第一章微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)第1頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)微生物的純培養(yǎng)技術(shù)一.純培養(yǎng)的分離方法（一）稀釋法（二）平板劃線分離法（三）單細(xì)胞（單孢子）挑取法（四）利用選擇培養(yǎng)基分離法二.無菌技術(shù)三.微生物的保藏技術(shù)第2頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月幾個(gè)概念：純培養(yǎng)技術(shù)：把特定微生物從自然界混雜存在的狀態(tài)中分離、純化出來的技術(shù)。純培養(yǎng)（pureculture）：微生物學(xué)中將在實(shí)驗(yàn)室條件下，從一個(gè)細(xì)胞或一種細(xì)胞群繁殖得到的后代，稱為純培養(yǎng)?；旌吓囵B(yǎng)物：含有兩種以上微生物的培養(yǎng)物。二元培養(yǎng)物：只含有二種微生物，并保持二者之間特定關(guān)系的培養(yǎng)物。第3頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月平板（cultureplate）：即培養(yǎng)平板的簡(jiǎn)稱，指熔化的固體培養(yǎng)基倒入無菌平皿，冷卻凝固后，盛有固體培養(yǎng)基的平皿。菌落（colony）：生長(zhǎng)在固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部，來源于一個(gè)細(xì)胞、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的、肉眼可見的子細(xì)胞群體。菌苔（lawn）：眾多菌落在固體培養(yǎng)基表面連成一片時(shí)，稱為菌苔。第4頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一.純培養(yǎng)的分離方法

（一）稀釋法1.固體稀釋倒平板法：將待分離材料作一系列稀釋（1/10，1/100，1/1000，…），→取不同吸收液各少許與已熔化并冷卻至45℃左右的瓊脂培養(yǎng)基混合，→搖勻后傾入滅菌過的培養(yǎng)皿中→凝固后保溫培養(yǎng)一定時(shí)間→挑取單個(gè)菌落，重復(fù)以上過程→獲得純培養(yǎng)。第5頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第6頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.涂布平板法：與上法相似，不同之處在于：先制平板→將一定量的某一稀釋度的樣品懸液滴加在平板表面→用無菌涂棒將菌液涂勻→培養(yǎng)→挑取單個(gè)菌落，重復(fù)以上過程→獲得純培養(yǎng)。第7頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.液體稀釋法：適于細(xì)胞較大的微生物待分離材料→接種于培養(yǎng)液中→培養(yǎng)→測(cè)定或估計(jì)單位容積中的含菌數(shù)目→稀至兩、三滴液體中只含有一個(gè)微生物個(gè)體→每次取一滴至另一盛有新鮮培養(yǎng)基的試管中→搖勻，培養(yǎng)→觀察→大多數(shù)試管無微生物生長(zhǎng)，少數(shù)管底有一菌落，可能由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來。第8頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

4.稀釋搖管法：適于分離嚴(yán)格厭養(yǎng)菌。一系列盛由固體培養(yǎng)基的試管→加熱熔化→冷卻至50℃左右℃保溫℃加入待分離材料進(jìn)行梯度稀釋→迅速搖勻→冷凝→傾注一層滅菌過的石蠟→培養(yǎng)→挑取單個(gè)菌落。；第9頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第10頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）平板劃線分離法方法：制平板→用接種環(huán)沾取少許待分離材料→在培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線，隨著接種環(huán)的移動(dòng)，微生物得以分散→培養(yǎng)→在畫線的后面部位可形成單獨(dú)的菌落→挑取單個(gè)菌落→培養(yǎng)→獲得純培養(yǎng)第11頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第12頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）單細(xì)胞（單孢子）挑取法適用于分離混雜微生物中弱勢(shì)群體。方法：（1）用顯微操作儀在顯微鏡下用毛細(xì)吸管或顯微針、鉤、環(huán)等挑取→獲得純培養(yǎng)。（2）用一般顯微鏡，將一滴經(jīng)適當(dāng)稀釋后的菌液置于載玻片上，選取只含有一個(gè)細(xì)胞的液滴進(jìn)行純培養(yǎng)的分離。此法多限于高度專業(yè)化的科學(xué)研究中采用。第13頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（四）利用選擇培養(yǎng)基分離法1.抑制其它微生物的生長(zhǎng)：控制pH、溫度，加抗生素等

2.富集培養(yǎng)：光照、溫度、高壓、紫外線、氧氣、營(yíng)養(yǎng)等。通過設(shè)置有利于某些或某一微生物生長(zhǎng)的特定條件，使適應(yīng)該條件的微生物旺盛生長(zhǎng)。此法易分離到某些特定微生物或弱勢(shì)微生物。第14頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第15頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二.無菌技術(shù)1.常用器具的滅菌常用器具：試管、燒瓶、培養(yǎng)皿、涂棒、移液管、接種環(huán)等方法：這些器具在滅菌前須先進(jìn)行包扎或裝入特定容器中。（1）高壓蒸汽滅菌0.1MPa121.3℃15~30min（2）高溫干熱滅菌160~170℃2h（3）燒灼滅菌第16頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.培養(yǎng)基的滅菌：高壓蒸汽滅菌過濾滅菌：適于不耐溫的材料3.無菌操作：在火焰旁或無菌箱、超凈工作臺(tái)上操作。第17頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第18頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三.微生物的保藏技術(shù)（一）保藏目的在菌種一定時(shí)間內(nèi)不死亡、不變異（丟失重要的生物學(xué)性狀）、不被污染。（二）保藏原理根據(jù)微生物的生理生化特性，人工創(chuàng)造不適宜微生物生長(zhǎng)繁殖的條件，降低代謝能力，以保持其遺傳性、減少變異性，達(dá)到長(zhǎng)期保藏的目的。休眠或半休眠第19頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）保藏方法

1.低溫保藏法：（1）傳代培養(yǎng)保藏(冰箱保藏法、定期移植法）（2）超低溫保藏法液氮（-195℃）低溫冰箱

2.干燥保藏法：沙土管保藏法

3.隔絕空氣保藏法冷凍真空干燥保藏法第20頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)顯微技術(shù)一.普通光學(xué)顯微鏡（一）油鏡的工作原理

加油原因：

1.增加視野亮度

2.增加分辨率：最小可分辨距離=λ/2NANA=n.Sinα第21頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）使用方法第22頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、暗視野顯微鏡觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性三、相差顯微鏡觀察細(xì)微結(jié)構(gòu)四、熒光顯微鏡特殊成分第23頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第24頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第25頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第26頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

第27頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月五.電子顯微鏡以電子束為光源，因波長(zhǎng)縮短，故分辨率提高。透射電鏡的樣品制備及觀察：

1.金屬網(wǎng)的處理載網(wǎng)200~400目的銅網(wǎng)

2.支持膜的制備塑料膜、碳膜、金屬膜

3.將支持膜轉(zhuǎn)移到至載網(wǎng)上

4.制片：滴液法、超薄切片法、復(fù)型法、冰凍蝕刻法等

5.觀察

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第28頁(yè)，課件共30頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第29頁(yè)，課件共