（一）材料選擇原料來(lái)源包括動(dòng)物、植物及微生物等。選擇原料時(shí)應(yīng)考慮來(lái)源豐富、目的物含量高、成本低且易于提取的材料。同時(shí)應(yīng)考慮其種屬、發(fā)育階段、生物狀態(tài)、來(lái)源、解剖部位、生物技術(shù)產(chǎn)品的宿主菌或細(xì)胞等因素的影響。（二）蛋白質(zhì)提純的一般方法1．根據(jù)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的不同來(lái)純化蛋白質(zhì)。2．根據(jù)蛋白質(zhì)分子形狀和大小不同來(lái)純化蛋白質(zhì)。3．根據(jù)溶解度的不同來(lái)純化蛋白質(zhì)。4．根據(jù)電離性質(zhì)的不同來(lái)純化蛋白質(zhì)。5．根據(jù)蛋白質(zhì)功能專一性的不同來(lái)純化蛋白質(zhì)。（二）蛋白質(zhì)提純的一般方法（二）蛋白質(zhì)提純的一般方法對(duì)蛋白質(zhì)的離子交換層析，一般多用離子交換纖維和以葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等為骨架的離子交換劑，主要是取其具有較大的蛋白質(zhì)吸附容量，較高的流速和分辨率等優(yōu)點(diǎn)。另外電泳法亦是利用電離性質(zhì)的不同來(lái)分離純化蛋白質(zhì)。

（二）蛋白質(zhì)提純的一般方法6．根據(jù)蛋白質(zhì)疏水基團(tuán)與相應(yīng)的載體基團(tuán)結(jié)合來(lái)純化蛋白質(zhì)。7．根據(jù)蛋白質(zhì)在溶劑系統(tǒng)中分配的不同來(lái)純化蛋白質(zhì)8．根據(jù)蛋白質(zhì)受物理、化學(xué)等作用因素的影響來(lái)純化蛋白質(zhì)。9．根據(jù)蛋白質(zhì)的選擇性吸附性質(zhì)來(lái)純化蛋白質(zhì)。10．根據(jù)酶對(duì)蛋白質(zhì)的作用來(lái)純化蛋白質(zhì)。（三）蛋白質(zhì)的分離和純化1．時(shí)間因素在蛋白質(zhì)分離和純化過程中，共同的問題是蛋白質(zhì)反應(yīng)達(dá)到平衡所需要的時(shí)間，而且為避免蛋白質(zhì)的變性、微生物的污染等，操作常在低溫環(huán)境中進(jìn)行。通常在25℃時(shí)，化學(xué)反應(yīng)的速率是低溫5℃時(shí)的3-4倍。2．選擇離子交換層析條件的程序（三）蛋白質(zhì)的分離和純化3.蛋白質(zhì)分離純化的可能的技術(shù)手段的組合（三）蛋白質(zhì)的分離和純化分步分離純化的可能步驟（四）溶液中蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定1.UV法（1）280nm光吸收法（2）280nm和260nm的吸收差法（3）215nm和225nm的吸收差法2.雙縮脲法3.福林一酚試劑法4.考馬斯亮藍(lán)G-250染色法

（五）純度檢查確定protein的純度標(biāo)準(zhǔn)一般為：分子大小是否均一，電荷是否均一，是否具有恒定的氨基酸組成，是否具有單一的N端和C端殘基，能否結(jié)晶，進(jìn)一步純化時(shí)生物活性是否有所提高等。（五）純度檢查常用蛋白質(zhì)純度檢查的方法有：1．HPLC或FPLC2．電泳均一性3．免疫化學(xué)法4．生物測(cè)定法（五）純度檢查5．分光光度法（1）UV法（2）IR法6．高速離心法7．可結(jié)晶性8．N端，C端的測(cè)定9．恒定的氨基酸比多肽類

