海魚(yú)鱗片中提取杉木膠的研究

中國(guó)是世界上最大的魚(yú)類(lèi)產(chǎn)區(qū)。魚(yú)資源豐富。合理使用魚(yú)類(lèi)可以解決環(huán)境污染問(wèn)題。而膠原蛋白及其水解產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與人體皮膚上的膠原結(jié)構(gòu)類(lèi)似,同時(shí)又富含氨基酸及大量羥基,這使得膠原蛋白天生就是作為美容的基礎(chǔ)1材料和方法1.1化鈉ar新鮮魚(yú)鱗;對(duì)硝基苯酚(AR);氫氧化鈉(AR);95%乙醇(AR);鹽酸(AR);碳酸鈉(AR);羥脯氨酸(AR);檸檬酸(AR)1.2sx-4-10傅立葉紅外光譜儀;UV紫外可見(jiàn)分光光度計(jì);冷凍離心機(jī)HC-2518R;馬弗爐SX-4-10;鼓風(fēng)式干燥箱DHG-9075A;722S紫外分光光度計(jì);可調(diào)式封閉電爐;分析天平EL204;恒溫水浴鍋HWS281.3魚(yú)雷成分的測(cè)定水分含量的測(cè)定:直接干燥法1.4脫鈣率的測(cè)定1.4.1鈣離子標(biāo)準(zhǔn)曲線面精確稱(chēng)量基準(zhǔn)試劑無(wú)水碳酸鈣2.5000g,于燒杯中加入少量鹽酸至完全溶解后,定容至500ml容量瓶中,即濃度為2mg/ml濃度的鈣離子溶液,搖勻后備用。準(zhǔn)確吸取0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.0ml的鈣離子標(biāo)準(zhǔn)溶液并參照蔣柏泉等人的方法,配制0.01mol/L的EDTA溶液進(jìn)行滴定。繪制出鈣標(biāo)準(zhǔn)曲線及求取鈣標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程。1.4.2高氯酸溶液的制備準(zhǔn)確稱(chēng)取1.0g魚(yú)鱗,加入5.0ml濃硫酸,并加熱至成黑色粘稠糊狀,繼續(xù)加熱并滴加高氯酸至溶液透明,待其冷卻后稀釋定容至容量瓶,并用滴定。1.4.3脫鈣率的測(cè)定精確移取1.00ml的脫鈣液于錐形瓶中,按照1.3.1的方法滴定,記錄所消耗的EDTA的體積,根據(jù)鈣標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算鈣離子濃度,并計(jì)算脫鈣率1.5提取率測(cè)定1.5.1反應(yīng)時(shí)間對(duì)甲基氨基苯甲醛顯色劑的制備準(zhǔn)確吸取100mg/L羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)工作液0.0、1.0、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5ml分別定容至100ml。其濃度分別為0.0、1.0、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5μg/ml。取1.00ml于比色管中,分別加入1ml檸檬酸緩沖溶液和1ml的氯胺T溶液,充分搖勻后放置在室溫下氧化10min,再加入1ml高氯酸溶液,放置10min,最后加入1ml的對(duì)二甲基氨基苯甲醛顯色劑在65℃水浴下顯色10min。待其冷卻后在561nm處測(cè)量其吸光度,并根據(jù)濃度和吸光度繪制羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線。