吸收峰位置向長波方向移動(dòng)紫移：吸收峰位置向短波方向移動(dòng)紫外光譜圖提供兩個(gè)重要的數(shù)據(jù)：吸收峰的位置（橫坐標(biāo)-波長）和吸收光譜的吸收強(qiáng)度。紫外光譜圖第6節(jié)黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)研究

一、UV光譜在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用

①測定樣品在甲醇中的UV譜以了解母核類型；②在甲醇溶液中分別加入各種診斷試劑后測UV譜和可見光譜以了解3,5,7,3’,4’有無羥基及鄰二酚羥基；③苷類可水解后（或先甲基化再水解），再用上法測苷元的UV譜以了解糖的連接位置。

可用于確定黃酮母核類型及確定某些位置是否含有羥基。一般程序：母核結(jié)構(gòu)（交叉共軛系統(tǒng)）是產(chǎn)生紫外吸收的基礎(chǔ)，其中:

由苯甲酰系統(tǒng)的電子躍遷產(chǎn)生的吸收峰為帶II240～280nm；

由桂皮酰系統(tǒng)電子躍遷產(chǎn)生的吸收峰為帶I300～400nm。

（1）母核光譜特征：不同母核的黃酮類化合物由于共軛系統(tǒng)（交叉共軛系統(tǒng)）的不同，由交叉共軛系統(tǒng)產(chǎn)生的帶I或帶II的峰位、峰形、吸收峰的強(qiáng)度也不相同，因此，據(jù)此可用于黃酮母核類型的判斷。（一）黃酮類在甲醇中的UV特點(diǎn)黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)鑒定苯甲?；鶐I：220~280nm桂皮?；鶐：300~400nm不同類型黃酮的UV基本特征峰形帶II（240~285nm，苯甲酰系統(tǒng)）帶I（300~400nm，桂皮酰系統(tǒng)）類型取代250-280304-350黃酮類OH取代可以使相應(yīng)的帶I或II紅移，Ｂ環(huán)具有３’,4’羥基，帶II為雙峰328-357黃酮醇類（3-OR）358-385黃酮醇類（3-OH）245-270300-330異黃酮類B環(huán)OH和OMe對(duì)帶I影響不大270-295二氫黃酮220-270340-390查爾酮類2’-OH使帶I紅移230-270370-430橙酮類帶I有3-4個(gè)小峰a.b.共性：兩者UV光譜圖形相似，帶Ⅰ、帶Ⅱ均較強(qiáng)區(qū)別：帶Ⅰ位置不同黃酮：304~350nm

黃酮醇（3-OH游離）：358~385nm

黃酮醇（3-OH取代）：328~357nm1.黃酮及黃酮醇類利用在MeOH中的UV區(qū)別黃酮和黃酮醇類BandI黃酮黃酮醇（3-O被取代）黃酮醇（3-OH游離）328357304350358385~~~黃酮類在MeOH中——B環(huán)氧代對(duì)BandI的影響

黃酮類在MeOH中——A環(huán)氧代對(duì)BandII的影響252268274紅移紅移Ⅱ

Ⅰc.

d.共性：帶Ⅱ?yàn)橹鞣澹瑤Б窈苋?，常在主峰的長波方向有一肩峰。區(qū)別：帶Ⅱ峰位不同異黃酮：245~270nm二氫黃酮（醇）：270~295nm2.異黃酮、二氫黃酮（醇）類ⅡⅠe.f.共性：帶Ⅰ很強(qiáng)，為主峰，帶Ⅱ較弱，為次強(qiáng)峰，帶Ⅱ:220～270nm區(qū)別：帶Ⅰ峰位不同查爾酮：340～390nm

橙酮：370～430nm

3.查爾酮及橙酮類ⅠⅡ常用的診斷試劑：甲醇鈉(NaOCH3)

醋酸鈉(NaOCOCH3)

醋酸鈉/硼酸(NaOCOCH3/H3BO3)

三氯化鋁(AlCl3)

三氯化鋁/鹽酸(AlCl3/HCl)（二）加入診斷試劑的UV光譜在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用診斷試劑對(duì)黃酮類化合物UV譜圖的影響及結(jié)構(gòu)的關(guān)系診斷試劑帶II帶I歸屬NaOCH3紅移40-65nm,強(qiáng)度不降示有4’-OH紅移50-60nm,強(qiáng)度下降示有3-OH,

但無4’-OH吸收譜隨時(shí)間延長而衰退示有對(duì)堿敏感的取代方式NaOAc（未熔融）紅移5-20nm在長波一側(cè)有明顯肩峰示有7-OH示有4’-OH，但無3或7-OHNaOAc（熔融）紅移40-65nm強(qiáng)度下降示有4’-OH吸收譜隨時(shí)間延長而衰退示有對(duì)堿敏感的取代方式診斷試劑帶II帶I歸屬NaOAc/H3BO3紅移5-10nm示A環(huán)有鄰二酚羥基，但不包括5,6-二羥基紅移12-30nm示B環(huán)有鄰二酚羥基AlCl3及AlCl3/HClAlCl3/HCl譜圖