概述由氨基酸縮合而成的化合物稱為多肽，它們是通過一個(gè)氨基酸分子的-NH與另一分子氨基酸的-COOH脫去一分子水形成-CO-NH-鍵而相互連接起來(lái)的。概述一般將50或50個(gè)以下的氨基酸殘基組成的化合物，列入多肽。多數(shù)無(wú)特定空間構(gòu)象，某些多肽也有一定構(gòu)象，但其構(gòu)象的堅(jiān)固性遠(yuǎn)不如蛋白質(zhì)，其構(gòu)象的浮動(dòng)性很大。多肽在生物體內(nèi)的濃度很低，在血液中一般為,但它們的生理活性很強(qiáng)，在調(diào)節(jié)生理功能時(shí)起著非常重要的作用。概述活性多肽主要是從內(nèi)分泌腺、組織器官、分泌細(xì)胞和體液中產(chǎn)生或獲得的。1953年人工合成了第一個(gè)有生物活性的多肽——催產(chǎn)素（OT）。到了60、70年代神經(jīng)肽的研究進(jìn)入高潮。同時(shí)，由于很多腦活性肽也存在于胃腸道組織中，從而推動(dòng)了胃腸道激素的研究.到了70年代，生物技術(shù)的發(fā)展更開拓了多肽藥物的新領(lǐng)域——細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子已近100種.概述許多活性蛋白質(zhì)，多肽都是由無(wú)活性的蛋白質(zhì)前體，經(jīng)過酶的加工剪切轉(zhuǎn)化而來(lái)的。它們中間許多有共同的來(lái)源，相似的結(jié)構(gòu)，甚至還保留著若干彼此所特有的生物活性。研究活性多肽結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系及活性多肽之間結(jié)構(gòu)的異同與其活性的關(guān)系,將有助于設(shè)計(jì)和研制新的活性多肽藥物。臨床上有一些確有療效的組織提取制劑其有效成分有的還不十分清楚，從活性肽或細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子的角度去研究它們的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制，預(yù)計(jì)可獲得成效主要多肽類藥物1．多肽激素①垂體多肽激素：促皮質(zhì)素（ACTH），促黑激素（MSH）②下丘腦激素：促甲狀腺激素釋放激素（TRH），生長(zhǎng)素抑制激素（GRIF）③甲狀腺激素：甲狀旁腺激素（PTH），降鈣素（CT）。④胰島激素：胰高血糖素，胰解痙多肽。⑤胃腸胃道激素：胃泌素，膽囊收縮素一促胰激素（CCK-PZ）⑥胸腺激素：胸腺素、胸腺肽主要多肽類藥物2．多肽類細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、轉(zhuǎn)移因子（TF）、心鈉素（ANP）等。3．含有多肽成分的其他生化藥物骨寧、血活素等。主要多肽類藥物制備（一）胸腺激素（二）促皮質(zhì)素（ACTH）（三）降鈣素（一）胸腺激素胸腺是一個(gè)激素分泌器官。對(duì)免疫功能有多方面的影響。胸腺位于縱隔腔上部，胸骨后方.胸腺發(fā)生于胚胎第二個(gè)月。到出生二年內(nèi)，生長(zhǎng)迅速，體積較大，到青春期仍繼續(xù)發(fā)育，青春期后發(fā)生萎縮。因此胸腺原料必須采自幼齡動(dòng)物（一）胸腺激素胸腺依賴性的淋巴細(xì)胞群——T細(xì)胞直接參與有關(guān)免疫反應(yīng)T細(xì)胞主司細(xì)胞免疫（機(jī)體在特異抗原的刺激下，以T細(xì)胞為主產(chǎn)生致敏淋巴細(xì)胞的免疫反應(yīng)稱細(xì)胞免疫）。主要胸腺激素制劑名稱化學(xué)性質(zhì)胸腺素組分5一族酸性多肽，MW1000～15000豬胸腺素注射液多肽混合物，MW15000以下胸腺素a1具有28個(gè)氨基酸殘基的多肽，MW5562，pI4.2胸腺體液因子多肽，MW3200，pI5.7血清胸腺因子9肽，MW857，pI7.5胸腺生成素具有49個(gè)氨基酸殘基的多肽，MW5562，pI5.7胸腺因子X多肽，MW4200胸腺刺激素多肽混合物自身穩(wěn)定胸腺激素糖肽，MW1800～2500注：MW＝分子量；pI＝等電點(diǎn)（一）胸腺激素－胸腺素以胸腺為原料，按一定方法提取純化胸腺的第五種組分。組分5，在80℃熱穩(wěn)定的由40～50種多肽組成的混合物，MW為1.000～15.000。pI3.5～9.5。分三個(gè)區(qū)域：α區(qū)，β區(qū)，γ區(qū)。其中，主要活性組分為α1、α5、α7、β3、β4等。（一）胸腺激素－胸腺素主要生物學(xué)功能表現(xiàn)在：連續(xù)誘導(dǎo)T細(xì)胞分化發(fā)育的各個(gè)階段，放大并增強(qiáng)成熟T細(xì)胞對(duì)抗原或其他刺激物的反應(yīng)，維持機(jī)體的免疫平衡狀態(tài)（一）胸腺激素－胸腺素工藝路線（一）胸腺激素－胸腺素檢驗(yàn)方法：活力測(cè)定：E-玫瑰花結(jié)升高百分?jǐn)?shù)不得低于10%。分子量15.000以下。（T細(xì)胞與綿羊紅細(xì)胞產(chǎn)生E-玫瑰花結(jié)）。作用與用途：免疫調(diào)節(jié)劑

