革蘭染色細菌受色原理等電點學(xué)說：革蘭陽性菌的等電點（PI2-3)比革蘭陰性菌等電點(PI4-5)低，在同一PH條件下，陽性菌比陰性菌所帶負電荷要多，與帶正電荷的堿性染料結(jié)合力牢固，不易脫色細菌染色操作【器材及試劑的準(zhǔn)備】1.細菌標(biāo)本2.接種環(huán)、酒精燈3.載玻片4.濾紙5.革蘭染液：結(jié)晶紫溶液、革蘭碘液、95%乙醇（脫色液）、稀釋石炭酸復(fù)紅細菌染色操作1.準(zhǔn)備工作

（1）細菌涂片制作：取清潔無油載玻片一張，在其中央滴加一滴生理鹽水，將接種環(huán)用火焰燒紅滅菌，待冷卻后自固體培養(yǎng)基或瓊脂斜面上菌落挑取細菌少許混于生理鹽水中，輕輕涂抹制成直徑約1cm大小的薄層，然后將接種環(huán)用火焰燒紅滅菌。涂片置室溫自然干燥，干燥后，標(biāo)本面向上，用鐘擺樣速度來回通過火焰三次，使細菌殺死并固定于玻片上。1.準(zhǔn)備工作2.染色過程（1）用蠟筆在細菌涂片兩端畫線，以防染液溢出，然后將細菌涂片平放在染色架上。（2）初染：先加結(jié)晶紫染液數(shù)滴，以覆蓋整個菌膜為宜，染色1min。（3）用細流水自涂面上端向下輕輕沖去染液（切勿直接沖在標(biāo)本上面）（4）媒染：滴加革蘭碘液，覆蓋整個菌膜，作用1-3分鐘。2.染色過程（5）用細流水自涂面上端向下輕輕沖去染液（切勿直接沖在標(biāo)本上面）（6）脫色：滴加95%乙醇在菌膜上，并頻頻搖動玻片，至無紫色脫出為止（約20秒）。（7）用細流水自涂面上端向下輕輕沖去染液（切勿直接沖在標(biāo)本上面）2.染色過程（8）復(fù)染：加稀釋石炭酸復(fù)紅染液，覆蓋整個菌膜，半分鐘。（9）用細流水自涂面上端向下輕輕沖去染液（切勿直接沖在標(biāo)本上面）（10）用濾紙吸干細菌涂片上水分2.染色過程思考題為什么有些細菌革蘭染色會染成藍色，有些會染成紅色？革蘭陽性菌和革蘭陰性菌的判斷對于臨床治療有何意義？抗酸染色原理

分枝桿菌細胞壁含脂質(zhì)較多,其中主要成分為分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色時與石炭酸復(fù)紅結(jié)合牢固,能抵抗酸性乙醇的脫色作用,因此抗酸菌能保持復(fù)紅的顏色,達到染色目的。結(jié)核培養(yǎng)特性小結(jié)

饞--專性需氧，營養(yǎng)要求高最適生長溫度為35～37℃，pH6．5～6．8。

懶--生長緩慢，18h-20H分裂1次，在固體培養(yǎng)基上2～8w才出現(xiàn)肉眼可見的菌落。

丑--典型菌落為粗糙型，表面干燥呈顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，如菜花樣。結(jié)核桿菌菌落涂片染色步驟抗酸染色陽性菌石炭酸復(fù)紅（初染）3%鹽酸酒精（脫色）亞甲藍（復(fù)染）干燥油鏡下觀察5分鐘烤干至無色褪下水洗烤干1分鐘烤干抗酸陽性菌抗酸陽性菌抗酸陽性菌萋-尼抗酸染色鏡檢結(jié)果分級報告標(biāo)準(zhǔn)：仔細查遍整張涂片或連續(xù)觀察約300個，時間不少于4分鐘，根據(jù)檢查出的細菌數(shù)量來報告：檢出抗酸桿菌（+~4+）報告方式鏡檢結(jié)果P173萋尼抗酸染色鏡檢結(jié)果-仔細檢查300個視野未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌+/-300個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1-2條抗酸菌+100個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸菌2+10個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸菌3+每個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸菌4+每個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)9條以上抗酸菌思考題抗酸陽性菌是否就是結(jié)核分枝桿菌？抗酸染色過程為何要加熱？瑞氏染色染色原理

