液相色譜法采用液體作為流動(dòng)相，利用物質(zhì)在兩相中的吸附或分配系數(shù)的微小差異達(dá)到分離的目的。當(dāng)兩相做相對(duì)移動(dòng)時(shí)，被測(cè)物質(zhì)在兩相之間進(jìn)行反復(fù)多次的質(zhì)量交換，使溶質(zhì)間微小的性質(zhì)差異產(chǎn)生放大的效果，達(dá)到分離分析和測(cè)定的目的。液相色譜與氣相色譜相比，最大的優(yōu)點(diǎn)是可以分離不可揮發(fā)而具有一定溶解性的物質(zhì)或受熱后不穩(wěn)定的物質(zhì)，這類物質(zhì)在已知化合物中占有相當(dāng)大的比例，這也確定了高效液相色譜可分析低分子量、低沸點(diǎn)的有機(jī)化合物，更多適用于分析中、高分子量、高沸吸附色譜法、分配色譜法、空間排阻色譜法、離子交換色譜法、親和色譜法、化學(xué)鍵合相色包括貯液及脫氣裝置、高壓輸液泵和梯度洗脫裝置。貯液裝置用于存貯足夠量、符合hplc要求的流動(dòng)相。高效液相色譜柱填料顆粒比較小，通過柱子的流動(dòng)相受到的流動(dòng)阻力很大，因此需要高將待測(cè)的樣品引入到色譜柱的裝置。液相色譜進(jìn)樣裝置需要滿足重復(fù)性好、死體積小色譜柱是色譜儀的心臟、柱效高、選擇性好、分析速度快是對(duì)色譜柱的一般要求。商品化的hplc微粒填料，如硅膠和以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球（包括離子交換樹脂）等的粒度通常在由于柱效內(nèi)、外多種因素的影響，因此為使色譜柱達(dá)到其應(yīng)有的效率hplc檢測(cè)器分為通用型檢測(cè)器和專用型檢測(cè)器兩類。通用型檢測(cè)器可連續(xù)測(cè)量色譜柱流出物（包括流動(dòng)相和樣品組分）的全部特性變化。這類檢測(cè)儀器包括示差折光檢測(cè)器、介電常數(shù)檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器和磁光旋轉(zhuǎn)檢測(cè)器。這類檢測(cè)器適用范圍廣，但是對(duì)于流流動(dòng)相流速和組成變化的影響，檢測(cè)靈敏度低，不能用于梯度洗脫的分離模式。專用型檢測(cè)器對(duì)樣品中有些軟件可以實(shí)現(xiàn)部分儀器的控制功能。前者即一般的色譜工1六、高效液相色譜的使用中的注意事項(xiàng)1、流動(dòng)相應(yīng)選用色譜純?cè)噭?、高純水或雙蒸水，酸堿液及緩沖液需2、用流動(dòng)相或比流動(dòng)相弱（若為反相柱，則極性比流動(dòng)相大；若為正相柱，則極性比流動(dòng)4、如所用流動(dòng)相為含鹽流動(dòng)相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水（如5%甲醇7、不要在高溫下長時(shí)間使用硅膠鍵合相色譜柱；篇二：分析實(shí)驗(yàn)報(bào)告高效液相色譜學(xué)號(hào)：專業(yè)：年級(jí)班級(jí)：課程名稱：儀器分析實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：液相色譜分析混合樣品中高效液相色譜法：以液體作為流動(dòng)相的色譜法。它是在經(jīng)典液相色譜實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，引入氣相色譜的理論，在技術(shù)上采用高壓輸液泵，高效固定相和高靈敏的檢測(cè)器，而發(fā)展起來的快速當(dāng)兩相做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，這些組分在此兩相中分配反復(fù)進(jìn)行，從幾千次到百萬次，即使組分的通過檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀。三、［儀器和試劑:］2、.選擇合適的流動(dòng)相配比，優(yōu)化色譜條件析）（面積。繪制苯和甲苯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積與相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線5、苯和甲苯混合待測(cè)溶液根據(jù)得到的苯和甲苯混合待測(cè)溶液的液相色譜圖上顯示的峰面積值，從繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線上查分析：本次實(shí)驗(yàn)分別選擇了甲醇：水=60%40%70%30%80%20%勺溶劑配比，通過比較不同溶劑配比5.04.54.03.53.02.52.01.51.00.50.0-0.5分析：在同一色譜操作條件和進(jìn)樣量下，分別測(cè)定試樣溶液中苯和甲苯組分及已知苯和甲苯嚴(yán)格控制且定量進(jìn)樣，就能采用操作、計(jì)算簡(jiǎn)便的標(biāo)準(zhǔn)曲線法得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。若采用歸一化法或內(nèi)標(biāo)法，雖然能得到準(zhǔn)確更高的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，但由于實(shí)驗(yàn)操作、計(jì)算復(fù)雜，不能快速分析，故實(shí)(1)盡量使用高純度試劑作流動(dòng)相，防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測(cè)器噪聲增(2)避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶4.影響分離的因素與提高柱效的途徑1).