=AlCl3譜圖

示結(jié)構(gòu)中無鄰二酚羥基AlCl3/HCl譜圖

≠AlCl3譜圖

示結(jié)構(gòu)中可能有鄰二酚羥基帶I或Ia紫移30-40nm示B環(huán)有鄰二酚羥基帶I或Ia紫移50-65nm示A、B環(huán)上均有鄰二酚羥基AlCl3/HCl譜圖

=CH3OH譜圖

示無3-或5-OHAlCl3/HCl譜圖

≠CH3OH譜圖

示可能有3-或5-OH帶I紅移35-55nm示只有5-OH帶I紅移60nm示只有3-OH帶I紅移50-60nm示可能同時(shí)有3-和5-OH帶I紅移17-20nm除5-OH外，還有6-含氧取代診斷試劑對(duì)黃酮類化合物UV譜圖的影響及結(jié)構(gòu)的關(guān)系1.NaOMe：堿性強(qiáng)，酚OH易形成鈉鹽。ArOHArO-Na+，2.從而增加電子云密度和流動(dòng)性紅移。200300400500MeOH-NaOMe-+50nm,強(qiáng)度增加（不降）有4-OH1.NaOMe200300400500MeOH-NaOMe-+50nm，強(qiáng)度降低有3-OH，無4-OH1.NaOMe2.NaOAc：

未熔融:

堿性較弱，只能使黃酮母核上酸性較強(qiáng)的酚OH解離而使UV譜紅移。

熔融：堿性,表現(xiàn)出與NaOMe類似的效果。堿性較弱，酸性強(qiáng)的Ar-OH解離帶Ⅱ，+5~20nm——示有7-OH2.NaOAc（未熔融）200300400500MeOH-NaOAc-+12nm3.NaOAc/H3BO3：用于鑒定鄰二酚OH。在醋酸鈉堿性下，鄰二酚OH與硼酸絡(luò)合，引起峰帶紅移。3.NaOAc/H3BO3帶Ⅱ，+5～10nm——A環(huán)有鄰二Ar-OH帶Ⅰ，+12～30nm——B環(huán)有鄰二Ar-OH3.NaOAc/H3BO34.AlCl35.AlCl3/HCl：

分子中有3-OH，5-OH，鄰二酚OH時(shí)，可與Al3+絡(luò)合，引起吸收峰紅移。鋁絡(luò)合物穩(wěn)定性：

黃酮醇3-OH＞黃酮5-OH＞二氫黃酮5-OH＞鄰二酚OH＞二氫黃酮醇3-OHAlCl3

和AlCl3/HClAlCl3

和AlCl3/HClAlCl3——

AlCl3/HCl……-43nmB環(huán)有鄰二Ar-OHAlCl3

和AlCl3/HClTHANKYOUSUCCESS2023/7/2028可編輯

黃酮（醇）：帶II、帶I均強(qiáng)母核光譜特征二氫黃酮類、異黃酮類：帶II強(qiáng)、帶I弱

母核的推斷（甲醇）查耳酮、橙酮：帶II弱、帶I強(qiáng)取代基：OH等，為助色團(tuán)

依紅移規(guī)律推斷取代基團(tuán)

甲醇鈉：強(qiáng)堿，所有酚羥基解離醋酸鈉：堿性弱，酸性強(qiáng)的酚羥基解離

醋酸鈉/硼酸：鄰二酚羥基絡(luò)和三氯化鋁：3-OH，4-羰基5-OH，4-羰基絡(luò)和鄰二酚羥基加入診斷試劑相應(yīng)吸收峰紅移實(shí)例P.107木犀草素4’3’57

二、1H-NMR譜在黃酮結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用常用溶劑有CDCl3，適用于測定極性較小的黃酮苷元。極性較大的黃酮類化合物應(yīng)用DMSO--d6（全氘代的二甲亞砜）或?qū)悠废戎瞥扇谆杳蜒苌铮肅Cl4作為測定溶劑，但不能顯示羥基質(zhì)子特征，目前已基本不被采用。

用DMSO-d6作為溶劑，對(duì)黃酮苷及苷元均能溶解，能測定-OH質(zhì)子信號(hào)，但DMSO-d6沸點(diǎn)高，樣品不易回收，溶劑本身往往易吸水則在δ3.5ppm處出現(xiàn)水峰掩蓋該區(qū)域質(zhì)子信號(hào)。(一)C環(huán)質(zhì)子1.黃酮醇,黃酮:H-3,dH6.3,s(尖單峰)2.異黃酮H-2C=Oβ位低場dH7.6~7.8,s

