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知識目標(biāo)掌握:抗原抗體結(jié)合力和抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)(重難點(diǎn))。熟悉:影響抗原抗體反應(yīng)因素(難點(diǎn))。了解:抗原抗體反應(yīng)原理(難點(diǎn))、抗原抗體反應(yīng)類型。教學(xué)目標(biāo)能力目標(biāo)利用抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)進(jìn)行免疫學(xué)檢測。思政-素質(zhì)目標(biāo)嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的作風(fēng)、質(zhì)控、生物安全意識等抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)。影響抗原抗體反應(yīng)因素??乖贵w反應(yīng)原理。本章要點(diǎn)二三四目錄一抗原抗體反應(yīng)原理抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)抗原抗體反應(yīng)的影響因素抗原抗體反應(yīng)類型抗原抗體在體內(nèi)體外能發(fā)生特異性結(jié)合。由于抗原理化性狀和抗體類型不同,抗原抗體結(jié)合后表現(xiàn)出不同的反應(yīng)類型,可用于疾病的診斷、病原鑒定、藥物分析等檢測。如何利用抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)準(zhǔn)確的進(jìn)行免疫學(xué)檢測是一個重要內(nèi)容。前言基本概念抗原抗體反應(yīng)
抗原與抗體在體內(nèi)或體外發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)??乖贵w反應(yīng)的原理和物質(zhì)基礎(chǔ):抗原表位與抗體高變區(qū)間的互補(bǔ)結(jié)合在極短距離內(nèi)才能發(fā)生一抗原抗體反應(yīng)原理一、抗原抗體結(jié)合力靜電引力:又稱庫倫引力指帶電離子基團(tuán)(如:—NH3+和COO-)之間的引力,距離越近引力越大。范德華引力:
原子與原子、分子與分子相互接近時分子極化作用發(fā)生的一種吸引力,其決定分子空間構(gòu)型。能量小于靜電引力。氫鍵:由分子中H原子與電負(fù)性大的O和N原子等相互作用形成的引力,結(jié)合力較范德華力強(qiáng),因?yàn)樾枰軞潴w和供氫體之間的互補(bǔ)形成氫鍵,因此更具有特異性。疏水作用:疏水集團(tuán)相互排斥水分子而趨于聚集的力。作用力最強(qiáng),占總結(jié)合力的50%。
二、抗原抗體親和力和合力親和力(affinity)抗體分子上一個抗原結(jié)合點(diǎn)與對應(yīng)的抗原決定簇之間的結(jié)合強(qiáng)度,用平衡常數(shù)K值表示,K值越高抗原抗體結(jié)合越牢固親合力(avidity)
一個完整的抗體結(jié)合部位與若干個抗原表位之間結(jié)合的強(qiáng)度。三、親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體形成可見抗原抗體反應(yīng)抗原/抗體結(jié)合水化層變薄,失去親水性電解質(zhì)中和膠體粒子表面電荷,使各疏水膠體進(jìn)一步靠攏疏水膠體知識目標(biāo)掌握:抗原抗體結(jié)合力和抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)(重難點(diǎn))。熟悉:影響抗原抗體反應(yīng)因素(難點(diǎn))。了解:抗原抗體反應(yīng)原理(難點(diǎn))、抗原抗體反應(yīng)類型。教學(xué)目標(biāo)能力目標(biāo)利用抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)進(jìn)行免疫學(xué)檢測。思政-素質(zhì)目標(biāo)嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的作風(fēng)、質(zhì)控、生物安全意識等抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)。影響抗原抗體反應(yīng)因素??乖贵w反應(yīng)原理。本章要點(diǎn)一三四目錄抗原抗體反應(yīng)原理二抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)抗原抗體反應(yīng)的影響因素抗原抗體反應(yīng)類型二抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)
特異性:抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)的專一性。分子基礎(chǔ):抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間空間構(gòu)型的互補(bǔ)性。交叉反應(yīng):兩種不同的抗原分子具有部分相同或類似結(jié)構(gòu)的抗原表位,可與彼此相應(yīng)的抗血清發(fā)生反應(yīng)。缺點(diǎn):影響檢測的準(zhǔn)確性優(yōu)點(diǎn):協(xié)助檢測一、特異性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合成復(fù)合物后,在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性(非共價鍵結(jié)合)影響因素:抗體對相應(yīng)抗原的親合力:親合力越高,結(jié)合越牢固,越不易解離。環(huán)境因素對復(fù)合物的影響:pH(破壞離子間的靜電引力)、離子強(qiáng)度(破壞離子間的靜電引力)二、可逆性前帶(prezone):抗體過量后帶(postzone):抗原過量等價帶(equivalencezone):抗原抗體比例合適三、比例性