液體的黏度比氣體大一百倍，密度為氣大兩個(gè)數(shù)量級(jí)，使被測(cè)組分在液體流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體流(4)由于流動(dòng)相的化學(xué)成分可進(jìn)行廣泛選擇，并可配置成二元或多元體系，滿足梯度洗脫的需要，因而提高了高效液相色譜的分辨率(柱效能)；(5)高效液相色譜采用5701m細(xì)顆粒固定相，使流體相在色譜柱上滲透性大大縮篇三：高效液相實(shí)驗(yàn)報(bào)告化學(xué)與環(huán)境化學(xué)科學(xué)學(xué)院分析化學(xué)駱洪偉20144015016高效液相色譜由儲(chǔ)液器，泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成，儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附一解吸的分配過程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信高效液相色譜儀主要包括高壓輸送系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)及高壓輸液系統(tǒng)由貯液器、高壓泵、過濾器和梯度洗脫裝置組成，其核心部件是高壓泵，要求洗脫裝置的作用是在分離過程中，按一定程序連續(xù)改變流動(dòng)相中多種不同性質(zhì)溶劑的配比，以改變流動(dòng)相的極性、離子強(qiáng)度或酸度等，從而提高試樣的分離效率，縮短分析時(shí)間，使色譜峰形得到改善，提高測(cè)定的靈敏度和定量的準(zhǔn)確度。此外，還附有加熱脫氣、超聲波脫氣等裝置，以排除溶解在流動(dòng)相或試液相色譜柱一般采用內(nèi)壁拋光的優(yōu)質(zhì)不銹鋼管或厚壁玻璃管。為使工作壓力不致過高，柱長換樹脂等，因遇到溶劑會(huì)膨脹，所以必須采用勻漿濕法填充。為防止顆粒大的填料先沉降而產(chǎn)生分層現(xiàn)象，可采用等密度溶劑(四氯乙烷和四氯乙烯混合物)配成勻漿。用高壓高效液相色譜檢測(cè)器要求具有靈敏度高、噪聲低、線性范圍寬、響應(yīng)快、死體積小等特點(diǎn)，且對(duì)溫度和流量的變化不敏感。目前，液相色譜常用檢測(cè)器有紫外光度檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器和電(5)有一段時(shí)間沒用，或者換了新的流動(dòng)相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針(7)設(shè)計(jì)走樣方法。點(diǎn)擊file,選取select?users?and?methods,可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立(8)進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法，點(diǎn)擊start。進(jìn)樣，所有的樣品均需過濾完后，點(diǎn)擊postrun,可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余(10)登記。四、注意事項(xiàng)1.泵的使用和維護(hù)注意事項(xiàng)為了延長泵的使用壽命和維持其輸液的穩(wěn)定性，必須按照下列注意事項(xiàng)進(jìn)行操作：①防止任何固體微粒進(jìn)入泵體，因?yàn)閴m?；蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會(huì)磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去流動(dòng)相中的任何固體微粒。流動(dòng)相最好在玻璃容器內(nèi)蒸②流動(dòng)相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動(dòng)相不應(yīng)保留在泵內(nèi)，尤其是在停泵過夜或更長時(shí)間的情況下。如果將含緩沖液的流動(dòng)相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或泄漏，甚至只是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細(xì)晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。因此，必須泵入純水將泵充③泵工作時(shí)要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動(dòng)相被用完，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會(huì)磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，最終產(chǎn)④輸液泵的工作壓力決不要超過規(guī)定的最高壓力，否⑤流動(dòng)相應(yīng)該先脫氣，以免在泵內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響流量的穩(wěn)定性，如果有大量氣泡，泵①?zèng)]有流動(dòng)相流出，又無壓力指示。原因可能是泵內(nèi)有大量氣體，這時(shí)可打開泄壓閥，使泵在較大流量(如5ml/min)下運(yùn)轉(zhuǎn)，將氣泡排盡，也可用一個(gè)50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個(gè)②壓力和流量不穩(wěn)。原因可能是氣泡，需要排除；或者是單向閥內(nèi)有異物，可卸下單向閥，浸入丙酮內(nèi)超聲清洗。有時(shí)可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡，或被鹽的微細(xì)晶?；蜃躺奈⑸锊糠侄氯@時(shí)，可卸下砂③壓力過高的原因是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力在進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須①要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動(dòng)相。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍后就不互溶，使用時(shí)更要引起注意。當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖液混合時(shí)，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時(shí)需特別小心。②梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現(xiàn)性。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫，以辨