重組蜂毒素—素雜合肽的分離純化及溶血抑菌實驗研采用硫酸銨沉淀法、凝膠排阻層析、離子交換色譜等方法對將重組蜂毒素－素工程制藥技術(shù)已能夠大量生產(chǎn)人重組胰島素促紅細胞生成素等等工程藥物例住院患者的中，抗生素使用率占78.2%。但近幾年新型抗生素的研發(fā)又十分緩慢，目抗菌肽可在不破體健康細胞的條件下對人髓樣白血病細胞k552株、艾氏腹水瘤EAC、人宮頸癌細胞、直腸癌HR8340及肝癌細胞BEL27402等起到作用【4】抗菌肽對HIV、皰疹病毒等有膜都有一定的作用:meliiins和cecropins在亞毒性濃度下可以通過對如LL-37［6］。所以具有廣譜2080Boman（cecropins（30-6010.7藥物且不影響真核細胞?？咕牟粌H具有抗菌活性，它對，細菌，真菌以及癌細胞都有作用，國內(nèi)外已至少有113種以上的細菌能被抗菌肽所殺滅，是一種較好的傳統(tǒng)抗生素的替代品。而且因為其分子量小，易降解，不會引起污染。目前，抗菌肽在農(nóng)瘤的生長，對正常細胞無害，極有可能成為無毒或低毒的抗腫瘤新藥【8。省也應用抗菌肽轉(zhuǎn)化酵母進行高效表達，經(jīng)發(fā)酵條件優(yōu)化，生產(chǎn)抗菌肽酵母制劑，用作畜禽及水抗關節(jié)炎、抗腫瘤、抗以及改善心血管功能等方面作用。針對以上問題，中國藥學博士[13]在攻讀博士期間，將蜂毒素15個氨基酸和素PET32-a（TrxA）融合表達，使表達產(chǎn)物分子量提高，保護從保種的菌種中篩選產(chǎn)目的蛋白的優(yōu)勢PH菌種：重組蜂毒素－素－pET32a－BL21，保存3．21LB5g，NaCl5g2.5g，各組分充分溶解后500mLNaOHPH7，121℃30min。LB5g，NaCl5g，酵母提取物2.5g，各組分充分溶解后配500mLNaOHPH710g，12130min。24h。5mlLB5μL37180r/m8~12h100μL5ml的LB5μL37℃，180r/m6h。50.5-1mg37℃，180r/m8~12h上點樣（未加乳糖的菌種作為空白），80V棄去濃縮膠，取下分離膠放置于培養(yǎng)皿中，用考藍染色30min后，用去離子水漂洗兩遍，再用考藍染色15min，然后加入脫色液進行脫色15min，脫色2次。（1）180μl8~12h。37℃，180r/m2-30.6g37℃，180r/m8~12h121℃,30minr/m5000r/m,10min20mL1：120mL40mL2-4（2548hSDS%，40%，60%,80%硫酸銨飽和溶液析出的沉淀2cm1ml/min。置3cmSDSPH=5.8PBS0.8mol/L，1.0mol/L 71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于1000ml水 31.2gNaH2PO4-2H2O，溶于1000ml水 PBS(pH=7.0，100ml)：取38ml0.2mol/LNaH2PO4，62ml0.2mol/L的 Na2HPO4,即可。 PBS(pH=6.7，100ml)：取 43.5ml 即可 PBS(pH=6.4，100ml)：取 26.5ml 即可 PBS(pH=6.1，100ml)：取 15ml 的 即可 PBS(pH=5.8，100ml)：取 8ml0.2mol/L的 即可將培養(yǎng)在LB培養(yǎng)基上的細菌接種到液體PB培養(yǎng)基中，在搖進行混勻PB100ul，各孔中抗菌肽的終濃度分別為1μmol/L,5μmol/L，25μmol/L,125μmol/L,625μmol/L。陽MIC（上述五種菌種均要進行此實驗）取羊血2ml,在21ml4ml，10min3000r/min，棄上清液。然后向沉淀中加適量生理鹽水，搖勻，離心，棄32%的紅對照為生理鹽水2.5ml，陽性對照為蒸餾水2.5ml?；旌虾螅⒓粗茫?7±0.5）℃的恒153離子交換查閱有關蛋白分離純化和溶血抑熟悉的各種設硫酸銨沉淀法分離純化目的蛋白[1].抗生素臨床應用現(xiàn)狀與（J）.中國藥物經(jīng)濟學[2].YangHui淺談抗生素的合理使用[]-藥現(xiàn)代教育[7]STEINERH，HULTMARKD，ENGSTROMA，etal．Sequenceandspecificityoftwoantibacterialproteinsinvolvedininsectimmunity［J］．Nature，1981，292:246－[3]YONGD，TOLEMANMA，GISKECG，etal．Characterizationofanewmetallo--lactamasegene，blaNDM-1，andanovelerythromycinessegenecarriedonauniquegeneticstructureinKlebsiellaponiaesequencetype14from［J］．AntimicrobialAgentsandChemotherapy，2009，53(12):5046[4]，翟朝陽．抗茵肽的抗腫瘤作用［J］．生命的化學，2006(2):181－183．[5]WACHINGEＲM，KLEINSIDTA，WINDERD，etal．Antimicrobialpeptidesmelittinandcecropininhibitreplicationofhumanimmunodeficiency1bySHAYKHIEVＲ，BEISSWENGEＲC，K?NDLEＲK，etal．HumanendogenousantibioticJournalofPhysiology:LungCellularandMolecularPhysiology，2005，33(5):L842STEINERH，HULTMARKD，ENGSTROMA，etal．Sequenceandspecificityoftwoantibacterialproteinsinvolvedininsectimmunity［J］．Nature，1981，292:246－安春菊;盛長忠;李德森一類潛在的新藥-抗菌肽[]-中國新藥J].國外醫(yī)藥-抗生素分冊，2002，23(6):269-270.HabermannE，JentschJ．Sequenceysisofmelittinfromtrypticandpepticdegradationproducts[J]．PhysiolChem， PANDEYBK,SRIVASTAVAS,SINGHM,etal.InducingtoxicitybyintroducingaJournal,2011,436(3):609-620.QUHD,CHENB,PENGH,etal.Molecularcloning,binantexpression,andantimicrobialactivityofEC-