第一章實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和技術(shù)第1頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月準(zhǔn)備室培養(yǎng)室細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室生化分析室無(wú)菌室一、實(shí)驗(yàn)室設(shè)置基本實(shí)驗(yàn)室輔助實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備,培養(yǎng)基的配制,洗滌與滅菌等離體材料的無(wú)菌操作,又稱接種室控制條件下的離體培養(yǎng)第2頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月常規(guī)設(shè)備：天平、冰箱、酸度計(jì)、離心機(jī)、純水器二、實(shí)驗(yàn)室所需的設(shè)備、用具第3頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月滅菌設(shè)備：高壓滅菌鍋、干熱消毒柜過(guò)濾滅菌裝置二、實(shí)驗(yàn)室所需的設(shè)備、用具第4頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)容器：培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿等二、實(shí)驗(yàn)室所需的設(shè)備、用具第5頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月無(wú)菌操作設(shè)備：超凈工作臺(tái)二、實(shí)驗(yàn)室所需的設(shè)備、用具第6頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月接種器具：鑷子、剪刀、解剖刀等二、實(shí)驗(yàn)室所需的設(shè)備、用具第7頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月３０cm60cm14０cm定時(shí)器培養(yǎng)設(shè)備：培養(yǎng)箱、培養(yǎng)架等第8頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、常用技術(shù)無(wú)菌接種技術(shù)滅菌技術(shù)洗滌技術(shù)第9頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（一）洗滌技術(shù)第10頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月新購(gòu)玻璃器皿的洗滌：

1%HCl浸泡過(guò)夜洗衣粉刷洗自來(lái)水沖洗蒸餾水漂洗使用過(guò)的玻璃器皿的洗滌：去除酸洗步驟，其它同上有污染物的玻璃培養(yǎng)器皿：高壓滅菌洗衣粉刷洗自來(lái)水沖洗蒸餾水漂洗金屬器具：用酒精擦洗，并保持干燥。第11頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）滅菌技術(shù)第12頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1)接種室的滅菌接種室滅菌紫外燈照射(無(wú)菌室、超凈臺(tái))：波長(zhǎng)260nm，距離小于1.2m，15-30min。每周一次.熏蒸滅菌(無(wú)菌室):100ml/20m2甲醛+5g/20m2

高錳酸鉀；新的實(shí)驗(yàn)室或長(zhǎng)期不用的實(shí)驗(yàn)室.濕度較大的季節(jié)要定期進(jìn)行.噴霧消毒(超凈臺(tái);無(wú)菌室)：75%酒精或3%來(lái)蘇兒第13頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2)接種工具、容器的滅菌干熱滅菌：160-180℃,1.5-2.0h濕熱滅菌：121℃,20-30min在無(wú)菌操作時(shí)，把鑷子、剪刀、解剖刀等浸入95%的酒精中，使用之前取出在酒精燈火焰上灼燒滅菌。冷卻后，立即使用。操作中可采用250或500ml的廣口瓶，放入95%的酒精，以便插入工具。第14頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3)培養(yǎng)基的滅菌◆高壓濕熱滅菌：121℃,18-20min液體體積(mL)所需的時(shí)間(min)（121℃）20-501560-15020150-50025500-100030第15頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4)不耐熱類物質(zhì)的滅菌過(guò)濾滅菌（Filtersterilization）：某些激素（如天然生長(zhǎng)素IAA、玉米素ZT、赤霉素GA等）、維生素、抗生素等不耐熱或射線照射的物質(zhì)。第16頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

Filtersterilization---過(guò)濾滅菌濾膜?0.45μm以下1.過(guò)濾器先滅菌，滅菌溫度121℃，20min。2.細(xì)菌濾膜的網(wǎng)孔直徑一般小于0.45μm和0.22μm第17頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月Filtersterilization第18頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月滅菌的原則：消毒劑與外植體應(yīng)接觸足夠長(zhǎng)的時(shí)間以除去外植體表面的微生物，但應(yīng)盡量減少對(duì)外植體細(xì)胞的破壞。4)外植體的滅菌第19頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月常用外植體滅菌步驟沖洗植物材料除去泥土等大的顆粒；切成適宜的大小;

浸入70-75％乙醇，0.5-1min；用2-5％NaClO溶液（加1滴表面活性劑）表面消毒5-30min；或HgCl2(0.1–0.2%)2-10min

用無(wú)菌水沖洗至少3遍,每次1-2min;

滅菌的材料可用無(wú)菌紙吸干。第20頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）無(wú)菌接種技術(shù)第21頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.外植體的選擇常用外植物體的來(lái)源自然環(huán)境下生長(zhǎng)的植物無(wú)菌環(huán)境下生長(zhǎng)的植物溫室環(huán)境下生長(zhǎng)的植物第22頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.外植體的選擇來(lái)源：健壯、無(wú)病蟲害、發(fā)育正常大?。阂暸囵B(yǎng)目的而定部位（生理狀態(tài)及發(fā)育年齡）取材季節(jié)：生長(zhǎng)開始的季節(jié)。（蘋果）第23頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月組織清洗

70%酒精浸10～30s

滅菌劑處理無(wú)菌水涮洗Note:此步驟應(yīng)在超凈臺(tái)上完成2、外植體無(wú)菌處理第24頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3、無(wú)菌接種第25頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月接種前的準(zhǔn)備第26頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月酒精擦拭旋轉(zhuǎn)灼燒取外植體接種蓋好瓶塞修剪外植體接種第27頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第28頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)物污染可能的原因

培養(yǎng)容器培養(yǎng)基本身外植體接種室的環(huán)