臨床用于免疫缺陷病、自身免疫病、變態(tài)反應(yīng)性疾病、細(xì)胞免疫功能減退的中老年人疾病、抗衰老、抗腫瘤的治療。（一）胸腺激素－胸腺肽是從幼年動(dòng)物的胸腺中提取制備的一種具高活力的混合肽類藥物制劑。MW是9.600和7.000左右的兩類蛋白質(zhì)或肽類，氨基酸的組成達(dá)15種，必需氨基酸含量高，還含有RNA、DNA、對(duì)熱較穩(wěn)定，加溫80℃生物活性不降低。經(jīng)蛋白水解酶作用，生物活性消失（一）胸腺激素－胸腺肽工藝路線（一）胸腺激素－胸腺肽檢驗(yàn)方法：活力測(cè)定同胸腺素。分子量10.000以下。作用與用途：調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫功能，有較好的抗衰老和抗病毒作用。適用于原發(fā)性和繼發(fā)性免疫缺陷病以及因免疫功能失調(diào)引起的疾病。對(duì)腫瘤有良好的輔助治療作用。也用于貧血、肝炎等。無(wú)過敏反應(yīng)和不良的副作用。蛋白類

概述（一）蛋白類藥物的分類（二）蛋白類藥物作用方式（三）應(yīng)用基因工程技術(shù)制備重要的蛋白類藥物（四）蛋白質(zhì)工程技術(shù)的應(yīng)用（一）蛋白類藥物的分類1．蛋白質(zhì)激素（1）垂體蛋白質(zhì)激素（2）促性腺激素（3）胰島素及其他蛋白質(zhì)激素2．血漿蛋白質(zhì)

如白蛋白，免疫丙種球蛋白。3．蛋白質(zhì)類細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子

干擾素α、β、γ，F(xiàn)L（一）蛋白類藥物的分類4．粘蛋白

如胃膜素等。5．膠原蛋白如明膠，阿膠。

明膠：牛、羊的皮、骨、肌腱中所含的骨膠原，經(jīng)水煮并蒸發(fā)濃縮而得到的干燥蛋白質(zhì)。治療吐血、內(nèi)臟出血，也用于膠囊、腸衣、栓劑的基質(zhì)。阿膠：驢皮去毛后加水熬制而成的膠塊。滋腎補(bǔ)血，止血。（一）蛋白類藥物的分類6．堿性蛋白質(zhì)

硫酸魚精蛋白，存在于魚類成熟的精子中，強(qiáng)堿性。7．蛋白酶抑制劑

如胰蛋白酶抑制劑，亦稱抑肽酶。8．植物凝集素

PHA、ConA。（二）蛋白類藥物作用方式已從生化藥物對(duì)機(jī)體各系統(tǒng)和細(xì)胞生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)擴(kuò)展到被動(dòng)免疫、替代療法、抗凝血?jiǎng)┮约暗鞍酌傅囊种莆锏榷喾N領(lǐng)域（三）應(yīng)用基因工程技術(shù)制備重要的蛋白類藥物已實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品工業(yè)化的有幾十種，并正從微生物和動(dòng)物細(xì)胞的表達(dá)轉(zhuǎn)向基因動(dòng)植物的表達(dá)。（四）蛋白質(zhì)工程技術(shù)的應(yīng)用鑒于一些蛋白質(zhì)和多肽生化藥物有一定抗原性，容易失活，體內(nèi)半衰期短，用藥途徑受限制等缺點(diǎn)。應(yīng)用蛋白質(zhì)工程技術(shù)對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，設(shè)計(jì)小分子代替大分子，并增強(qiáng)或增加其選擇性療效。主要蛋白質(zhì)類藥物的制備（一）白蛋白（二）胰島素（Insulin）（一）白蛋白白蛋白又稱清蛋白，是血漿中含量最多的蛋白質(zhì)，約占總蛋白的55%，由575個(gè)氨基酸組成，單鏈，可溶于水，MW65000、PI4.7。加入NaCl能提高其熱穩(wěn)定性。（一）白蛋白血液的組成從健康人的血管內(nèi)抽一些血放到試管里，并加上一些抗凝物質(zhì)（如枸櫞酸鈉），從而使血液保持液體狀態(tài)。靜置一段時(shí)間后可發(fā)現(xiàn)試管內(nèi)的血液分成兩部分，上面是淺黃色透明的液體，稱為血漿。下面為血細(xì)胞，大部分是紅細(xì)胞。在紅細(xì)胞表面有一薄層白細(xì)胞和血小板，因此，血液就是血漿和血細(xì)胞兩部分組成的。血漿中絕大部分是水，此外還含有：蛋白質(zhì)、葡萄糖、無(wú)機(jī)鹽和代謝終產(chǎn)物等多種物質(zhì)。（一）白蛋白-工藝路線（一）白蛋白白蛋白的兩種制品：

