共聚焦激光掃描顯微鏡ConfocalLaserScanning受激發(fā)射損耗顯微鏡（StimulatedEmissionofDepletionLeicaCLSM

LeicaTCS-SP5(2007)

紫外激光

可?激 HeNe543

?光激光（WLL）可以激發(fā)所有470-670波長的熒光，自由調整激發(fā)最佳 (Ca2+、g+、、K+、以及pH等)的比例及動態(tài)變化作

準確測定單個細胞內(nèi)不同部位的 339492350485380510490525505530505530 算機圖像處理及三維重建軟件，產(chǎn)??動真的三維效果，可進?（厚度、步距

（數(shù)據(jù)重組(SimulatedFluorescencePress,SFP(extendeddepthof(SimulatedFluorescencePress,SFP(extendeddepthof Stimulatedemissionofdepletionmicroscopy,STED andWi ann,1994,德國?普)

fi

Stefan TCSSP8STED3X

LeicaTCSSTED以TCSSP8共聚焦為間分辨率,突破光學分辨率極限的多?圖像 如Alexa488、OregonGreen，以及熒光蛋??度整合的STED系統(tǒng)即可做常規(guī)共聚焦掃描，滿??常研究的需求， 搭載STED在TCSSP8子 子 激光器 5或白激 ED激光 光器 分辨率不再受到衍射極限的限制，?是直接取決于STED激光強度~~~~實現(xiàn)的分辨率(左)與STED右圖：STED~70 聯(lián)會復合體Musclefibers–bareMouseskeletalmusclemyofibrilsstainedwithanantibodythatrecognizesthemyosinheads.Thisvisualisesthebipolarmyosinfilamentsasdoublebands,separatedbythebroadblackI-bands.CourtesyDr.E.Ehler,KingsCollege,a-actinin-IsolatedmyofibrilsfromratsDoublet(distance~170nm)resolvedwithSTEDDr.ElisabethEhler,KingsCollegeLondon,Bacteria-DistributionofFts-ZproteininBacillussubtilisCourtesyP.Peters&G.Cox(UniversityofLeicaTCSSP8STED?可調的、基于共聚焦的XYZ三維 衍射極限的多??改進的?控STED?智能STED?HuygensSTEDSTED 三維XY50nmZ130

多色（覆蓋常規(guī)

28fps42fps條STED光路生成不同的STED模式。為了得到x和y方向上的最佳分辨率，光線被分配到第一條STED光路，在該STED—點擴散函數(shù)(PSF)為桿狀。第二條光路通過不同的相位掩模形成z軸圓環(huán)，主要提高z軸上的分辨率。同時在xyXY:< Z:<任意狀態(tài)，以獲取最佳效果。LASAF軟件直觀進行控制。HeLa細胞中的組蛋白H3-Alexa568：STEDx、y和z方向上分辨率的提高。3DSTED帶來的z軸分辨率的提高消除了不屬于探測焦面的信號(注3DSTEDxySTED圖像中的部分結構)。3DSTEDxy的60zHeLaH3-Alexa568XZ軸分布曲線。z圓環(huán)為0%STEDx和y軸z60%STED60zSTEDSTED3X–三維XY50nmZ130

多色（覆蓋常規(guī)

28fps42fps綠色：NUP153-Alexa532ATTO647NChromeo494ATTO647NChromeo494STEDSTED3X–三維XY50nmZ130

多色（覆蓋常規(guī)

28fps42fpsWhiteLaser(pulsed)在STEDCW（連續(xù)波）中，成像的分辨率與熒光基團的有關。STED激光對長熒光的損耗效率高于對短熒光。瞬時發(fā)射的熒光的分子無法被受激發(fā)射關閉，因為沒有足夠的時間讓STEDCWHyD?檢測器與作為脈沖激發(fā)源的白光激光搭配使用，就可只檢測來自激發(fā)脈沖之后某一時間窗口的熒光信號。延遲0.5ns啟動檢測就可顯著提高分辨率。平移時間窗，使其遠離激發(fā)脈沖，可實現(xiàn)遠低于50nm的分辨率。在相同的激光功率下，門控STEDSTEDCW高50%以上。而要實現(xiàn)相同的分辨率，門控STED所需的激光功率更低，因而可保持的光穩(wěn)定性以及細胞的活性。反卷積處理，??提?信噪比，從?進?步提?分辨率。STEDHuygens反、y和z軸的分辨率。STEDacentriolestainedwithprimaryandsecondaryantibodyconjugatedtoChromeo488Courtesy:Dr.GrazvydasLukinavicius,EPFL,Lausanne,SwitzerlandSTED可?于BDHorizonAbberiorSTARAbberiorSTARAlexaFluorChromeoDyLightChromeoOregonGreen

AlexaAlexaAlexaCFAlexa

FluorescentOtherTubulinTrackerOregon?物化 藥理細胞?物 ?理組織胚胎 神經(jīng)科食品科 植物遺傳 病理細菌 材料科?的共存與共定位、蛋?與細胞器的共定位、核轉錄因?