免疫學(xué)檢測時,由于帶現(xiàn)象的干擾,導(dǎo)致假陰性結(jié)果??贵w的兩個Fab段分別結(jié)合兩個Ag分子,相互交叉結(jié)合連接成巨大的網(wǎng)格狀立體聚合物,(可見)。二者比例合適過剩方的結(jié)合價得不到飽和,大多數(shù)游離存在,只形成小分子復(fù)合物(不可見)。由此可知:確定
的濃度非常重要,即在實(shí)驗(yàn)中需對Ag/Ab進(jìn)行適當(dāng)?shù)?/p>
,調(diào)整二者的比例,產(chǎn)生可見反應(yīng)。
一般原則:固定
含量(Ag/Ab)的濃度,稀釋
含量的(Ab/Ag)。
一般可溶性Ag稀釋
,顆粒性Ag,稀釋
。Ag/Ab稀釋低高AgAb第一階段:特異性結(jié)合階段,反應(yīng)快,不可見(數(shù)秒或數(shù)分鐘內(nèi)完成)。第二階段:反應(yīng)可見階段,反應(yīng)慢(數(shù)分鐘或數(shù)小時或數(shù)日)),出現(xiàn)凝集、沉淀和細(xì)胞溶解等現(xiàn)象。受電解質(zhì)、溫度和酸堿度影響。四、階段性知識目標(biāo)掌握:抗原抗體結(jié)合力和抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)(重難點(diǎn))。熟悉:影響抗原抗體反應(yīng)因素(難點(diǎn))。了解:抗原抗體反應(yīng)原理(難點(diǎn))、抗原抗體反應(yīng)類型。教學(xué)目標(biāo)能力目標(biāo)利用抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)進(jìn)行免疫學(xué)檢測。思政-素質(zhì)目標(biāo)嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的作風(fēng)、質(zhì)控、生物安全意識等抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)。影響抗原抗體反應(yīng)因素??乖贵w反應(yīng)原理。本章要點(diǎn)一二三四目錄抗原抗體反應(yīng)原理抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)抗原抗體反應(yīng)的影響因素抗原抗體反應(yīng)類型三抗原抗體反應(yīng)的影響因素一、自身因素抗原:抗體來源:
驢和馬免疫血清:等價帶較窄(H型抗體)兔:等價帶較寬(R型抗體)
濃度:比例合適出現(xiàn)可見反應(yīng)親合力
可溶性抗原+相應(yīng)抗體→沉淀顆粒性抗原+相應(yīng)抗體→凝集單價抗原--不凝集或沉淀二、環(huán)境因素知識目標(biāo)掌握:抗原抗體結(jié)合力和抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)(重難點(diǎn))。熟悉:影響抗原抗體反應(yīng)因素(難點(diǎn))。了解:抗原抗體反應(yīng)原理(難點(diǎn))、抗原抗體反應(yīng)類型。教學(xué)目標(biāo)能力目標(biāo)利用抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)進(jìn)行免疫學(xué)檢測。思政-素質(zhì)目標(biāo)嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的作風(fēng)、質(zhì)控、生物安全意識等抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)。影響抗原抗體反應(yīng)因素??乖贵w反應(yīng)原理。本章要點(diǎn)一二三四目錄抗原抗體反應(yīng)原理抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)抗原抗體反應(yīng)的影響因素抗原抗體反應(yīng)類型四抗原抗體反應(yīng)類型反應(yīng)類型實(shí)驗(yàn)技術(shù)結(jié)果判斷凝集反應(yīng)直接凝集試驗(yàn)觀察凝集現(xiàn)象間接凝集試驗(yàn)同上抗球蛋白試驗(yàn)同上沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗(yàn)觀察沉淀,檢測濁度免疫電泳技術(shù)觀察掃描沉淀峰、沉淀弧補(bǔ)體參與的反應(yīng)補(bǔ)體溶血試驗(yàn)觀察測定溶血現(xiàn)象補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)同上抗原-抗體反應(yīng)的類型反應(yīng)類型實(shí)驗(yàn)技術(shù)結(jié)果判斷中和反應(yīng)病毒中和試驗(yàn)檢測病毒感染性毒素中和試驗(yàn)檢測外毒素毒性標(biāo)記免疫反應(yīng)熒光免疫技術(shù)檢測熒光現(xiàn)象放射免疫技術(shù)檢測放射性強(qiáng)度酶免疫技術(shù)檢測酶底物顯色發(fā)光免疫技術(shù)
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