.本實(shí)驗(yàn)中性多糖常用水作溶劑來(lái)提取，可以用水浸煮。3.香菇中色素較高，活性炭有脫色素、脫去異味等作用。4.蛋白質(zhì)不溶于氯仿等有機(jī)溶劑，可對(duì)香菇多糖進(jìn)行除去雜蛋白。而香菇多糖在氯仿中溶解度大于在熱水中的溶解度，所以可以用氯仿對(duì)香菇多糖進(jìn)行萃取5.乙醇沉淀法提取多糖時(shí)，乙醇的濃度及提取方式對(duì)多糖的得率影響較大。最有效的方法是向多糖溶液中加入乙醇，使乙醇的最終濃度依次達(dá)到40%、60%、70%、80%，離心每次沉淀，乙醇沉淀得到的不一定是純的多糖，還需用凝膠柱色譜進(jìn)行分離純化。6.用苯酚—硫酸法顯棕色，可以對(duì)多糖進(jìn)行定性檢測(cè)。7.香菇子實(shí)體有含量較多的脂類的物質(zhì)，可以用石油醚、乙醚等低級(jí)性溶劑除去脂溶性雜質(zhì)。8.因?yàn)橄愎饺赓|(zhì)太厚，萃取時(shí)氯仿很難滲透至其深處，則萃取物的產(chǎn)率低。熱水提取法多糖在260nm和280nm波長(zhǎng)處有較明顯的吸收峰三、實(shí)訓(xùn)材料、儀器與試劑1.原料:香菇2.器材：組織搗碎機(jī)、恒溫水浴鍋、循環(huán)水式真空泵、冷凍離心機(jī)、凝膠柱、脫脂棉、再字夾、紫外分光光度計(jì)、容量瓶、試管、燒杯、紫外檢測(cè)儀、記錄儀、流量泵3.試劑：氯仿、無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚、苯酚-硫酸試劑：苯酚3g,濃硫酸5mL，溶于95mL無(wú)水乙醇中。四、實(shí)訓(xùn)登步驟（一途）多開(kāi)糖的徒提取1.手熱水甲浸提泰：稱蘿取香誓菇1割0g類,于傘組織郵搗碎總機(jī)內(nèi)火粉碎序，倒軟入周燒杯士中，鴿加2俗0倍街量的攤水，弦將燒繞杯放洗入恒突溫水初浴鍋恒中9秩0℃糧）加插熱3展0m糊in枝,然接后用槽布氏拳漏斗淡和真耳空泵孔進(jìn)行臟抽濾笨，取艇濾液市。2.廈脫色界，除宜味：跟在濾妻液中果加入主活性律炭（甚1m嘩g/孝ml隙），抗攪辯拌吸餃附1荷h，礙抽濾宿，取漠濾液到。3.本萃取榜、除執(zhí)雜蛋邪白：廉在濾廉液中霸加入六氯仿智溶液雨，充坐分罩混合油后，墨過(guò)濾礙，取歷濾液娃。重草復(fù)萃膀取、半除雜圾3次腰。4.察乙醇增沉淀齊：在違萃取歐液中原加入哨無(wú)水客乙醇縣，盟使其捧乙醇羅濃度旁達(dá)8茫0%棚，沉炭淀1紅2h檢,于太冷凍趟離心津機(jī)（塊4棋00么0r解/m扒in龍）離閱心3額0m破in踢，取進(jìn)沉淀5.斥脫脂分：沉接淀物核分別押用無(wú)稀水乙城醇、魔丙酮文、乙葵醚洗石滌3脆次，紹即得縱香菇累多糖民提取越物。（二葵）多珍糖純陰化取上顫述香止菇多詠糖提怖取物倒溶于敘蒸餾較水中銳，離戀心除悟去不惹溶物坐。姓Se撐ph趁ad聯(lián)ex僵G1書(shū)00統(tǒng)凝膠妄裝好四柱，鵲用蒸光餾水涌平衡造48稅h臣,門(mén)然后腹將上活清液舊上柱妥分離盲，用幅蒸餾顯水洗早脫，師洗脫犧速度礙5m悔l/興20拿mi耕n（增可用畝恒流畫(huà)泵控逝制洗象脫速柜度）逢,2準(zhǔn)00患nm養(yǎng)波長(zhǎng)診紫外狗檢測(cè)列，收愈集主虛要峰蜓部分鋪（當(dāng)?shù)挠涗浾鎯x上模出現(xiàn)立波峰真時(shí)即狡用試碗管開(kāi)徒始收畏集洗艦脫液席），旺冷凍異干燥慎得白警色香要菇多訴糖，那并稱斧重。（三野）香猜菇多冶糖分童析檢辣測(cè)1.定性亞檢測(cè)稠—苯尿酚-看硫酸掀法將苯炭酚-紹硫酸奸試劑白噴灑戀在冷癢凍干喊燥好妨的白鮮色籠香菇痰多糖亮上1田10終℃，朱加熱在香菇諒多糖籠幾分組鐘，游顯棕酸色即仇為多塞糖。2.拴定量煉檢測(cè)青--糞-分狀光光孫度法a.夢(mèng)標(biāo)準(zhǔn)競(jìng)曲線詳?shù)闹祁D備精密雪稱取踩(可典用分勒析天絮平）機(jī)60熱℃干抱燥至澤恒重?fù)斓母适短侨f(wàn)標(biāo)準(zhǔn)嘩品0香.1屑g，漸置于品10東0m曠l的匪容量冒瓶中幕，加價(jià)蒸餾剝水定袋容至陣刻度欺處。責(zé)用移你液管流量取臨對(duì)照虧品溶凡液0薪、0警.5教、1刊.0謹(jǐn)、2泉.0呀、2櫻.5嫂、3歸.0打ml月.分貫別置棋50乏ml膝容量擦瓶中汪，加優(yōu)蒸餾符水定悄容在刪各精寒密吸遇取1接ml薯，置浩于帶虜塞試伴管中刊，準(zhǔn)謎確移訓(xùn)取8更%苯顫酚溶狹液1儉ml螺，快排速加哲入濃損硫酸霸5m笑l置艦于水棋浴鍋冊(cè)中加息熱1弟5m怕in豬,取到出冷畝卻至佳室溫紙，橘灶黃色虜由濃爽度從丟小到毀大而的逐漸遮加深隔，將觸溶液勒于4惠90拆nm踏波長(zhǎng)等的分挎光光卵度計(jì)誦處測(cè)衡定吸際收度唯，繪橋制標(biāo)敏準(zhǔn)曲爪線。b.道樣品成多糖歡的測(cè)駛定精密膨稱取截香菇權(quán)多糖莊10報(bào)