人血清白蛋白（從健康人血漿中分離的）。

胎盤血白蛋白（從健康產(chǎn)婦胎盤中分離的）。制劑狀態(tài)：淡黃色略粘稠的澄明液體或白色疏松狀（凍干）固體。作用與用途：維持血漿膠體滲透壓，用于失血性休克，嚴(yán)重?zé)齻?，低蛋白血癥等的治療。（二）胰島素（Insulin）1922年從胰臟中提取得到Insulin。1923年開始供應(yīng)臨床使用。1955年首次報(bào)道了胰島素的氨基酸序列；我國(guó)在1965年在世界上首先成功完成牛結(jié)晶胰島素的全合成工作；1969年確定了胰島素的三維結(jié)構(gòu)；1979年克隆了胰島素基因；1982年胰島素被批準(zhǔn)上市，成為第一個(gè)投放市場(chǎng)的基因工程藥物（二）胰島素（Insulin）糖尿?。阂葝u素分泌不足或作用障礙，致使血糖升高，腎臟不能將腎小球?yàn)V液中的葡萄糖重吸收回血，出現(xiàn)尿糖增加，并伴隨多尿，引起多飲多食，體重減少。胰島中的胰島素原經(jīng)過酶水解產(chǎn)生胰島素，進(jìn)入血液循環(huán)。（二）胰島素（Insulin）胰島素原是由一條連接肽（C肽）一端與胰島素的A鏈的N端相連，另一端與B端相連。胰島素由51個(gè)氨基酸組成。有A、B兩鏈，（A鏈21個(gè)、B鏈30個(gè)），兩鏈由兩個(gè)二硫鍵相連。（二）胰島素（Insulin）人體分泌胰島素過程（二）胰島素（Insulin）胰島素立體結(jié)構(gòu)圖（二）胰島素（Insulin）不同種屬動(dòng)物的胰島素，主要差別在A鏈的第8-10位氨基酸及B鏈的第30位氨基酸（C末端上）（二）胰島素（Insulin）－性質(zhì)胰島素為白色或類白色的扁斜形六面體結(jié)晶粉末難溶于水，易溶于稀酸或稀堿溶液，也易溶于80%以下的乙醇或丙酮。在90%以上乙醇或80%以上丙酮中難溶。在高濃度鋅的solu中pH6～8時(shí)胰島素溶解度急劇下降pI5.30-5.35分子量5000多易與Zn2+,Cd2+,Co2+

等2價(jià)金屬離子結(jié)合。在鋅鹽存在下，胰島素的pI可增至6.0左右。（二）胰島素（Insulin）－性質(zhì)胰島素在弱酸性水溶液或混懸在中性緩沖液中較為穩(wěn)定。在水溶液中胰島素分子受pH、溫度、離子強(qiáng)度的影響產(chǎn)生聚合和解聚現(xiàn)象。胰島素可被胰島素酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶等水解，不能口服，只能注射。在血液及組織中也能被蛋白酶水解，因此在體內(nèi)失效很快，半衰期很短。藥用胰島素常制成鋅胰島素，也可制成魚精蛋白胰島素。（二）胰島素（Insulin）－工藝路線（二）胰島素（Insulin）－說(shuō)明與討論（1）胰臟質(zhì)量是胰島素生產(chǎn)中的關(guān)鍵。采摘胰臟要注意保持腺體組織的完整，避免摘斷，要立即深凍。胰尾部分含胰島素含量較高。并貯存不宜過久。（二）胰島素（Insulin）－說(shuō)明與討論（2）第一次提取用86%乙醇，與胰糜混合后，其最終百分濃度為70%左右，不僅能完全溶解胰島素，而且能抑制蛋白水解酶的活力。（3）草酸是弱酸，較溫和，控制pH在2.5,不僅胰島素較穩(wěn)定，還能抑制蛋白水解酶的活力。（4）提取溫度控制在10-15℃

，因?yàn)闇囟绕邥?huì)增強(qiáng)酶對(duì)胰島素的破壞作用，會(huì)使油脂含量增加，影響分離工序。（二）胰島素（Insulin）－說(shuō)明與討論（5）堿化時(shí)pH控制在8.2-8.4，pH低了除堿性蛋白不完全，