1.5.2羥脯氨酸溶液的配制準(zhǔn)確稱(chēng)取4.0g魚(yú)鱗(精確至0.0001)于碘量瓶中,加入濃度為3mol/L的硫酸溶液30ml并置于烘箱內(nèi)在105℃下水解16個(gè)小時(shí)后過(guò)濾定容至250ml的容量瓶中,搖勻并吸取1.00ml溶液繼續(xù)稀釋至250ml,測(cè)定樣品的吸光度,代入回歸方程求得羥脯氨酸的濃度C1.5.3硫酸水解液的制備將經(jīng)木瓜酶提取后的膠原蛋白溶液,稀釋定容至100ml,然后移取10ml到碘量瓶中并加入濃度為3mol/L的硫酸溶液30ml并置于烘箱內(nèi)在105℃下水解16個(gè)小時(shí)后加水稀釋至50ml。移取10ml溶液滴加濃度為20%的氫氧化鈉溶液,調(diào)節(jié)pH至6.0后稀釋定容至50ml,測(cè)定樣品的吸光度,計(jì)算羥脯氨酸的含量。1.5.4膠原蛋白含量測(cè)定由于膠原蛋白中羥脯氨酸的含量比較大,所以測(cè)定時(shí)主要以羥脯氨酸的含量為基準(zhǔn)測(cè)定,通過(guò)羥脯氨酸的含量乘以一個(gè)系數(shù),就可得出膠原蛋白的含量。1.6關(guān)于異丙酮的性質(zhì)的研究1.6.1離心組織的制備稱(chēng)取膠原蛋白成品,用0.5mol/L醋酸溶解至6ml,加入10ml的色拉油,然后用組織搗碎機(jī)攪拌10min,攪拌后,溶液均分兩份,轉(zhuǎn)移到10ml刻度離心管中進(jìn)行離心并測(cè)量體積。采用同樣的方法制備出乳化液移入10ml刻度離心管中,測(cè)定初始乳化液體積后將其置于50℃的水浴中一段時(shí)間再測(cè)量最終的乳化液體積并計(jì)算出乳化穩(wěn)定性。1.6.2吸收和保護(hù)性測(cè)定稱(chēng)取一定量的樣品置于干燥過(guò)并已知重量為m1.6.3泡沫和泡沫穩(wěn)定性的測(cè)定配制膠原蛋白溶液100ml,用組織搗碎機(jī)高速攪拌后迅速倒入500ml量筒中。記錄泡沫層體積V2結(jié)果與分析2.1單因素試驗(yàn)的結(jié)果2.2結(jié)果與分析在膠原蛋白最佳提取條件,提取溫度為20℃,木瓜酶濃度3%(wt%),提取時(shí)間36h,固液比1:20。2.3氨基酸組成測(cè)定它們的乳化性和穩(wěn)定性,相差不大。這微小的差別可能是由于其間自身氨基酸組成的微小差異。當(dāng)組成膠原蛋白的氨基酸中親水性基團(tuán)的含量比較高時(shí)可與水形成氫鍵得到比較穩(wěn)定的乳化液相反,乳化性和乳化穩(wěn)定性則相對(duì)降低。2.4吸收和保護(hù)性測(cè)定三種海魚(yú)魚(yú)鱗提取出來(lái)的膠原蛋白其具有的保濕性和吸濕性都比較良好,這將其在化妝品領(lǐng)域上的應(yīng)用提供了依據(jù)且具有一定的應(yīng)用前景。2.5魚(yú)要好黃花魚(yú)的起泡性和泡沫穩(wěn)定性較馬頭魚(yú)和紅杉魚(yú)要好,這應(yīng)該是由于其極性基團(tuán)含量相對(duì)較低,容易形成豐富且穩(wěn)定的泡沫。當(dāng)極性基團(tuán)含量較高時(shí)則不易形成泡沫且穩(wěn)定性較差。3結(jié)論3.1膠原蛋白的最大吸收峰本實(shí)驗(yàn)在190～400nm范圍內(nèi)對(duì)膠原蛋白溶液進(jìn)行紫外掃描,結(jié)果如圖1所示,其在230nm處有最大吸收峰故,李彥春研究認(rèn)為膠原蛋白的吸收峰主要在225nm左右,與實(shí)驗(yàn)測(cè)得結(jié)果基本一致。本實(shí)驗(yàn)所得的膠原蛋白應(yīng)為I類(lèi)型。3.2膠原蛋白的提取所測(cè)得膠原蛋白的特征吸收峰有:3437cm綜上所述,木瓜酶提