3.二氫黃酮(醇)二氫黃酮ABX系統(tǒng)二氫黃酮醇4.查耳酮及橙酮類1)5,7-二OH取代

A環(huán)上只有H-6,H-8;為間位偶合,dH5.70~6.90,d峰,H-6較高場（二）A環(huán)質(zhì)子

2)7-OH取代

H-5:C=O去屏蔽dH=8.0

H-5H-6H-8ddddJ5,6=Jo=9.0HzJ6,5=Jo=9.0HzJ8,6=Jm=2.5HzJ6,8=Jm=2.5Hz

(三)B環(huán)質(zhì)子1)4’-OR取代

為AA’BB’系統(tǒng)四重峰dH6.5~7.9

2)3’,4’-二OR

H-6’H-2’H-5’

dH7.2~7.96.7~7.1ddddJo=8.5HzJm=2.5HzJo=8.5HzJm=2.5Hz

3)3’,4’,5’-三OR

H-2’,6’dH6.5~7.5,s(四)糖上的質(zhì)子黃酮苷類化合物上糖的質(zhì)子信號(hào)（端基質(zhì)子）

黃酮醇-3-O-葡萄糖苷5.70~6.00

黃酮醇-3-O-鼠李糖苷5.00~5.10

黃酮類-7-O-葡萄糖苷4.80~5.20

黃酮類-4’-O-葡萄糖苷黃酮類-5-O-葡萄糖苷黃酮類-6及8-C-糖苷甲氧基質(zhì)子甲氧基質(zhì)子信號(hào)一般在：ppm3.50~4.10(四)其他質(zhì)子6-及8-CH3

dH~2.0且6-CH3質(zhì)子較8-CH3質(zhì)子稍高場0.2ppm三、13C-NMR譜在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用利用13C-NMR譜中黃酮類化合物的中央三個(gè)碳核信號(hào)的位置以及它們?cè)谄舱袢ヅ甲V中的裂分情況。黃酮類化合物骨架類型的判斷利用黃酮類化合物中芳香碳原子（A-環(huán)碳原子、B-環(huán)碳原子）的信號(hào)特征確定取代基的取代圖式

黃酮母核13C-NMR信號(hào)歸屬四、質(zhì)譜在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用方法：EI-MS（電子轟擊質(zhì)譜）、FD-MS（場解吸質(zhì)譜）、FAB-MS（快原子轟擊質(zhì)譜）苷元：EI-MS可得到分子離子峰(強(qiáng),往往為基峰)；苷：用FD-MS、FAB-MS或?qū)⑦白鞒杉谆蛉谆杳鸦苌铮贉yEI-MS。黃酮類化合物MS特征——測定分子量（M+）苷元（極性小）EI-MS（以前）：苷看不到,須制備成衍生物PM等）方能測得很弱的[M]+、苷元峰為基峰。FD-MS、FAB-MS、ESI-MS（目前）：可測得分子離子峰[M]+或準(zhǔn)分子離子峰[M+1]、[M+23]等。EI-MS裂解規(guī)律1．分子離子峰為基峰[M]+用于測定分子；2．主要碎片離子峰為裂解途徑I產(chǎn)生的A1和B1及裂解途徑II產(chǎn)生的[B2]+。取代基團(tuán)推斷（碎片離子峰）苷（極性大、難氣化、與熱不穩(wěn)定）裂解途徑I（RDA裂解）：裂解途徑II：通常，上述兩種基本裂解途徑是相互競爭、相互制約的。并且，途徑I裂解產(chǎn)生的碎片離子豐度大致與途徑II裂解產(chǎn)生的碎片離子的豐度互成反比。m/z=222m/z=105m/z=222m/z=102m/z=120

.兩種途徑裂解得到的碎片離子A1、B1、B2等，保留著A-環(huán)、B-環(huán)的基本骨架，且碎片A1與相應(yīng)的B1碎片的質(zhì)荷比之和等于分子離子[M]+的質(zhì)荷比。根據(jù)結(jié)果推斷結(jié)構(gòu)：母核推斷A、B-環(huán)取代情況確定槐米為豆科植物槐（SophorajaponicaL.）的花蕾。其主要有效成分為蕓香苷（又稱蘆?。?，有維生素P樣作用，能保持和恢復(fù)毛細(xì)血管的正常彈性，臨床上常作為治療高血壓的輔助藥和毛細(xì)血管脆性所致出血的止血藥。第7節(jié)含黃酮類化合物的中藥實(shí)例蕓香苷為淡黃色的粉末或細(xì)微針狀結(jié)晶，常含3分子結(jié)晶水，加熱至185℃以上熔融繼而分解。在冷水中溶解度為1:10000，沸水中1:200，冷乙醇中1:650，沸乙醇中1:60，可溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、吡啶和堿性溶液中，不溶于石油醚、苯、氯仿及乙醚中流程說明：本流程利用蕓香苷溶于堿水，酸化后又可析出的性質(zhì)進(jìn)行提取。蕓香苷分子中因含有鄰二酚羥基，性質(zhì)不太穩(wěn)定，暴露在空氣中能緩緩氧化變?yōu)榘岛稚?，在堿性條件下更容易被氧化分解。硼酸鹽能與鄰二酚羥基結(jié)合，達(dá)到保護(hù)的目的，故在堿性溶液中加熱提取蕓香苷時(shí)，往往加入少量硼砂。

槐米中蕓香苷的提取工藝流程：黃芩為唇形科