將一小滴血液均勻涂在玻片上，呈單層緊密分布，制成薄血片。用含天青B和伊紅的瑞氏染液進行染色。細胞中的堿性物質(zhì)會與酸性染料伊紅結(jié)合成紅色；細胞中的酸性物質(zhì)會與堿性染料亞甲蘭結(jié)合染成藍色；在中性顆粒與伊紅和亞甲蘭均可結(jié)合，染成淡紫紅色。染色原理瑞氏染液亞甲蘭+++伊紅----堿性物質(zhì)(Hb、嗜酸性顆粒)+++++酸性物質(zhì)(淋巴細胞胞質(zhì)嗜堿性顆粒)---------中性物質(zhì)(中性顆粒)±±±±染色器材載玻片、推片、吸耳球、顯微鏡、酒精燈、采血針和EDTA-K2真空管試劑：瑞氏染液標(biāo)本：EDTA-K2抗凝血Ⅰ液染液Ⅱ液磷酸鹽緩沖液（PH）血壓片的制備

良好的血涂片

1.厚薄適宜

2.頭體尾要明顯

3.細胞分要均勻

4.血膜邊緣要整齊

5.留有一定空隙fastslow血壓片的制備血壓片的制備染色過程操作：1.靜脈采血2.制作血涂片3.干燥涂片4.標(biāo)記涂片5.染色6.觀察結(jié)果1.將玻片平置于染色架上2.滴加染液Ⅰ液3-5滴，迅速蓋滿血涂片，0.5-1.0分鐘3.滴加Ⅱ液(等量或稍多)4.用吸耳球吸勻，讓兩種液體充分混合，5-10分5.用流水沖去染液，待干染色過程染色結(jié)果注意事項1.瑞氏染液：要放置時間長，染液成熟。2.采血：不能使用肝素抗凝標(biāo)本

玻片必須清潔干燥無塵使用玻片只能手持玻片邊緣。3.制作涂片：角度、速度、血量4.干燥涂片：一定要干透后才可染色5.染色：染液要適量，沖洗時不能先倒掉染液，應(yīng)以流水一起沖洗，時間不能過久，沖洗完的血涂片應(yīng)立放于支架上。思考題：在緩沖液偏酸或偏堿的情況下，染色結(jié)果會有何變化？血紅蛋白、嗜酸性顆粒、嗜堿性顆粒、染色質(zhì)分別是酸性還是堿性？血涂片的制備血細胞分析儀能夠快速的進行白細胞分類計數(shù)，但該法只是一種篩查的方法。

血涂片制備染色后顯微鏡檢查是血細胞形態(tài)學(xué)檢查的基本方法，對于各種血液病的診斷和鑒別診斷，具有重要價值。一、主要器材推片載玻片二、操作好涂片的標(biāo)準(zhǔn)1234兩側(cè)應(yīng)該留有空隙邊緣整齊頭體尾分明厚薄適宜三、質(zhì)量保證4無油膩3干燥2中性1清潔1玻片載玻片和推片應(yīng)符合要求2標(biāo)本未抗凝的毛細血管血或靜脈血EDTA-K2抗凝靜脈血可以用肝素抗凝抗凝血嗎？3、制片①制備厚薄適宜的血涂片推片速度推片速度血滴大?、谥苽溲し植季鶆虻难珹推片邊緣不整齊C用力不勻B載玻片不清潔血膜分布不均010203血膜太短涂片質(zhì)量問題角度大速度快可能原因調(diào)整推片的角度及推片的速度解決辦法血涂片質(zhì)量不佳的原因及解決辦法血涂片質(zhì)量不佳的原因及解決辦法010203血膜太薄太長涂片質(zhì)量問題角度小速度慢可能原因調(diào)整推片的角度及推片的速度解決辦法血涂片質(zhì)量不佳的原因及解決辦法010203血膜太厚兩邊未留空隙涂片質(zhì)量問題血量太大血滴展開太寬可能原因減少血量展開血滴時間不可太長解決辦法血涂片質(zhì)量不佳的原因及解決辦法010203血膜不規(guī)則間斷涂片質(zhì)量問題推片用力不